黑莓（萨尼）和红树莓（哈瑞特斯）对凝血作用的影响

顾海鹏，王佳佳，顾雪竹，康文艺＊

（1.河南大学 中药研究所，河南 开封475004；2.中国中医研究院 中药研究所，北京100700）

黑莓（Rubus spp.blackberry）、红树莓（Rubus spp.raspberry）均为蔷薇科（Rasaceae）悬钩子属聚合果类植物。其果实具很高的药用价值和营养价值，可改善人体新陈代谢、清除自由基、延缓衰老、增强免疫力等功能，特别具有降低胆固醇、防治心脏疾病、抗癌（降低化疗引起的毒副作用）和抗血栓的功效［1－4］，果实、种子、根及叶均可入药。药理研究［5－11］发现，黑

莓、红树莓均具有较强的抗氧化活性。树莓具有抗炎、抗菌、抑癌、降糖、减肥、抗氧化等多种生物学作用。国内外对黑莓、红树莓报道多集中在其抗氧化活性，仅有树莓对2型糖尿病肾病的肾功能具有保护作用［12］，对黑莓的挥发性成分［13－14］研究报道及顾 姻［15］提到的悬钩子属植物药用种类的临床使用范围。关于黑莓、红树莓对凝血作用的影响未见相关报道。

黑莓、红树莓在我国分布广泛，资源丰富，其不仅具有丰富的营养价值，还具有特殊的功效，为进一步开发其利用价值，我们对其浸膏进行了血液凝固活性的探究。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

TGL-16高速离心机（江苏金坛中大仪器厂）；秒表计时器、LRH-150生化培养箱（上海一恒科技有限公司）；注射生理盐水（山东齐都药业有限公司，2012053107）；38g／L枸橼酸钠溶液、2.775g／L氯化钙溶液、维生素k1注射液（天津药业集团新郑股份有限公司，1109051）；注射用灯盏花素（湖南恒生制药有限公司，20110202）。

1.2 动物与材料

獭兔，雄性，体质量2.0～2.5kg，由河南大学药学院中药研究所提供（医动字09-1-2号）。

黑莓（萨尼）、红树莓（哈瑞特斯）于2011年8月采集于河南省新乡市封丘县种植基地，由河南大学中药研究所李昌勤副教授鉴定为蔷薇科（Rasaceae）悬钩子属聚合果类植物黑莓（Rubus spp.blackberry）品种萨尼（Shawne）及红树莓（Rubus spp.raspberry）品种哈瑞特斯（Harrywaters）的果实。标本保存于河南大学中药研究所。

1.3 实验方法

1.3.1 黑莓、红树莓的提取 新鲜黑莓（萨尼）果实10.04kg、新鲜红树莓（哈瑞特斯）果实2.75kg，用甲醇室温下浸泡2次，每次3d，合并提取滤液后浓缩，得到甲醇总浸膏。总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，减压浓缩得到黑莓石油醚部位（几乎没有）、乙酸乙酯部位27.5g、正丁醇部位195.7g；红树莓（哈瑞特斯）石油醚部位109.2mg、乙酸乙酯部位8.2g、正丁醇部位100.2g。

1.3.2 对家兔体外血浆复钙时间的影响 取家兔耳缘静脉血3.6mL，置含38g／L枸橼酸钠400μL的4mL离心管中，混匀，1 000r／min离心15min，取上清液备用。设定样品组、灯盏花素组、维生素k1组、空白组。取1.5mL道夫管，样品组加入血浆、乙酸乙酯、正丁醇溶液各0.1mL；维生素k1组加入血浆、维生素k1注射液各0.1mL；灯盏花素组加入血浆、灯盏花素注射液各0.1mL；空白组加入血浆、空白溶剂各0.1mL，于37℃温育1min后分别向每管加入2.775g／L CaCl2溶液0.1mL计时，直到检测到纤维蛋白丝时停止计时。维生素K1、灯盏花素组重复3次，样品组重复6次，求算术平均值和标准差，即为血浆复钙时间。结果采用算术平均值和标准差表示，数值统计采用SPSS 17.0软件单因素方差分析法（One-Way ANOVA）比较其显著性差异。

2 结果与讨论

黑莓（萨尼）、红树莓（哈瑞特斯）提取物对体外血浆复钙时间的影响结果见表1。

表1 黑莓（萨尼）、红树莓（哈瑞特斯）提取物对体外血浆复钙时间的影响（¯x±s，s）

由表1可以看出，与空白组比较，黑莓（萨尼）、红树莓（哈瑞特斯）正丁醇部位和红树莓（哈瑞特斯）乙酸乙酯部位可较显著延长体外血浆复钙时间（0.001＜P＜0.01）；黑莓（萨尼）乙酸乙酯部位可极显著缩短体外血浆复钙时间（P＜0.001）。由表中数值看出，黑莓（萨尼）和红树莓（哈瑞特斯）正丁醇部位及红树莓（哈瑞特斯）乙酸乙酯部位均与各组灯盏花素血浆复钙时间接近，可提示其具有抗凝血功效。黑莓（萨尼）乙酸乙酯部位血浆复钙时间与其维生素k1接近，可提示其具有止血作用。

血液凝固过程是血浆中凝血因子受到内源性或外源性激活引起的一系列化学连锁反应，血浆复钙时间反应的是内源性凝血系统功能。维生素k1为人体合成凝血因子的重要来源，临床可用于治疗维生素k1缺乏性出血及逆转抗凝血药物过量引起的出血症。灯盏花素为中药提取制剂，有效成分为野黄芩苷，主要有抗凝血、抗血栓形成，改善血液流变性及微循环，增加脑血流量，抗心肌缺血，提高机体耐缺氧能力等作用。因此，我们以维生素k1注射液和灯盏花素注射液作为阳性对照组与黑莓（萨尼）和红树莓（哈瑞特斯）提取物对血液凝固作用的活性作比较。

3 结论

由体外实验结果表明，黑莓（萨尼）和红树莓（哈瑞特斯）乙酸乙酯、正丁醇部位均具有较好的体外抗凝血功效或止血作用。筛选黑莓（萨尼）和红树莓（哈瑞特斯）提取物的活性部位，对分离其凝血或抗凝血活性有效成分具有一定的指向性，对于开发悬钩子属植物药用价值有重要意义。

［1］Turemis N，Kafkas E，Kafkas S，et al.Determination of aroma compounds in blackberry by GC／MS analysis［J］.Chem Nat Comp，2003，39（2）：174－176.

［2］吴文龙，顾姻.新经济植物黑莓的引种［J］.植物资源与环境学报，1994，3（3）：45－48.

［3］边磊，马永昆，沈凯娇，等.顶空固相微萃取－气质联用分析黑莓的香气成分［J］.江苏农业学报，2010，26（1）：178－181.

［4］宋建强，王华，胡劲光，等.黑莓起泡酒香气成分的GC／MS分析研究［J］.食品与发酵工业，2008，34（8）：145－149.

［5］Patel A V，Rojas-vera J，Dacke C G.Therapeutic constituents and actions of rubus species ［J］.Curr Med Chem，2004，11（11）：1 501－1 512.

［6］Ryan T，Wilkinson J M，Cavanagh H M.Antibacterial activity of raspberry cordial in vitro［J］.Res in Vet Sci，2001，71（3）：125.

［7］张善玉，朴惠顺，姜艳玲，等.红树莓抗肿瘤作用的初步研究［J］.李时珍国医国药，2007，18（2）：380－381.

［8］王敏，林琳，李晓，等.树莓液治疗2型糖尿病30例分析［J］.中医药学刊，2003，21（9）：1 437－1 438.

［9］Morimoto C，Satoh Y，Hara M，et al.Anti-obese action of raspberry ketone［J］.Life Sci，2005，77（2）：194－204.

［10］Viljanen K，Kylli P，Kivikari R，et al.Inhibition of protein and lipid oxidation in liposomes by berry phenolics［J］.J Agric Food Chem，2004，52（24）：7 419－7 424.

［11］孙希云，赵秀红，张琦，等.红树莓花色苷粗提物抗氧化性能与抑菌作用研究［J］.食品工业科技，2009，30（3）：132－135.

［12］王敏，王芝兰，边晓燕 ，等.树莓液对2型糖尿病肾病大鼠肾功能的保护作用［J］.中医药学报，2010，38（5）：41－43.

［13］王佳佳，王金梅，陈龙，等.HS-SPME／GC-MS法分析黑莓（萨尼）果实中挥发性成分［J］.河南大学学报：医学版，2012，31（1）：27－29.

［14］张一冰，祈献芳，王佳佳，等.HS-SPME／GC-MS法分析黑莓干红酒中挥发性成分［J］.河南大学学报：医学版，2012，31（1）：32－34.

［15］顾姻.悬钩子属植物资源及其利用［J］.植物资源与环境，1992，1（2）：50－60.