竹节参总皂苷的抗肿瘤作用和毒性研究

邓旭坤，米 雪，蔡 俭，尹文仲，李 游，赵碧群，蒋 捷，蔡 爽，吴 非

(1中南民族大学药学院，武汉430074;2湖北民族学院附属医院，恩施445000)

竹节参，又名竹节三七、竹节人参、白三七，系五加科(Araliaceae)人参属植物竹节参 Panax japonicus C.A.May.的干燥根，为常用中药，味甘、微苦、性温，具有散瘀止血、消肿止痛，祛痰止咳、补虚强壮的功效.用于痨嗽咯血、跌扑损伤、咳嗽痰多、病后虚弱等症［1，2］.现代研究表明，竹节参主要的活性成分为皂苷类，尚含少量挥发油、多糖和氨基酸［3］，对中枢神经系统、免疫系统及心血管系统具有广泛的药理作用［4-7］.肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一，在世界肿瘤相关的死亡中排名第三，严重威胁人类生命健康［8］.切除和移植肝脏是传统的肝癌治愈方法，但复发率较高［9］，且约有80%患者确诊时已无法手术，均大大降低了患者的生存率［10］.目前抗肿瘤药物中化学药品研发费用昂贵，副作用较大，患者较难耐受;而中草药中的活性化学成分来源广泛，毒副作用较小，备受学者们关注.基于对竹节参总皂苷体内抗肿瘤药理研究较少，本研究观察了竹节参总皂苷对移植性H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制和毒性作用.

1 材料与方法

1.1 药品、细胞和动物

竹节参采自湖北省宜昌市五峰县种植基地，经湖北省宜昌市药检所鉴定.5-氟尿嘧啶(阿拉丁，批号5402)，氯化钠注射液(武汉滨湖双核药业有限责任公司)，其他为市售分析纯试剂.SPF级昆明种雄性小鼠(18-22 g，湖北省疾病预防控制中心，4200400081).H22肝癌细胞购于武汉大学中国典型培养物保藏中心.

1.2 样品制备

总皂苷的提取:称取竹节参药材粉末，置圆底烧瓶中，加10倍量的60%乙醇于80℃加热回流2 h，共提取3次.回收乙醇至无醇味，加水稀释至0.2 g/mL待用.称取500 g D101大孔树脂用95%乙醇浸泡2 h后装柱，用超纯水冲洗大孔树脂2 BV至无醇味.将生药0.2 g/mL的竹节参提取液缓慢加入大孔树脂中吸附2 h.用超纯水冲柱2 BV至无醇味，以3 BV 70%乙醇洗脱，收集液体，回收溶剂，得总皂苷粉末［11-13］.用生理盐水溶解，配制浓度依次为 2，4，8 mg/mL，一次性滤膜过滤后分装于洁净试管，4℃保存.

1.3 移植性H22荷瘤小鼠模型的建立

取生长旺盛无溃破的荷H22腹水瘤小鼠，颈椎脱臼处死，在超净工作台上从腹腔抽取乳白色瘤液，经台盼蓝染色确认细胞状态良好后，用无菌氯化钠注射液稀释为1×106/mL的细胞悬液.于小鼠右前肢腋窝皮下接种0.2 mL.

1.4 动物分组与给药

接种后将小鼠随机分为5组，每组10只.分别为模型对照组(NS，ip)，阳性组(5-FU，20mg/kg，ip)，竹节参剂量组(40，80，160mg/kg，ip).接种瘤液24 h后按0.02 mL/g给药，每天1次，连续12 d，观察记录各组小鼠生存状况并称重.

1.5 指标检测

小鼠于末次给药后禁食不禁水12 h以上，次日处死，剥离瘤块、胸腺和脾脏，分别称重，根据下式计算抑瘤率和胸腺、脾脏指数.

抑制率(%)=(平均瘤重模型对照组－平均 瘤重实验组)/平均瘤重模型对照组×100%，

胸腺指数=10×胸腺重量(mg)/实验后体重(g)，

脾脏指数=10×脾脏重量(mg)/实验后体重(g).

1.6 数据处理

2 结果与分析

2.1 竹节参总皂苷对移植性H22荷瘤小鼠肿瘤抑制作用

竹节参总皂苷对H22荷瘤小鼠抑制作用见表1.由表1可见，竹节参总皂苷对荷瘤小鼠表现出明显的抑瘤作用，可使其瘤重明显减轻:与模型对照组相比，竹节参总皂苷在40～160 mg/kg剂量范围内对H22荷瘤小鼠肿瘤生长抑制差异有显著性(P＜0.01)，在160mg/kg时的抑瘤效果最好达48%.

表1 竹节参总皂苷对H22荷瘤小鼠肿瘤生长抑制作用Tab.1 The inhibitory effect of total saponins of Panax japonicus on growth of H22 tumor transplanted in mice

2.2 竹节参总皂苷对H22荷瘤小鼠免疫器官的重量及其指数的影响

竹节参总皂苷对H22荷瘤小鼠免疫器官的重量及其指数的影响结果见表2.由表2可见，空白组及竹节参总皂苷各剂量组荷瘤小鼠体重增加较为明显，而5-FU组小鼠体重增加较少，说明竹节参总皂苷在40～160 mg/kg剂量范围内对小鼠的毒性作用较小.

就竹节参总皂苷对荷瘤小鼠的免疫器官影响而言，与模型空白组相比，5-FU组小鼠的胸腺、脾脏及指数显著低于生理盐水组小鼠(P＜0.01)，显示5-FU和其他化疗药物一样，对动物的免疫系统具有抑制作用.而竹节参总皂苷三个剂量组小鼠的胸腺、脾脏及其指数均有明显增加作用.说明竹节参对小鼠的毒性作用较小.

表2 竹节参总皂苷对H22荷瘤小鼠免疫器官重量及指数的影响Tab.2 The effect of total saponins of Panax japonicus on immune organ weight and immune indix of H22 mice

3 结语

竹节参含有多种化学成分，主要的活性成分为皂苷类，粗皂苷含量约为23.6%［14］.研究表明诸多皂苷类成分如人参皂苷、重楼皂苷、黄芪皂苷、九节龙皂苷、榼藤子皂苷［15］等，对肿瘤生长有抑制作用，并能够诱导肿瘤细胞凋亡.为评价竹节参的抗肿瘤作用，本实验从整体的角度观察了竹节参总皂苷对移植性H22荷瘤小鼠肿瘤生长的作用，结果表明竹节参总皂苷能显著的抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长，具有显著的体内抗肿瘤作用，且没有常见化疗药所特有的副作用如明显的体重减轻，抑制免疫系统等，这对肿瘤的治疗具有重要的意义，其作用机制有待进一步的研究.

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