青鱼“出血症”的病理形态学观察

王荣华，陈 乘，刘小燕* 1，谭 情，刘 集,文祝友，钟 蕾，罗方兴

(湖南农业大学a.动物科技学院，b.科技师范学院，中国 长沙 410128)

青鱼(Mylopharyngodonpiceus)是中国主要淡水养殖鱼类之一，与鲢鱼(Hypophthalmichthysmolitrix)、鳙鱼(Aristichthysnobilis)、草鱼(Ctenopharyngodonidellus)合称“四大家鱼”[1]．青鱼肉质细嫩鲜美，蛋白质含量超过鸡肉，是淡水鱼中的上品．由于其生长速度快，肉质细嫩，味道鲜美，一直以来受到人们的青睐．近年来，随着青鱼养殖范围、养殖规模、养殖密度的增大，青鱼的病害问题不断发生，出血病[2]、肠炎病[3]、肝胆综合症[4-5]和肠道败血症[6]等疾病严重制约了青鱼养殖业的健康发展．2011年6月，长沙望城某渔场出现大批量青鱼死亡，以体表多处出血、肛门红肿等为主要症状．因该病发病急，死亡率高，给青鱼养殖户带来了巨大的经济损失．本文拟对发病青鱼各组织器官进行病理组织学研究，为弄清该病的发病机理提供理论依据．

1 材料与方法

1.1 实验动物

2011年6月～2011年10月，青鱼病鱼(平均体长43±2 cm，平均体重1 300±100 g),取自望城县乔口青鱼养殖基地．

1.2 剖检及病理组织学观察

对患有严重出血症状的濒死青鱼进行临床观察，并解剖、观察其内脏变化．取病鱼的鳃、肝、肾、脾、肠等组织，用体积分数为10%的福尔马林固定，经脱水、透明、包埋、切片和H·E染色后，在Motic光学显微镜下观察其病理组织变化．

2 观察结果

2.1 临床症状与病理剖检变化观察

发病前期，病鱼体色发黑变暗，常浮游于水面，动作迟钝，离群独游，不摄食．病鱼皮肤表面有多处充血(图1a)；鳃盖、鳍条基部充血严重(图1b)，肛门红肿；解剖可见肠道充血、出血，肠壁较薄，弹性尚好，肠腔内无食物，严重者肠腔内有大量血水及成片脱落的肠黏膜碎片(图1c)；病鱼鳃丝严重充血，呈暗红色，鳃丝上有淤斑(图1d )；肌肉严重充血(图1e)；腹腔内有含血积液；肝脏肿大，质地脆，呈土黄色，表面有出血斑点；脾脏肿大、充血，颜色加深(图1f)．

图1 a.病鱼体表多处严重充血、出血；b.鳃盖充血；c.肠道内无食物，肠腔内有大量血凝块；d.鳃丝充血，呈暗红色；e.肌肉充血；f.肝脏肿大，质地脆Fig.1 a.Severe hyperemia and haemorrhage appeared on fish surface; b.Hyperemia on opercular; c.No food in intestine and filled with blood clof; d.Hyperemia on gill, dark red; e.Hyperemia on muscle; f.Hepatomegaly texture partial crisp

2.2 病理组织学变化观察

前肠：固有层严重充血、水肿、坏死，严重病鱼可见大面积出现核浓缩以及核偏于一侧，细胞胞浆及胞核染色质减少，逐渐溶解、消失，使整个细胞淡染，只留下一个细胞轮廓(图 2a )；肠粘膜上皮细胞全部脱落, 留下祼露的固有膜， 基底膜排列紊乱,大量细胞空泡变性，炎性白细胞浸润．绒毛之间间距变小(图2b)．

后肠：肠黏膜上皮细胞脱落，固有膜严重充血、出血, 组织疏松水肿(图2c)；腺体上皮细胞、杯状细胞数量减少，肠道黏膜下层水肿，血管扩张充血、出血(图2d)．

图2 a.前肠固有层细胞充血，坏死400×； b.前肠绒毛上皮细胞坏死脱落，毛细血管充血严重，绒毛之间有一细菌团块400×； c.后肠绒毛上皮细胞坏死脱落100×； d.后肠细胞变性、坏死，大量毛细血管有淤血400×Fig.2 a.Hyperemia and necrosis of anterior intestine 400×; b.Epithelial cells cytoclasis and catfish in anterior intestine, serious hyperemia on capillary 400×; c.Epithelial cells cytoclasis and catfish in hindgut 100×; d.degeneration, necrosis of hindgut cells and passive congestion in capillary 400×

肝：肝细胞肿大，严重变性、坏死，大范围空泡化，排列不紧密，并有少量的血细胞和炎性细胞浸润其中；细胞核染色质凝缩或裂解成大小不等的深染团块，甚至整个细胞的染色质溶解消失，只剩下核影(图3a)．

图3 a.肝细胞肿胀，空洞变性400×；b.远曲小管上皮细胞水肿变性，形成“花朵状”细胞400×；c.肾小囊扩张，肾间质小血管和毛细血管轻度充血400×；d.脾淋巴细胞、网状内皮细胞坏死400×；e.鳃小片基部变性，坏死400×；f.细胞组织溶解消失400×Fig.3 a.Liver cell swelling, degeneration 400×; b.Degeneration and cellular necrosis of renal distal convoluted tubule, forming a “flower ” cell 400×; c.Renal capsule expanded, mild congestive on Renal interstitial small blood vessels and capillaries 400×; d.The lymphocyte and reticuloendothelial cells were severe necrosis 400×; e.The base of gill chip degeneration, necrosis 400×; f.Lysed cells tissues 400×

肾：肾间质小血管和毛细血管轻度充血，远曲小管上皮细胞水肿变性，染色质溶解形成空泡，细胞核固缩并被挤压在外围，形成“花瓣状”(图3b)；肾小囊扩张，肾小球血管内充满红细胞，上皮细胞和足细胞肿胀(图3c)．

脾：淋巴细胞染色质浓缩，许多细胞核碎裂，大量淋巴细胞坏死，细胞数量稀少；脾髓红细胞大量减少；网状内皮细胞核染色质聚集，裂解(图3d)．

鳃：鳃小片基部变性，坏死，甚至脱落；毛细血管明显充血；局部的鳃小片相互融合成板块状(图3e)．

肌肉：真皮下结缔组织和肌纤维染色变深，混浊肿胀，玻璃样变性，横纹模糊、消失，甚者肌纤维溶解、断裂、坏死；细胞完全溶解消失，仅留下组织轮廓(图3f)．

3 分析与讨论

3.1 分析

青鱼出血症的主要病理学变化表现为全身多部位的细胞肿胀、变性坏死、脱落，尤其是肠、肾、肝等器官受损严重，这与发生在异育银鲫[7]、鲤鱼[8]和团头鲂[9]的报道基本相同．鱼体肌肉、肠、肝、肾和鳃等器官的毛细血管扩张、充血，组织变性、坏死,引起鱼体许多部位出现出血斑点．在组织病理上则表现出形成微血栓，使得参与血液循环的血量大量减少；另一方面，微血栓的形成阻碍了微循环，正常的代谢受阻，引起脏器组织梗死样病变，而使相关器官发生了严重的机能和物质代谢的障碍, 加速病鱼的死亡．肠道上皮细胞变性、坏死，脱落，细胞核破裂、溶解；固有膜和粘膜下层毛细血管扩张淤血，排列紊乱、扭曲成空泡状，有的甚至溶解坏死．这些病变严重影响了肠道的消化和吸收功能，使鱼的摄食能力下降，这可能是病鱼肠道内没有食物的原因；鳃小片坏死变性，和邻近鳃小片融合成板块状，使鱼的呼吸作用和鳃的渗透调节作用受到影响，病鱼因缺氧造成组织器官呼吸障碍而能量不足，甚至代谢紊乱，从而加速了病鱼的死亡．

3.2 讨论

本研究中患病青鱼表现出的体色发黑，体表、鳍条基部、鳃盖等部位有出血斑，肛门红肿，肝脏肿大，质地变脆等临床症状与朱成科等人[10]报道的南方鲇幼鱼细菌性败血症的症状基本相似．关于该病的致病病原，到目前为止，少有人研究．翟子玉等研究发现，青鱼出血病致病病原为一种RNA病毒,属于呼肠弧病毒科[11]．然而， 2010年，秦国民[12]，张波[13]等报道青鱼出血病是感染嗜水气单胞菌所引起．从本研究收集到的病例来看，养殖户在养殖过程中曾饲喂过多种抗生素，但其防治效果均不理想；且本实验组成员从发病的病鱼内脏中并没有分离到病原细菌，从治疗诊断角度考虑，不排除病毒感染的可能．本研究组成员将会对其发病原因进行进一步的探讨．

致谢：衷心感谢动物科技学院陈可毅教授在病理方面的指导!

参考文献：

[1] 明建华,叶金云,张易祥,等. 青鱼对8种饲料原料中营养物质的表观消化率[J].动物营养学报, 2012,24(10):2050-2058.

[2] 卢新华,方爱萍,张根芳.青鱼出血病及其防治[J].内陆水产, 2002(3):36.

[3] 孙建中,刘家玉.青鱼出血病、肠炎病及其免疫[J].淡水渔业, 1982(5):23-25.

[4] 翟子玉,柯鸿文,俞豪祥,等.青鱼出血病的初步研究[J].水产科技情报, 1985(1):9-12.

[5] 卢新华,方爱萍,张根芳. 青鱼出血病及其防治[J].内陆水产, 2002(3):36.

[6] 徐君辉. 青鱼肠道败血病的防治[J].湖南农业, 2011(6):25.

[7] 孙其焕. 异育银鲫溶血性腹水病病原的研究[J].水产学报, 1991,15(2):130-139.

[8] 汪开毓. 鲤鱼细菌性败血症的病理学研究[J].四川农业大学学报, 2004,3(22):257-261.

[9] 何利君,廖利坤,袁金凤,等. 团头鲂细菌性败血症的病理学研究[J].西南农业大学学报：自然科学版, 2006,26(3):483-485,490.

[10] 朱成科,周晓扬,张其中. 南方鲇幼鱼细菌性败血症病原与组织病理[J].中国水产科学, 2011,18(2):360-370.

[11] 瞿子玉,陈慧达,郭海燕,等.青鱼出血病病毒的分离和鉴定[J].水产科技情报, 1993,20(1):20-22.

[12] 秦国民,张晓君,陈翠珍,等. 草鱼和青鱼细菌性败血感染症的病原菌研究[J].江苏农业科学, 2010(1):236-239.

[13] 张 波,曾令兵,罗晓松,等.青鱼肠道出血症病原菌的分离与鉴定[J].华中农业大学学报, 2010,29(5):607-612.