松茸超临界CO2提取物的抗氧化活性研究*

张丽平，蒋 旎，余晓琴

(1.成都纺织高等专科学校染化系，四川 成都 611731;2.四川省食品药品检验所，四川 成都 610097)

松茸、又名松蕈，被誉为“食用菌之王”，营养丰富，含多种氨基酸和维生素，同时具有防辐射、降血脂、增强免疫等功效[1]。松茸具有的生理功能与其含有多种抗氧化活性物质有一定的相关性。

目前，虽然有多种生物的、化学的鉴别天然抗氧化剂的抗氧化活性的方法，但大多数方法都是从一个角度来评价天然抗氧化物在食品和生物体体系中的多功能作用。合理有效的评价抗氧化活性的方案，需要几种建立在不同作用机理上的方法来进行抗氧化评价[2]。

超临界流体萃取是一种残留小、污染少的新型分离提取技术，被广泛用于真菌活性成分的提取和制备[3－5]，但松茸超临界CO2萃取还鲜有报道。本文拟采取超临界CO2萃取技术提取松茸中的抗氧化成分，并从抗脂质氧化和自由基清除两方面研究该提取物的抗氧化活性，为松茸的有效利用提供技术支持。

1 实验材料

1.1 材料

新鲜松茸，购自四川东亿食品有限公司，产自云南省松茸野生基地，原料要求色泽纯正、无损伤的新鲜样品，除泥后待用;2，2－二苯基苦基苯肼 (DPPH)，美国Sigma－aldrich公司;芦丁色谱纯，中国生物制品检定所;β－胡萝卜素、亚油酸，美国NU－CHEK公司;其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器

0.5 L超临界CO2萃取仪，四川德阳四创科技有限公司;UV－2000型紫外可见分光光度计，上海尤尼柯仪器有限公司;RE－2000型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂;UFREEZE DRYIN G－03型冻干试验机，厦门联友冷冻设备有限公司;A－2004型电子分析天平，上海恒平科学仪器有限公司。

2 实验方法

2.1 原料预处理

新鲜松茸经冷冻干燥后粉碎过筛放置于干燥器中待用[6]。

2.2 松茸超临界CO2萃取物的制备

准确称取松茸粉末250 g，装入0.5 L萃取釜中。对萃取釜、分离釜分别进行加热，升到所需温度后，泵进CO2气体，当萃取釜压力升高到一定压力后，调节进气量，保持恒温恒压进行循环萃取，每隔15 min从分离釜进行取料，总萃取时间1.5 h，超临界状态下的CO2流量为15 L·h－1。以乙醇作为夹带剂，夹带剂用量2.0 mL·g－1样品，压力30 MPa，温度65℃。收集超临界流体萃取物，用真空旋转蒸发仪进行浓缩。浓缩物用氮气吹扫，除去残留的乙醇。浓缩后的样品置4℃下冷藏备用[3]。

2.3 松茸萃取物抗脂质氧化能力

将2.4 mL含有2.6 mmol·L－1亚油酸的β－胡萝卜素乳化溶液加入到比色管中，于37℃下恒温放置，同时做不含亚油酸的空白对照管和加入标准BHT(0.01 mg·mL－1)管。20 min后，待比色皿中的溶液热平衡后，加入0.5 mol·L－1偶氮二异丁基脒二盐酸盐进行油脂的自动氧化，15 min后加入不同体积 (0.5 μL单位体积)的松茸超临界CO2萃取浓缩物，并于470 nm下进行比色，通过吸光度的变化来反映萃取物的浓度－反应关系[7，8]。

2.4 松茸萃取物对DPPH自由基的清除能力

将精确配制好的5 mmol·L－1的DPPH溶液1 mL，加入到3 mL 不同浓度 (50 μg·mL－1、100 μg·mL－1、200 μg·mL－1、500 μg·mL－1、1 000 μg·mL－1)的松茸提取物溶液中，混合好后，于室温下放置30 min后，测定517 nm下吸光度的值，DPPH自由基清除率 (P)公式为[9－11]:

式中:A空白为未加多糖溶液的空白试验 (以蒸馏水代替)的吸光度;A样品为不同浓度反应液的吸光度。

同时测定Vc和芦丁水溶液的DPPH自由基清除率。

3 结果与分析

3.1 抗脂质氧化能力

β－胡萝卜素亚油酸体系在偶氮二异丁基脒二盐酸盐的作用下发生自动氧化，β－胡萝卜素氧化后会逐渐褪色，褪色的程度反应氧化的程度，吸光度会越来越小。添加抗氧化物质后会延缓氧化的进行，抗氧化能力越强，吸光度下降越慢，与标准的BHT溶液比较可计算出抗氧化能力的BHT当量，结果见图1。

由图1可以看出，添加松茸萃取物最初几分钟内，油脂的氧化抑制并没有表现出来，随着松茸萃取物的消耗，抗氧化活性开始表现出来，空白组没有表现出氧化抑制的现象。

通过实验测定，发现每克松茸样品中所含有的抗氧化活性物质相当于4 mg的BHT，说明松茸萃取物具有优良的抗脂质氧化能力。

3.2 DPPH自由基清除能力

DPPH自由基清除能力见图2。

图2结果表明，Vc对DPPH自由基的清除作用最强，200 μg·mL－1的Vc清除率即可达到90%以上。在实验质量浓度范围内，松茸萃取物对DPPH自由基的清除率随其质量浓度的增加而提高，在0.1 mg·mL－1～1 mg·mL－1范围内清除率呈现平稳提升的趋势，最高可达73%。质量浓度在0.2 mg·mL－1～1 mg·mL－1范围内，松茸萃取物的DPPH自由基清除率高于芦丁对照品。说明松茸的超临界CO2萃取物有明显的清除自由基的能力。

4 讨论

天然抗氧化物在食品和生物体体系中的作用是多方面的，可能是通过抑制脂肪氧化来起作用，也可能是通过自由基猝灭来达到抗氧化的效果。本次实验显示松茸超临界CO2萃取物具有较强的清除DPPH自由基的能力，最高可达73%的清除率，同时可以有效抑制亚油酸的自动氧化。表明松茸的超临界CO2萃取物具有一定的体外抗氧化作用，这可以为松茸保健品的开发提供一定的科学依据和参考。

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