风湿宁胶囊提取工艺研究*

2013-11-14何国林王羚郦强皎叶炳皇林丽张军广州中医药大学广州510006

江西中医药 2013年3期

★ 何国林王羚郦强皎叶炳皇林丽张军 (广州中医药大学广州510006)

风湿宁胶囊是由当归、赤芍、秦艽等多种药味组成的中药复方制剂，有活血祛瘀止痛、补肝肾、强筋骨之功效。用于治疗各类关节软组织损伤、骨折、脱位以及各类关节痛等。本研究采用正交试验法，以芍药苷和龙胆苦苷的综合保留率为评价指标，优化了风湿宁胶囊的水提工艺，为工业化生产建立基础。

1 仪器与试药

岛津LC－20A高效液相色谱仪，ΜV检测器，LC－20AT泵，SIL－20A自动进样器，Labsolution色谱工作站;万分之一分析天平(Mettler Toledo CP225D);十万分之一分析天平(Mettler Toledo AB204－N)。芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110736－201035);龙胆苦苷对照品(上海融禾医药科技发展有限公司，批号110330);色谱甲醇购自Merck公司，水为自制超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［1］

以Kromasil C18柱为固定相，以甲醇－0．1%磷酸照下表1进行梯度洗脱，芍药苷检测波长为230nm，龙胆苦苷检测波长为 254nm，流速为 1．0mL/分。

表1 梯度洗脱表

2.2 专属性考察

见图1－8。

图1 供试品溶液(230nm)

图2 芍药苷对照品溶液(230nm)

图3 赤芍药材溶液(230nm)

图4 赤芍阴性对照液(230nm)

图5 供试品溶液(254nm)

图6 龙胆苦苷对照品溶液(254nm)

图7 秦艽药材溶液(254nm)

图8 秦艽阴性对照液(254nm)

2.3 标准曲线的绘制

分别精密吸取芍药苷对照品溶液(0．03216mg/mL)和龙胆苦苷对照品溶液(0．136mg/mL)2、4、8、12、16、20uL，注入液相色谱仪测定，以进样质量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归，得芍药苷回归方程:y=1 589 528．20 x － 7438．59，R2=1．00。龙胆苦苷回归方程为:y=1339014．71 x － 18 098．00，R2=1．00。结果表明:芍药苷在 0．0644－0．644 μg 范围内，龙胆苦苷在 0．272 －2．72μg范围内均呈良好线性关系。

2.4 风湿宁胶囊提取工艺的正交试验设计和试验

2．4．1 正交试验设计在影响水提的因素中，煎煮次数，煎煮时间与水的用量较为重要，故选定煎煮次数，煎煮时间与水的用量作为考察因素，应用正交试验设计进行实验，以风湿宁胶囊中的有效成分芍药苷与龙胆苦苷的综合保留率(芍药苷和龙胆苦苷的权重系数均为0．5)为评价指标，因素水平设计见表2。

表2 正交实验因素水平表

2．4．2 正交实验按处方比例称取全方药材107．25g，照上述正交表条件进行提取，各次提取液放冷，过滤，合并滤液，测定体积，备用。

2．4．3 供试品溶液制备精密量取各正交药液25mL，置50mL容量瓶中，边振摇边缓慢加入95%乙醇稀释至刻度，静置，取上清液，0．45um微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.5 正交试验结果

正交试验结果见表3。分别以直观分析和方差分析对试验结果进行评价，结果分别见表4、5。分析结果表明，各因素对综合保留率影响强弱依次为提取次数(A)、提取时间(B)、溶媒用量(C)。对综合保留率影响最大的因素为提取次数(A)，其中水平3明显优于水平1，但与水平2差异不大，故将提取次数(A)的水平确定为2(提取两次);提取时间(B)与溶媒用量(C)对综合保留率影响较小，综合考虑指标成分提取率和临床汤剂经验，将提取时间的水平确定为水平2(1．5、1、1小时)，将溶媒用量确定为水平3(12、10、10倍水)。因此筛选确定最佳提取条件为A2B2C3，即加水煎煮两次，煎煮时间分别为1．5、1．0h，加水量分别为12、10 倍量水。