人参养荣方提取工艺的筛选研究

★ 周焘 饶小勇 罗晓健 杨世林 (.广州医药研究总院 广州5040;.江西本草天工科技有限公司 南昌0006;.江西中医学院 南昌0006)

人参养荣丸源自宋代《太平惠民和剂局方》，主要由人参、白芍、黄芪、当归、五味子、肉桂、陈皮等12味中草药组成。收载于《中华人民共和国药典》(2010年版一部)，具有温补气血、养心安神之功［1］。本方临床疗效确切，主要用于心脾不足。气血两亏。形瘦神疲。食少便溏。病后虚弱等。传统中药丸剂存在着贮藏不便、易染菌、服用剂量大，病人服用困难等问题，影响了该方在临床的广泛应用。为了能够进一步提高有效成分的利用率，提高患者的顺应性，本文将以芍药苷、橙皮苷的含量以及药物的浸膏得率为指标，考察人参养荣方的提取工艺，为今后人参养荣丸的剂型改进奠定基础。

1 仪器及试药

Varian高效液相色谱仪(瓦里安公司)，METLER AB104－N分析天平(梅特勒－托利多仪器有限公司)，Adventurer AR5120天平(奥豪斯国际贸易有限公司)，KQ－250DB型数控超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)，真空泵ZXZ－0.5(30升)(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)，KDM－型调温电热套(山东鄄城县新华仪器厂)，RE－52－05型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。

芍药苷(批号为110736－200320，中国食品药品检定研究院提供)，橙皮苷(批号为110721－200211，中国食品药品检定研究院提供)，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯;药材均购自江西省医药公司，经鉴定均符合《中华人民共和国药典》(2010年版一部)要求。

2 方法与结果

2.1 提取工艺

根据处方中药物的性质拟订如下4种提取工艺方法。2.1.1 水提法(A工艺) 按处方称取约0.3倍处方量的药材3份，加10倍量水作为溶媒，加热回流提取2次，每次1.5小时。首次提取用挥发油测定仪收集挥发油。合并水提取溶液，滤过，滤液减压浓缩，拌入收集的挥发油，摇匀，用水定容。

2.1.2 醇提法(B工艺) 按处方称取约0.3倍处方量的药材3份，加入10倍量60%乙醇，加热回流提取2次，每次1.5小时，合并两次醇提液，滤过，滤液回收乙醇后，用水定容。

2.1.3 水提醇沉法(C工艺) 按处方称取约0.3倍处方量的药材3份，按水提法同法提取，首次提取收集挥发油。合并2次水提液，滤过，滤液浓缩到适量，加入乙醇，使含醇量达到60%，充分搅拌，静置24小时，滤过，回收乙醇，浓缩，拌入收集的挥发油，用水定容。

2.1.4 醇水双提法(D工艺) 按处方比称取0.3倍处方量药材3份，各将其中人参、茯苓、甘草、黄芪、当归以10倍量的水作为溶媒加热提取，其他药材用10倍量60%的乙醇加热提取。各提取2次，每次1.5小时，首次水提收集挥发油。合并水提液，滤过，滤液浓缩;合并醇提液，回收乙醇，然后将水提浓缩液与醇提浓缩液混匀，拌入挥发油，用水定容。

2.2 不同提取工艺提取液中芍药苷、橙皮苷含量测定

2.2.1 样品溶液的制备 (1)供试液的制备。芍药苷供试液:取提取液适量，滤过，精密量取续滤液2mL，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容到10mL，摇匀，滤过，精密量取续滤液1mL，用甲醇稀释至5mL，作为芍药苷供试液。

橙皮苷供试液:取提取液适量，滤过，精密量取续滤液2mL，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容到10mL，摇匀，滤过，精密量取续滤液1mL，用甲醇稀释至10mL，作为橙皮苷供试液。

(2)对照品溶液的制备。

芍药苷对照品溶液:取芍药苷对照品约2mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为芍药苷对照品溶液。

橙皮苷对照品溶液:取橙皮苷对照品约3mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为橙皮苷对照品溶液。

(3)阴性供试液的制备

按处方比例称取不含白芍(或陈皮)的原药材，经不同工艺提取后，按供试液制备法操作，得阴性对照溶液。

2.2.2 色谱条件 (1)芍药苷色谱条件:色谱柱:Dikma TechnologiesⅡ Diamonsil TM(钻石)C18(5μm ，4.6 mm ×250 mm)，流动相:甲醇 － 水(35∶65)，流速:1.0mL/分，检测波长:230nm，柱温:25℃。

(2)橙皮苷色谱条件:色谱柱:Dikma TechnologiesⅡDiamonsil TM(钻石)C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流动相:甲醇－1%冰醋酸(45∶55)，流速:1.0 mL/分，检测波长:283 nm，柱温:25℃。

2.2.3 标准曲线的绘制 芍药苷的标准曲线的绘制:取芍药苷对照品适量，精密称定，配置成浓度为0.160、0.107、0.080、0.040、0.020、0.010 mg/mL 的对照品溶液。进样10μL，以相应的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，结果显示芍药苷对照品溶液在0.010～0.160 mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为Y=578542X+52.667(r=0.999 5)。

橙皮苷的标准曲线的绘制:取橙皮苷对照品适量，精密称定，配置成浓度为 0.132 8、0.066 4、0.033 2、0.016 6、0.008 3、0.004 2 mg/mL的对照品溶液。进样10μL，以相应的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，结果显示橙皮苷对照溶液在0.004 2～0.132 8 mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为Y=798764X+360.2(r=0.999 5)。

2.2.4 方法学考察 (1)专属性。取2.2.1中制备的样品溶液，按上述条件分别检测对照品溶液、供试品溶液及阴性供试液，对照目标成分吸收峰的保留时间，结果表明阴性供试液的HPLC图谱在与芍药苷、橙皮苷对照品溶液相同保留时间的位置上没有出现芍药苷、橙皮苷的吸收峰，表明试验不存在杂峰干扰。

(2)精密度试验。取供试液连续进样六针，芍药苷峰面积的积分值的RSD(n=6)为0.76%，橙皮苷峰面积的积分值的RSD(n=6)为1.20%。

(3)重现性试验。取A工艺提取药液，按供试品制备方法制备6份样品，分别测定样品含量，其中芍药苷含量测定结果RSD(n=6)为1.08%，橙皮苷含量测定结果RSD(n=6)为0.70%。

(4)回收率试验。采用加样回收法，精密量取已知含量的样品6份，分别精密加入不同量的芍药苷(橙皮苷)对照品溶液，按供试液制备方法制备，得回收率试验用溶液，进样，测定。结果显示，芍药苷平均回收率为101.7%，RSD(n=6)为1.74%;橙皮苷平均回收率为102.0%，RSD(n=6)为1.20%。

2.2.5 样品含量测定 取不同提取工艺所得的提取液制备的芍药苷供试液和橙皮苷供试液，注入高效液相色谱仪，测定。结果见表1。

2.3 浸膏得率测定

按照《中华人民共和国药典》(2010年版一部)附录X浸出物测定法，精密量取药液25mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，在105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，减去蒸发皿的重量，即得干燥品重量。以干燥品计算其浸膏得率。结果见表1。

表1 不同提取工艺的提取液的浸膏得率、芍药苷、橙皮苷含量

3 讨论

根据参考文献［2－4］，本文通过研究建立了人参养荣方中陈皮苷和芍药苷的含量测定方法，结果表明建立的方法稳定、重现性好、易于操作，可以有效控制人参养荣方的提取工艺。

本文测定四种不同提取工艺的浸膏得率，它们相互间的差异不是很大。而HPLC法测定提取液中芍药苷、橙皮苷的含量结果表明:A工艺提取的样品液中芍药苷、橙皮苷的含量在四者中均是最高，其次是C工艺。与此相对应，A工艺中浸膏得率也为最高。综合考虑，初步选择A工艺(即以水为溶媒提取)作为提取人参养荣丸方中有效成分的工艺。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部［M］.中国医药科技出版社，2010:438.

［2］?张云龙，周迎新.人参养荣口服液质量标准的研究［J］.中国药学杂志，1996，31(12):714－716 .

［3］杜志谦，王广强，薛素娟.芍药苷检测在中药质控中的应用［J］.时珍国医国药，20O2，13(9):554 －555.

［4］姜舜尧.HPLC法测定2种含陈皮中成药中的橙皮苷的含量［J］.中成药，2001，23(8):612 －615.