葫芦种子干热处理对黄瓜绿斑驳花叶病毒及发芽率的影响

马凯慧，王毓洪，严蕾艳，应泉盛，王迎儿，张华峰

（浙江宁波市农业科学研究院，315040）

黄瓜绿斑驳花叶病毒（cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV）是烟草花叶病毒属葫芦科的重要病毒之一[1]，是一种典型的种传病毒，为害十分严重。该病毒所有的株系都极其稳定[2]，典型的CGMMV病毒株系的致死温度为90～100℃；体外保毒期长达119 d[3]。

应用干热处理方法能安全有效地对葫芦科、茄果类、十字花科等作物种子进行消毒[4]。鉴于不同作物的生物学特性有所差异，对种子进行干热处理时，适宜的温度和时间也不尽相同。已有研究报道，用于杀灭种子带菌的干热处理一般为70～75℃处理3～5 d[5]。本试验以葫芦种子为试验材料，通过不同条件的干热处理后，检测并分析种子带毒情况和发芽率，进而筛选出葫芦种子干热处理的最适条件。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试葫芦品种为夜开花，种子采自农户发病田内植株。

1.2 试验设备

恒温恒湿干热处理器，恒温箱。

1.3 试验方法

试验共设6个处理，3次重复，每次重复种子数为1000粒。处理条件：第一阶段设置温度35℃，处理24 h；第二阶段设置温度 50℃，处理24 h；第三阶段设置温度分别为65，70，72，75，80，85℃，处理72 h。最后冷却24 h。

处理后的试验种子保存1周，然后催芽，1周后统计发芽率。取100粒出芽种子播种，控制适宜温湿度和光照，待葫芦苗长出真叶后，取样，用ELISA检测法检测葫芦真叶病毒情况。

2 结果与分析

由表1可见，不同的处理条件下，葫芦种子发芽率有差异，当干热处理温度为35-50-65℃、35-50-70℃和35-50-72℃时，葫芦种子发芽率较高。之后随着温度的升高，葫芦种子发芽率明显降低，温度越高，发芽率越低。所以，65，70，72℃都可能是较适宜的干热处理温度。但对于病毒本身来说，温度越高，杀毒越有利，种子的带毒性越小。所以，结合发芽率和杀毒条件，72℃为葫芦种子干热处理的最佳条件。

将在35-50-72℃条件下进行干热处理后的种子放置一周，让种子适当的恢复水分之后，进行催芽和播种，取葫芦苗的真叶进行病毒检测。

根据表2结果，葫芦种子病毒检测结果由干热处理前的阳性变为干热处理后的阴性，即处理后未检测到病毒。这证明葫芦真叶不带毒，35-50-72℃条件的干热处理对种子杀毒效果好。

3 讨论与小结

对于黄瓜绿斑驳花叶病毒，干热处理温度越高，杀毒效果越好。有报道称，在干热处理过程中75℃处理72 h可以使病毒完全失活，85℃处理24 h也可以得到同样的效果[6]。但是干热处理的温度条件对种子发芽率的影响较大[7]，处理温度过高会对种子造成较严重的伤害，进而影响发芽率，所以试验设置了 65，80，72，75，80，85℃ 6 个温度条件。通过试验可知，葫芦种子在65℃、70℃和72℃时受干热处理的损伤程度都较小，发芽率符合要求，即干热处理对种子发芽率的影响较小；结合干热处理对葫芦种子黄瓜绿斑驳花叶病毒的杀毒效果，在72℃时可以有效杀灭病毒。所以，选择35-50-72℃作为葫芦种子干热处理的最适温度条件。

表1 染病葫芦干热处理后的发芽率

表2 病毒检测结果

[1]张永江.黄瓜绿斑驳花叶病毒研究进展[J].河南农业科学，2006（8）：9-12.

[2]冯兰香，谢丙炎，杨宇红，等.检疫性黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测和防疫控制[J].中国蔬菜，2007（9）：34-38.

[3]吴鑫，丁元明，何月秋，等.检疫有害生物——黄瓜绿斑驳花叶病毒[J].现代农业科学，2009，16（2）：87-89.

[4]宋顺华，郑晓鹰.干热灭菌处理技术——一种防治种传病害的有效方法[J].蔬菜，2008（10）:41.

[5]李瑞云，杨琳，常华，等.不同温度干热处理对几种蔬菜种子萌发的影响[J].中国蔬菜，2011（16）：61-71.

[6]蔡明，江冬，张丽英，等.黄瓜绿斑驳花叶病毒种子处理试验研究[J].植物检疫，2011，25（1）：62-63.

[7]Kim S M，Nam S H,Lee J M,et al.Destruction of cucumber green mottle mosaic virus by heat treatment and rapid detection of virus inactivation by RT-PCR[J].Molecules and Cells,2003,16(2):338-342.