紫外分光光度法测定茶碱缓释片中茶碱的含量

程弘夏，吴沁林，冉林荣，许腊英

(武汉理工大学华夏学院，湖北 武汉 430223)

2013-09-29

作者简介：程弘夏(1970-)，女，天津人，博士，副教授，主要从事药物制剂研究,E-mail：chenghx70@aliyun.com。

doi

：10.3969/j.issn.1672-5425.2013.12.020

紫外分光光度法测定茶碱缓释片中茶碱的含量

程弘夏，吴沁林，冉林荣，许腊英

(武汉理工大学华夏学院，湖北 武汉 430223)

以蒸馏水为提取溶剂，检测波长为272 nm,采用紫外分光光度法测定了茶碱缓释片中的茶碱含量。结果表明，茶碱浓度在1.5～13.5 μg·mL-1范围内线性关系良好(R=0.9997)，平均加标回收率为97.34%，RSD为0.70%。该法操作简单、快速，结果准确，适用于茶碱缓释片中茶碱含量的测定。

紫外分光光度法；茶碱缓释片；茶碱；含量测定

茶碱为甲基嘌呤类药物，具有强心、利尿、扩张冠状动脉、松弛支气管平滑肌和兴奋中枢神经系统等作用，临床主要用于治疗支气管性与心源性哮喘，也可用于心源性水肿的治疗。由于茶碱治疗窗窄，普通制剂血药浓度波动大，疗效不稳定，为此国内外相继研发出各种规格的茶碱缓释制剂，如茶碱缓释片、缓释胶囊、缓释小丸等。这些缓释制剂可降低血液浓度峰谷差值，减少毒副作用。

茶碱的测定方法一般有HPLC法、GC法、TLC法、磷光分析法等[1，2]，2010版《中国药典》采取容量分析方法测定茶碱缓释片含量[3]。作者在此建立了茶碱缓释片含量测定的紫外分光光度方法。

1 试药与仪器

茶碱对照品(纯度100%)，中国药品生物制品检定所；茶碱缓释片(批号：20110902、20111207、20121101，规格0.1 g)，广州某制药公司。

TU-1900型双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；KQ600E型超声清洗器，昆山市超声仪器有限公司；AN7388型分析天平，上海民桥精密科学仪器有限公司。

2 方法与结果

2.1 检测波长的确定

分别取茶碱对照品及3个批号茶碱缓释片细粉适量，加热水使其溶解，过滤，配制成适宜浓度，摇匀。以水为空白，在200～400 nm范围内进行扫描，结果见图1。

由图1可以看出，茶碱在272 nm处有最大吸收，缓释片溶液与对照品溶液的吸收曲线形态基本一致，说明辅料对茶碱光谱特征无干扰。故选择272 nm作为茶碱缓释片含量测定波长。

2.2 最优提取方法的确定

2.2.1 提取溶剂的选择

分别取不同批号的茶碱缓释片各20片，精密称定并计算平均片重，研细。每个批号精密称取茶碱缓释片细粉适量(约相当于无水茶碱0.1 g)各3份，置具塞锥形瓶中，分别加入等量蒸馏水、无水乙醇、无水氯仿，超声20 min使充分溶解，过滤，续滤液定容于100 mL容量瓶中，摇匀。取1 mL至100 mL容量瓶中，加相应的溶剂稀释至刻度，在272 nm处测定吸光度，结果见表1。

表1不同提取溶剂对茶碱含量测定的影响

Tab.1Effectofdifferentextractionsolventsondeterminationoftheophyllinecontent

由表1可以看出，在相同的提取条件下，以蒸馏水为提取溶剂时的平均吸光度较高，提取效果较好。

2.2.2 水浴提取时间的选择

图1 茶碱对照品(a)和茶碱缓释片(b～d)的紫外吸收光谱Fig.1 UV Spectra of theophylline standard(a) and theophylline sustained-release tablets(b～d)

分别取不同批号的茶碱缓释片各20片，精密称定并计算平均片重，研细。每个批号精密称取茶碱缓释片细粉适量(约相当于无水茶碱0.1 g)各5份，在70 ℃水浴中，以蒸馏水为提取溶剂分别提取10 min、20 min、30 min、45 min、60 min。充分溶解，过滤。续滤液按2.2.1方法定容后，在272 nm处测定吸光度，结果见表2。

表2水浴提取时间对茶碱吸光度的影响

Tab.2Effectofextractiontimeforwaterbathonabundanceoftheophylline

由表2可知，在相同的水浴温度下，前30 min的吸光度随提取时间的延长上升较快，30 min后吸光度升幅趋缓。

2.2.3 超声提取时间的选择

分别取不同批号的茶碱缓释片各20片，精密称定并计算平均片重，研细。每个批号精密称取茶碱缓释片细粉适量(约相当于无水茶碱0.1 g)各5份，以蒸馏水为提取溶剂分别超声提取10 min、20 min、30 min、45 min、60 min。充分溶解，过滤。续滤液按2.2.1方法定容后，在272 nm处测定吸光度，结果见表3。

表3超声提取时间对茶碱吸光度的影响

Tab.3Effectofextractiontimeforultrasoundonabundanceoftheophylline

由表3可知，在超声提取中，前30 min的吸光度随超声时间的延长上升较快，30 min后吸光度变化不显著。

因此，确定以蒸馏水为提取溶剂，在70 ℃水浴中超声30 min提取茶碱缓释片中的茶碱，用于含量测定。

2.3 线性关系考察

精密称取茶碱对照品7.5 mg，置具塞锥形瓶中，加热水适量，在70 ℃水浴中超声30 min使充分溶解，放冷。定量转移至100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得75 μg·mL-1茶碱对照品贮备液。分别精密量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、7.0 mL、8.0 mL、9.0 mL对照品贮备液置50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。以水为空白，在272 nm处测定吸光度。以吸光度(y)为纵坐标、茶碱浓度(x)为横坐标绘制标准曲线,并进行回归分析。得到回归方程为y=0.06614x+0.01704(R=0.9997)，茶碱在1.5～13.5 μg·mL-1浓度范围内有良好线性关系。

2.4 精密度考察

分别配制3 μg·mL-1、9 μg·mL-1、12 μg·mL-1低、中、高三个浓度茶碱对照品溶液，连续测定5次吸光度，RSD分别为1.67%、1.02%、0.72%。表明方法的精密度良好。

2.5 稳定性实验

精密量取同一浓度对照品溶液，在0 h、2 h、6 h、8 h、10 h、24 h分别测定吸光度，RSD为0.86%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.6 样品测定

分别取3批茶碱缓释片各20片，精密称定并计算平均片重，研细。精密称取茶碱缓释片细粉适量(约相当于无水茶碱0.1 g )，放入研钵中，加热水分次研磨，并转移至具塞锥形瓶中。在70 ℃恒温水浴中超声提取30 min，充分溶解，过滤。续滤液用水定容于100 mL容量瓶中，摇匀。取1 mL至100 mL的容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，测定吸光度，利用回归方程计算各样品的茶碱含量，结果见表4。

2.7 加标回收率实验

分别精密量取0.4 mL已知含量(约1000 μg·mL-1)的供试品母液9份，加入到100 mL容量瓶中，再依次精密加入400 μg·mL-1茶碱对照品溶液1 mL、1.5 mL、2 mL，加水稀释至刻度，摇匀，测定茶碱含量。结果表明，茶碱平均加标回收率为97.34%(n=9)，RSD为0.70%。

表4不同批号茶碱缓释片中茶碱含量测定结果(n=3)

Tab.4Thedeterminationresultsofcontentoftheophyllineindifferentbatchesoftheophyllinesustained-releasetablet

3 结论

以蒸馏水为提取溶剂，在70 ℃水浴中超声30 min提取茶碱缓释片中的茶碱，并采用紫外分光光度法测定其含量。结果表明，茶碱浓度在1.5～13.5 μg·mL-1范围内线性关系良好(R=0.9997)，平均加标回收率为97.34%,RSD为0.70%。该法操作简单、快速、经济、高效，且不受辅料干扰、重现性好，结果准确可靠，适用于茶碱缓释片中茶碱含量的测定。

[1] 卫艳丽，董川，杨颖.可可碱、咖啡因、茶碱的滤纸基质室温磷光测定[J].分析化学，2002，30(3)：301-303.

[2] 蔡涛，祝业光.高效液相色谱法测定茶碱的缓释片中茶碱的含量[J].中国药事，2007，21(1)：46-47.

[3] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(2010版)二部[M].北京：化学工业出版社，2010:514.

DeterminationofContentofTheophyllineinTheophyllineSustained-ReleaseTabletbyUltravioletSpectrophotometry

CHENG Hong-xia,WU Qin-lin,RAN Lin-rong,XU La-ying

(WuhanUniversityofTechnologyHuaxiaCollege，Wuhan430223,China)

The content of theophylline in theophylline sustained-release tablet was determined by ultraviolet spectrophotometry by using distilled water as solvent.The detection wavelength was 272 nm.The calibration curve was linear in the range of 1.5～13.5 μg·mL-1(R=0.9997) and the average recovery was 97.34%,RSD was 0.70%.The method was rapid and simple with accurate result,which could be used for the quality control and determination of content of theophylline in theophylline sustained-release tablet.

ultraviolet spectrophotometry;theophylline sustained-release tablet;theophylline;determination of content

O 657.32

A

1672-5425(2013)12-0075-03