不同发育阶段多子小瓜虫对几种药物的敏感性

2013-10-27张善忠张玉贵四川省水产学校四川成都611730

长江大学学报(自科版) 2013年17期

关键词：胞囊小瓜福尔马林

张善忠，张玉贵 (四川省水产学校，四川成都 611730)

李成 (成都正大有限公司，四川成都 611730)

不同发育阶段多子小瓜虫对几种药物的敏感性

张善忠，张玉贵 (四川省水产学校，四川成都 611730)

李成 (成都正大有限公司，四川成都 611730)

分别采用福尔马林(100、10mg/L)、高锰酸钾(20、2mg/L)、硫酸铜(7.0、0.7mg/L)和辣椒煎水(10、1mg/L)对患病建鲤鱼种鱼体上不同发育阶段(营养体期、胞囊期和幼虫期)的多子小瓜虫(Ichthyopthiriusmultifillis)进行浸洗或遍洒处理，探讨了不同发育阶段的多子小瓜虫对几种药物的敏感性。结果表明：胞囊期的小瓜虫对几种药物都不敏感；自由活动期的小瓜虫幼虫对几种药物都敏感；营养体期的小瓜虫只对福尔马林和辣椒煎水2种药物敏感，对高锰酸钾不敏感，但也未加重病鱼病情，而用硫酸铜处理不但没有起到治疗的作用，反使病鱼病情加重。几种药物的处理效果比较，福尔马林不论是浸洗还是遍洒，其处理效果都最好，其次是辣椒煎水浸洗，硫酸铜处理效果最差。多子小瓜虫的药物敏感期为幼虫期在水体中独立游泳并寻找宿主的阶段，此阶段即为治疗多子小瓜虫病的最佳时间。在防治多子小瓜虫的过程中，应在第1次用药2d后到第4天时再重复用药1次，以达到最佳防治效果。

多子小瓜虫(Ichthyopthiriusmultifillis)；敏感性；福尔马林；高锰酸钾；硫酸铜；辣椒

多子小瓜虫(Ichthyopthiriusmultifillis)属纤毛虫纲全毛目凹口科小瓜虫属。由多子小瓜虫引起的鱼病是渔业生产中最常见的鱼病之一，它在鲤鱼、草鱼、鲫鱼、金鱼、斑点叉尾鮰、大口鲶等鱼类都能寄生，并导致大量苗种甚至成鱼死亡[1-6]。目前，用于防治小瓜虫病的药物很多，但用药效果大都不太理想或者不稳定[3-10]。虽然其中硝酸亚汞作为观赏鱼小瓜虫病的治疗药物有较好疗效[10]，但因其毒性而无法在食用鱼中使用。为此，本研究探讨了不同发育阶段的多子小瓜虫对福尔马林、高锰酸钾、硫酸铜和辣椒煎水等药物的敏感性，以期找到多子小瓜虫对各药物的敏感期及杀灭瓜虫的适宜用药方法，为渔业生产提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

病原体多子小瓜虫来自四川省西昌市团结渔场。7月初从该渔场收集规格为20～25g、鱼体都已严重感染多子小瓜虫病的建鲤鱼种80尾，用塑料袋充氧运至四川省水产学校实验室。病鱼体表及鳃上均有许多小白点，经镜检符合多子小瓜虫的形态特征。

试验用水族箱采用80cm×60cm×40cm的有机玻璃箱，使用前用100mg/L高锰酸钾及10mg/L强氯精浸泡消毒处理，洗净备用。

试验用水为四川省水产学校校区内井水，水温22～24℃，经充分暴气后使用。

试验所用药物福尔马林40%、高锰酸钾、硫酸铜由四川省水产学校实验室提供，均为分析纯级；辣椒为市购的红牛角椒，煎水后使用。

试验用鱼为5～10g的建鲤鱼种，试验前体质健壮、无病无伤，经1～2%食盐水常规消毒后备用。

1.2 方法

试验共采用水族箱25个，其中24个用于药物处理，另1个用作对照(表1)。

(1)病原体的感染水族箱盛适量水后将带回的病鱼每箱放入2尾(对照组除外),同时放入30尾健康的试验用鱼种。经半个月后，除对照组外，所有试验鱼体表、鳍条及鳃都出现了许多白点，经镜检，小白点具有多子小瓜虫营养体的特征，表明试验用鱼全部感染了多子小瓜虫。此过程中原带入多子小瓜虫的病鱼已经死亡。

表1 几种药物对不同发育阶段小瓜虫的用药方法与用药浓度

(2)药物敏感性试验将所有水族箱内水全部换掉，注入适量并经镜检不含有多子小瓜虫的新水，试验箱每箱随机放入30尾已感染小瓜虫的试验鱼，对照组仍放入30尾健康的试验鱼。在水族箱底放置多块载玻片，每隔2h用浮游生物网从水中采取虫体，或从箱底载玻片或鱼体表病灶上采取病原体进行显微观察，根据观察结果确定小瓜虫的发育阶段，再分别在其营养体期、胞囊期及幼虫阶段使用不同浓度的不同药物进行浸洗或遍洒处理，几种药物对不同发育阶段小瓜虫的用药方法与用药浓度详见表1。其中采用浸洗法时，用药10～15min左右即将鱼转回原水族箱。

每次某种药物处理后根据小瓜虫的发育情况对水体及鱼体小瓜虫虫体进行观察与镜检，并统计处理10、20、30d时试验鱼的死亡及存活情况。

2 结果与分析

根据对多子小瓜虫生活史的连续观察结果，确定在体表有大量营养体时，即体表有大量白色点状病灶时作为营养体用药时机；在水族箱底部有许多多子小瓜虫胞囊(多数虫体胞囊内处于多细胞连续分裂期)时作为胞囊期用药时机；在幼虫从胞囊内钻出来的第1天作为幼虫期用药时机。

2.1 4种药物对营养体期小瓜虫的处理效果

对营养体期的小瓜虫采用福尔马林处理后，发现试验鱼体表的部分虫体脱落，体表的白色小点有所减少，但仍有许多虫体附着于体表，没有死亡。抽样镜检100个脱落的虫体，发现有72个虫体死亡，没有死亡的虫体迅速形成胞囊。浸洗法处理后水族箱中的胞囊在经过20～24h后即发育为幼虫；遍洒法处理的水族箱中的胞囊则需经过36h后才发育为幼虫，重新寄生于鱼体。在试验的30d内发现病鱼的病症经历了3次由重到轻再由轻到更重的循环。3次营养体的重感染阶段，鱼体表的白色点状症状越来越严重，检测水体中胞囊及幼虫发现，每经历1次循环，其数量明显增加，试验鱼的死亡数量也明显增加(表2)。

对营养体期的小瓜虫分别采用高锰酸钾及辣椒水处理后，其效果与采用福尔马林处理相同。对脱落的虫体抽样镜检100个，其死亡数量分别为56个和64个。从处理开始到试验结束，这2种药物处理时试验鱼在小瓜虫每个生活史循环中的死亡数量见表2。

对营养体期的小瓜虫采用硫酸铜处理后，发现鱼体表的虫体也有部分脱落，体表的白色小点也有所减少，但不管是脱落或未脱落的虫体都只有少量死亡，镜检100个虫体只有12个死亡，未死亡的虫体迅速形成胞囊，浸洗法处理后水族箱中的胞囊经20～24h即发育为幼虫，在遍洒法处理的水族箱中的胞囊则需经过30～40h后才发育为幼虫。随后幼虫重新大量寄生于鱼体，在处理后20d左右，所有的病鱼全都死亡(表2)。

2.2 4种药物对胞囊期小瓜虫的处理效果

对胞囊期的小瓜虫采用福尔马林、高锰酸钾、硫酸铜、辣椒水处理后的效果都很差，对4种药物处理后的胞囊抽样100个进行镜检，其死亡的胞囊个体数量分别为24、17、11、20个。与营养体期处理后相同时间病鱼体表、鳃、鳍上的虫体数量对比，胞囊期处理后病鱼上虫体数量明显较多。在处理15d后对各试验组鱼体的鳃及尾鳍进行镜检，1个视野内(10×4)多子小瓜虫的数量统计结果见表3。从处理后20d内，所有试验组的病鱼死亡率都超过80%，30d后死亡率超过90%(表2)。这表明，4种药物对胞囊期小瓜虫的处理效果极差，也就是说多子小瓜虫在胞囊期对4种药物不敏感，不宜在此阶段对多子小瓜虫进行灭杀处理。

表2 各药物处理不同时间后鱼的死亡数与死亡率

表3 不同药物处理后试验鱼鳃及尾鳍上的营养体数量

2.3 4种药物对幼虫期小瓜虫的处理效果

在幼虫营自由生活的1d内使用上述四种药物处理的效果都很好，对处理后的水体及箱底部抽样100个虫体进行镜检可知，采用福尔马林、高锰酸钾、硫酸铜、辣椒水处理的幼虫死亡数量分别为94、92、94、93个，结果没有显著性差异。从处理开始到试验结束，鱼尾鳍、鳃上的寄生虫数量相比营养体期、胞囊期进行药物处理要少得多(表3)。对幼虫期小瓜虫处理30d内，没有试验鱼死亡，成活率与对照组没有差异(表2)。这表明，多子小瓜虫在幼虫阶段对药物敏感，使用上述药物对多子小瓜虫的幼虫都有很好的杀灭效果。

3 小结与讨论

(1)多子小瓜虫的生活史可分为营养体期、胞囊期(二分裂期、四分裂期、连续分裂期)、幼虫期。通过对多子小瓜虫生活史的连续观察可知，在水温22～24℃下完成1个生活史需要5～6d。营养体期到胞囊期需要18～24h，从胞囊期到幼虫期需要20～24h，幼虫需2d的时间寻找新的宿主，在48h后，没有找到新宿主的幼虫会逐渐死亡，96h后会全部死亡。寄生后的幼虫到营养体需3～4d。营养体在鱼体上正常情况下生活4～5d会离开鱼体，在水中完成其生殖。在受到药物刺激后，营养体在很短的时间(8～12h)内形成胞囊，在胞囊内分裂繁殖出大量的幼虫，待药物分解到其能适应的浓度后释放出来。正常情况下从幼虫寄生到鱼体发育成营养体，再从营养体离开鱼体生殖产生幼虫需要10d左右[3]。虫体在鱼体上的寄生表现出由多到少，再从少到更多，而鱼病症状也表现出阶段式的由重到轻，再从轻到更重的循环，一般经过2个这种循环便会产生鱼的大量死亡。

(2)本试验结果表明，多子小瓜虫在胞囊期对几种药物均不敏感，使用福尔马林、高锰酸钾、硫酸铜、辣椒煎水进行处理的效果均最差，30d后，4种药物处理后的试验鱼死亡率均达90%以上，存活的个体体表都有大量的虫体寄生，接近死亡。在幼虫自由活动期时用药效果最好，幼虫对4种药物都敏感，30d后，鱼的成活率达100%，鱼体表只有极个别的虫体寄生，鱼体健康，活动正常。在营养体期使用药物处理，只有福尔马林和辣椒煎水2种药物有较好的效果，这2种药物处理30d后统计其成活率超过50%；采用高锰酸钾处理没有明显效果，但也未产生加重病情的情形，30d后统计其成活率低于24%。而用硫酸铜处理不但没有起到治疗的作用，反使病情加重，20d后其试验鱼全部死亡。其原因应为福尔马林及辣椒煎水能杀死部分虫体，从而使病原体相对减少，而硫酸铜则不能杀死虫体，反而刺激其营养体迅速产生胞囊，使病原体的数量大大增加，表现出病情特别严重，死亡率最高。

(3)从试验结果可以得出，治疗多子小瓜虫病的最佳时机为其病原体自由活动的幼体阶段，即幼虫从胞囊中钻出来的1～2d内。

(4)多子小瓜虫的营养体期对药物不敏感或具有抗性的原因是营养体在上皮细胞下寄生，同时由于不断转动而引起上皮细胞轻度增生形成囊泡，从而把营养体包埋在病灶里，产生耐药性，营养体外的囊泡对药物有一定的抵抗作用；另外，营养体受到药物刺激后会迅速产生胶质包裹其成体形成胞囊，胶质的胞囊对药物有抵抗作用，一方面保护其营养体，另一方面增加其繁殖。胞囊期对药物不敏感或具有抗性的原因是其体外胶质的胞囊对药物有抵抗作用[6]。

(5)比较4种药物的治疗效果，其中福尔马林的效果最好，虽然福尔马林分解快、残留少，但相对于高锰酸钾治疗成本较高。用中草药辣椒煎水也有较好疗效，且用药安全，无残留、无污染，但治疗成本相对较高，用药程序烦琐。

(6)要想取得更好的治疗多子小瓜虫病的效果，除了抓住在幼虫期用药外，还应在用药后第4d左右再用药1次。按照此方法，笔者在重庆合川市指导养殖户使用福尔马林治疗大口鲶多子小瓜虫病取得了良好的效果。

致谢：本试验得到了正大集团成都正大有限公司的大力支持，在此深表感谢。

[1]金夑理，唐家汉.鱼病防治彩色图册[M].长沙：湖南科学出版社，1990.

[2]农业部《渔药手册》编撰委员会.渔药手册[M].北京：科学出版社，1998.

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