β2微球蛋白和调节T细胞在非霍奇金淋巴瘤中的应用

黄晶

β2微球蛋白和调节T细胞在非霍奇金淋巴瘤中的应用

黄晶

目的探讨血清β2微球蛋白(β2-MG)和CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的临床意义。方法对67例非霍奇金淋巴瘤患者按骨髓涂片检查结果分为淋巴瘤白血病组，有骨髓侵润组和无骨髓侵润组。40例健康体检者为对照组。用AU2700全自动生化分析仪分别对其血清进行β2-MG进行检测，同时用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞表达百分率。结果①非霍奇金淋巴瘤患者的血清β2-MG水平明显高于对照组(P<0.01)，其中淋巴瘤白血病组和有骨髓侵润组β2-MG水平高于无骨髓侵润组(P<0.01);淋巴瘤白血病组高于骨髓侵润组(P<0.01).3组非霍奇金淋巴瘤患者化疗后β2-MG水平均低于化疗前的水平(P<0.05)。②非霍奇金淋巴瘤患者、健康对照组外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞占CD4+淋巴细胞的比例分别为6.73±1.79%、4.15±1.43%。非霍奇金淋巴瘤患者Treg细胞表达高于健康对照组，差异有显著性(P<0.05)；淋巴瘤白血病组和有骨髓侵润组Treg细胞表达比例明显高于无骨髓侵润组(P<0.05)，疾病越严重，Treg细胞表达水平越高;非霍奇金淋巴瘤患者化疗前外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞水平升高，化疗后外周血Treg细胞水平降低，结论血清β2微球蛋白和CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞检测对非霍奇金淋巴瘤的诊断，疗效及预后的判断具有重要的临床价值。

非霍奇金淋巴瘤; β2微球蛋白;血清; CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞 流式细胞术

β2微球蛋白(β2-MG)是机体内一种小分子蛋白质，以构成MHC-I类分子发挥作用[1]。非霍奇金淋巴瘤(NHL)是一组高度异质性的淋巴系统恶性肿瘤[2]。由于克隆性增生的淋巴细胞功能不一，并在体内广泛分布，因此它可以累及任何一个器官。骨髓是其常侵犯的部位之一[3]。淋巴瘤中，β2-MG可以从肿瘤细胞和免疫细胞上脱落，β2-MG升高预示着疾病进展和和预后不良。调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)由Sakaguchi等在1995年首次报道，近年来发现调节性T细胞在多种实体肿瘤如卵巢癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、胃肠道肿瘤等患者的外周血和肿瘤局部组织升高[4]可抑制CD4+T细胞、CD8+T细胞的功能，参与肿瘤负调控，作为预后较差的一个独立指标。我们检测了67例NHL患者血清中的β2-MG水平和外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞表达百分率，了解其在非霍奇金淋巴瘤中的临床价值。

1 资料与方法

1.1研究对象 2005年2月至2009年2月在我院住院的NHL患者67例，男43例，女24例，年龄8～74岁，中位年龄48岁。均经病理学或细胞穿刺确诊，骨髓涂片检查分类中淋巴瘤细胞比例≥25%或外周血出现淋巴瘤细胞诊断为淋巴瘤细胞白血病；5%≤淋巴瘤细胞≤20%诊断为骨髓侵润；<5%或未找到典型淋巴瘤细胞为无骨髓侵润组[5]。根据上述分类标准将67例患者分为:淋巴瘤白血病20例；骨髓侵润组23例，无骨髓侵润组24例。所有患者均除外可能引起血清β2-MG水平和外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞升高的其他疾病。对照组40例均为来我院健康体检者，男15例，女25例，年龄9岁～76岁，平均年龄51.1岁。

1.2方法 患者治疗前及治疗2～4个疗程后,分别于清晨空腹采集静脉血4 ml,2 ml EDTA-2K抗凝，流式细胞术分析；2 ml分离出血清，β2-MG采用免疫透射比浊法，在AU2700全自动生化分析仪上进行检测，试剂由奥林巴斯原厂提供，β2-MG<2 mg/L为正常。

1.3外周血CD4+CD25+CD127low/-Treg检测 取两个流式试管，分别加入mouseIgG1-FITC/mouse IgG1 - PE/CD4-PE-Cy5和CD25-FITC/CD127 - PE/CD4-PE-Cy5,每管再加100ul抗凝全血，混匀，避光孵育30 min,2 ml溶血素溶血，PBS洗两次，流式细胞仪检测，CellQuest软件获取并分析，计算外周血CD4+CD25+CD127low/-Treg占CD4+淋巴细胞比例，试剂均采用美国BD公司产品，包括溶血素(FACSLying)等。FACSCalibur型流式细胞仪购自美国BD公司。

1.4统计学方法 采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1①NHL各组的β2-MG水平明显高于对照组，差异有显著性(P<0.01),其中淋巴瘤白血病组与骨髓侵润组β2-MG水平均高于无骨髓侵润组(P<0.01)；淋巴瘤白血病组β2-MG水平高于骨髓侵润组(P<0.01)。②NHL患者CD4+CD25+CD127low/-Treg表达高于健康对照组，差异有显著性(P<0.05)，其中淋巴瘤白血病组与骨髓侵润组Treg水平均高于无骨髓侵润组(P<0.05)；淋巴瘤白血病组Treg水平高于骨髓侵润组(P<0.05)，详见表1。

2.2①67例非霍奇金淋巴瘤患者治疗前的β2-MG的平均检测结果为(6.60±1.12)mg/L，治疗后的检测结果为(3.45±1.19)mg/L，治疗后的检测结果明显下降，两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。②化疗前外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞水平升高，化疗后外周血Treg细胞水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 各组非霍奇金淋巴瘤患者与对照组Treg和β2-MG检测结果

表2 67例非霍奇金淋巴瘤治疗前，后检测结果

3 讨论

β2-MG是一种相对分子质量较小的蛋白质，为细胞膜上完整组织相容性抗原的一部分。除红细胞与胎盘滋养层细胞外，所有正常有核细胞与肿瘤细胞表面均存在，是一种非特异性肿瘤标志物，有研究表明恶性淋巴瘤患者血清β2-MG浓度增高，可能是由于细胞周转增加，它通常反映了肿瘤的负荷，广泛病变者高于局限病变者[6]。人体β2-MG水平相当恒定，β2-MG容易通过肾小球滤过膜，几乎全部由近曲小管以胞饮方式摄取，在局部被代谢降解为氨基酸[7]。在排除肝脏，肾脏疾病和自身免疫性疾病后，β2-MG水平明显增高提示骨髓可能发生侵润。多数学者认为，β2-MG水平持续升高，提示病情恶化，肿瘤患者治疗后β2-MG水平明显下降者病情多稳定。β2-MG升高组复发率高于β2-MG正常组。本文检测结果显示：非霍奇金淋巴瘤组β2-MG含量显著高于对照组(P<0.01)，差异具有显著性。淋巴瘤白血病组与骨髓侵润组β2-MG水平均高于无骨髓侵润组(P<0.01)；淋巴瘤白血病组β2-MG水平高于骨髓侵润组(P<0.01)。由此可见：β2-MG是一个重要的非霍奇金淋巴瘤血清学标记物，对非霍奇金淋巴瘤的诊断及对骨髓是否侵润具有重要的临床意义。67例非霍奇金淋巴瘤β2-MG水平从化疗前的(6.60±1.12)mg/L下降至化疗有效后的(3.45±1.19)mg/L，前后有显著性差异(P<0.01)。以上数据说明，β2-MG升高水平与疾病进展成正比，与治疗反应和疾病预后成反比。

本研究显示NHL患者CD4+CD25+CD127low/-Treg表达率高于健康对照组，其中淋巴瘤白血病组尤高，与无骨髓侵润组相比有显著性差异。Treg细胞比例升高可抑制机体免疫功能，可能是NHL肿瘤细胞逃避抗肿瘤免疫反应，导致肿瘤发生、发展的原因之一。

有许多研究表明，肿瘤患者摘除肿瘤组织或化疗后体内的CD4+CD25+CD127low/-Treg降低[8]。本研究同时比较了NHL患者化疗前与化疗后外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞比例，发现化疗前外周血Treg细胞比例升高，化疗后及缓解期患者较治疗前患者外周血Treg细胞比例明显降低，提示肿瘤负荷与NHL患者体内的CD4+CD25+CD127low/-Treg数量有关，治疗或缓解期患者的免疫抑制状态得到一定纠正，这可能是细胞免疫功能恢复，产生抗肿瘤免疫反应，从而抑制肿瘤生长或杀灭肿瘤的原因之一。CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞比例可作为肿瘤患者免疫功能状态的一种客观标志，对临床观察病情发展有很大的指导意义。

以往研究表明，IPI,LDH,β2-MG对NHL患者的预后有重要提示作用，本研究分析了初诊患者Treg细胞表达水平与这些常规预后指标间的关系，结果表明67例初诊患者中Treg细胞的表达与IPI,LDH和β2-MG之间呈明显正相关。

综上所述，β2-MG代表NHL的肿瘤负荷，Treg细胞可作为肿瘤患者免疫功能状态的一种客观标志，项目联合检测可以提高疾病的诊断效率，联合检测β2-MG和Treg细胞可提高非霍奇金淋巴瘤的疗效和判断预后的敏感度和特异度，对非霍奇金淋巴瘤的治疗、复发、转移提供依据。

[1] Jan K.The HLA system:Firstof two parts.N Engl J Med,2000,343(10):702-709.

[2] 江红，李佩章，劳明.血清LDH和β2-MG水平与非霍奇金淋巴瘤的预后关系.医学研究杂志，2008,37(10):91-92.

[3] 李志阳，王金龙，李菊香.非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯后骨髓象分析.实用医学杂志，2009,25(3):428-429.

[4] Pyzik M,Piccirillo CA.TGF-bet al modulates Foxp3 expression and regulatory activity in distinct CD4+T cell subsets’.J Leukoc Biol,2007,82(2):335-346.

[5] 吴晓芝.血液病诊断与鉴别诊断图谱.北京：人民卫生出版社，2009:221-226.

[6] 何晖，翟明，刘丽君.NHL患者血清β2-MG和LDH水平与骨髓侵润的相关性研究.白血病，淋巴瘤，2003,12(1)；18-20.

[7] Federico M,Guglielmi C,Lnminary S,et al.Prognostic relevance of serum β2-microglobulin in patients with follicular lymphoma treated with anthracycline - containing regimens.A GISL study.Haematologica,2007,92(11):1482-1488.

[8] 章圣辉，韩义香，吴建波，等.子宫颈癌患者外周血CD4+、CD25+、CD127low/-调节性T淋巴细胞的含量及肿瘤免疫水平检测.中华妇产科杂志，2007,42(6)：419-420.

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