高效液相色谱法测定更年安舒颗粒中松果菊苷含量

董政起，高 军，陈 昕，程东岩*

(1.中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193；2.吉林省中医药科学院，吉林 长春 130012；3.长春中医药大学，吉林 长春 130022)

·实验研究·

高效液相色谱法测定更年安舒颗粒中松果菊苷含量

董政起1，高 军2，陈 昕3，程东岩2*

(1.中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193；2.吉林省中医药科学院，吉林 长春 130012；3.长春中医药大学，吉林 长春 130022)

目的：建立更年安舒颗粒中松果菊苷的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法：色谱柱采用shim-packVP-ODS柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相采用甲醇-乙腈(15∶10)配成的混合溶液为A溶液，以1%冰醋酸溶液为B溶液，以A溶液-B溶液(22：78)为流动相；检测波长为330nm；柱温为30 ℃；流速为1mL/min。结果：松果菊苷在0.080～1.286μg范围内线性关系良好，相关系数为0.999 8，平均回收率为99.2%，RSD=1.85%(n=6)。结论：HPLC测定方法简便，结果准确，可用于更年安舒颗粒的质量控制。

更年安舒颗粒；松果菊苷；高效液相色谱法(HPLC)；质量控制

更年安舒颗粒是中国医学科学院研制的中药复方颗粒剂，由肉苁蓉、女贞子等5味中药组成,具有益肾补阴，清心开郁之功效，适用于以阴虚内热为主所致的女性更年期综合征。松果菊苷为君药肉苁蓉中主要有效成分，具有抗氧化、保护神经、保护肝脏、抗炎、抗肿瘤、改善学习记忆以及免疫调节等作用[1-3]。本文以松果菊苷为指标性成分，以高效液相色谱法建立更年安舒颗粒的质量控制方法，控制产品质量，保证临床疗效。

1 仪器与试药

日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器；松果菊苷对照品(为中国药品生物制品检定所提供；更年安舒颗粒自制(批号:120608、120813、120818、120824)，规格5g/袋；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液 精密称取松果菊苷对照品适量，置容量瓶中，加50%甲醇，制成每1mL含50μg松果菊苷的溶液，作为对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液 精密称取0.3g本品(装量差异项下),研细，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇至刻度，称重，超声处理30min，放冷，以50%甲醇补足再次称重时所减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱：shim-packVP-ODS柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：以甲醇-乙腈(15∶10)配成的混合溶液为A溶液，以1%冰醋酸溶液为B溶液，以A溶液-B溶液(22∶78)为流动相；检测波长：330nm；柱温：30 ℃；流速：1mL/min；进样体积：10μL。松果菊苷峰与更年安舒颗粒中其他组分分离完全，且分离度大于1.5，理论板数按松果菊苷峰计算应不低于3 000。

2.3 干扰试验 按比例从处方中去除肉苁蓉,按2.1.2项下制备成肉苁蓉的阴性对照样品。取供试品溶液、阴性对照样品溶液及对照品溶液各10μL，按2.2项下色谱条件进样测定。结果显示，在松果菊苷色谱峰相应位置，阴性对照样品溶液无吸收峰，故确定处方中其他药味对测定无干扰。

2.4 线性关系的考察 精密称取松果菊苷对照品4.02mg，加50%甲醇溶解并稀释定容至10mL，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6mL,分别置5mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系列对照品溶液。分别吸取上述6份对照品溶液各10μL，按2.2项下色谱条件进样测定。以峰面积积分值为纵坐标，松果菊苷的浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=-22 688+1 542 263X,r=0.999 8，在0.080～1.286μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，按选定色谱条件进样测定,连续进样6次。结果显示，松果菊苷峰面积的RSD为0.91%(n=6)，故仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10μL，分别于配制后0、4、8、12、24h按选定色谱条件进样测定，测得松果菊苷峰面积的RSD为1.43%(n=6)，故溶液稳定性良好。

2.7 重复性试验 从同一批号样品(批号：120608)中，精密称取6份，按2.1.2项下方法制备并按选定色谱条件进样测定，测得松果菊苷平均含量为42.69mg/袋，RSD=1.67%(n=6)。

2.8 中间精密度试验 按2.1.2项下方法取同一批号样品(批号：120608)6份，于不同日期，由不同分析人员，在不同设备上，按选定色谱条件进样测定，结果显示松果菊苷平均含量为42.04mg/袋，RSD=1.63%(n=6)。

2.9 加样回收率试验 采用加标回收方法，精密称取已知含量的同一批号样品(批号：120608，含松果菊苷8.483mg/g)约0.3g共6份，分别精密加入松果菊苷对照品(2.67，2.61，2.52，2.72，2.70，2.64mg)，按2.1.2项下及2.2项下方法进行配置和测定松果菊苷含量。结果显示，平均回收率为99.2%,RSD=1.85%(n=6)。具体结果见表1。

表1 松果菊苷回收率测定结果

根据上述测定结果可知，该方法平均回收率达99.2%，且RSD小于3%，故认为用此方法测定制剂中松果菊苷含量完全可行。

2.10 样品测定 分别取4个批号的样品(批号分别为120608、120813、120818、120824),按2.1.2项下方法制成供试品溶液。再精密吸取10μL对照品溶液及供试品溶液，按上述选定色谱条件测定，计算样品中松果菊苷含量，结果4批样品的含量分别为42.59、36.40、53.25、40.35(mg/袋)(n=3)。

2.11 耐用性试验

2.11.1 不同品牌色谱柱 精密称取同一批号样品(批号：100608)，制成供试品溶液，分别采用3种色谱柱：shim-packVP-ODS柱(250mm×4.6mm，5μm);AlltimaTMC18柱(250mm×4.6mm,5μm);KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，进样测定,计算松果菊苷含量。结果表明3种色谱柱测定样品均能达到良好分离，精密度良好。

2.11.2 柱温 精密称取同一批号样品(批号：100608)，制成供试品溶液，分别于柱温30、35 ℃按选定色谱条件进样测定，结果表明柱温变化不能引起测定结果较大变化。

2.11.3 流速 精密称取同一批号样品(批号：100608)，制成供试品溶液，依选定色谱方法分别用流速0.8、1.0、1.2mL/min进行测定。结果表明流速变化对分离效果及测定结果影响较小。

3 讨论

通过比较3种流动相：1)甲醇-1%冰醋酸溶液(29∶71)；2)以甲醇-乙腈(15∶10)配成的混合溶液为A溶液，以1%冰醋酸溶液为B溶液，以A溶液-B溶液(22∶78)为流动相；3)乙腈-水(13.5∶86.5)，结果以流动相2)分离效果最佳，故确定流动相2)为测定松果菊苷含量的最终流动相。另外，通过对不同溶剂、不同提取方法和提取时间进行比较试验，最终确定用50%甲醇超声提取30min为最佳方法，方法简便易行。

[1]麻景梅,宋新波,张丽娟,等.荒漠肉苁蓉多糖的研究[J].吉林中医药,2012,32(2):199-201.

[2]国家药典委员会.中国药典[M].北京:中国医药科技出版社,2010:126.

[3]姜翔之,陈英红,罗浩铭,等.HPLC法测定藤黄健骨丸中松果菊苷的含量[J].中国药师,2009,12(4):481-482.

R284.1

A

1003-5699(2013)06-0607-02

董政起(1983-)，男，助理研究员，博士。研究方向：中药新药研究工作。

*[通信作者] 程东岩，女，副研究员,Tel：0431-86058657，E-mail:cdyan1225@sohu.com。

2013-04-29)