HPLC法测定妇阴舒洗液中绿原酸的含量

冉启军，许 洋，丁 宁

(1.遵义医学院附属医院 药剂科,贵州 遵义 563099；2.贵阳中医学院 药学系，贵州 贵阳 550002)

·技术与方法·

HPLC法测定妇阴舒洗液中绿原酸的含量

冉启军1，许 洋1，丁 宁2

(1.遵义医学院附属医院 药剂科,贵州 遵义 563099；2.贵阳中医学院 药学系，贵州 贵阳 550002)

目的建立测定妇阴舒洗液中绿原酸含量的HLPC方法。方法采用高效液相色谱法，选用Hypersil ODS C18(250 mm×4.6 mm 5 μm)色谱柱；流动相为甲醇-0.5%醋酸酐水溶液(20∶80)；柱温：25 ℃，检测波长为327 nm，流速为1.0 mL/min。结果绿原酸在0.25～2.50 μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率98.28%,RSD=0.80%(n=5)。结论该方法操作简便、灵敏度高、重现性好、测定结果可靠，可用于妇阴舒洗液中绿原酸的含量测定。

妇阴舒洗液；绿原酸；高效液相色谱法

妇阴舒洗液是用金银花、虎耳草、蛇床子等7味中药制成的妇科外用复方制剂。主要用于由金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌等引起的妇科炎症，具有抗菌、消炎、止痒作用。妇阴舒洗液中的君药金银花LonicerajaponicaThunb所含主要有效化学成分为“绿原酸”，绿原酸具有对大肠杆菌、金色葡萄球菌、肺炎球菌和病毒有较强的抑菌和杀菌作用，临床上用于治疗急性细菌性感染疾病[1-2]；我们用HPLC法对妇阴舒洗液中绿原酸含量进行测定，从而为建立妇阴舒洗液

的质量控制标准提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪(在线脱气机， 单泵， VWD检测器， 自动进样器，Agilent化学工作站)、FA1004型电子分析天平(上海良平仪器仪表有限公司)。

1.2 试药 对照品：绿原酸由中国药品生物制品检定所提供(批号53-200111，供含量测定用)； 甲醇为色谱纯、醋酸酐为分析纯、水为重蒸馏水；供试品：由贵阳中医学院三源药业有限公司生产(批号20120301)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS C18(250 mm×4.6 mm 5 μm);流动相：甲醇-0.5%醋酸酐水溶液(20∶80); 柱温：25 ℃；流速为1.0 mL/min; 检测波长327 nm，进样量10 μL。

2. 2 对照品溶液的制备 绿原酸，精密称定，置于10 mL棕色容量瓶中,加甲醇溶解,并定容至刻度,摇匀,制成对照品绿原酸的浓度为0.15 mg/mL的溶液，备用。

2. 3 供试品溶液及阴性对照液的制备 精密吸取溶液4mL，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至10 mL，摇匀，微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；按处方比例和制备方法，制成不含金银花的溶液。按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。

2.4 专属性试验 分别取对照品、供试品、阴性对照溶液各10 μL进样，记录色谱图。结果见图1，对照品、供试品溶液均出现了绿原酸色谱峰，而阴性对照溶液无色谱峰，表明在本实验条件下，无其它杂质干扰绿原酸的测定。

2.5 线性关系的考察 精密称定10 mg绿原酸对照品，加甲醇溶解后，分别配成浓度为：0.025、0.050、0.10、0.150、0.20、0.250 mg/mL的对照品溶液，分别取上述对照品溶液10 μL进样,记录色谱峰面积,绿原酸在0.25～2.50 μg线性范围内，线性回归方程为Y=2982.83X - 47.45(r=0.9999,n=6)。

2.6 精密度试验 精密吸取绿原酸对照品溶液10 μL,重复进样5次，结果以峰面积计算，RSD为0.12%，表明该精密度良好。

2.7 重复性试验 取同一批次(批号20120301)的样品5份，按2.3项下方法分别制成供试品溶液，按上述色谱条件进样，测定峰面积。结果，绿原酸的平均含量为3.854 mg/mL,RSD=0.9%(n=5),表明本试验方法重复性良好。

2.8 稳定性试验结果 取2.7项下一份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8 h进样，测定峰面积，结果RSD=1.07%(n=5)，表明该方法制备的供试品溶液在8h内基本稳定。

2.9 加样回收率试验 精密吸取妇阴舒洗液(批号20120301)2.0 mL，各取5份，分别于每份样品中分别加入绿原酸对照品, 按供试品制备方法制备及测定，结果回收率为：98.28%、RSD=0.80%(见表1)。

注：A： 阴性对照溶液;B： 绿原酸对照品溶液;C ： 供试品溶液。 图1 HPLC图谱

表1加样回收率试验(n=5)

样品含量(mg)加入对照品(mg)测得值(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0．19270．19000．381299．210．19270．19000．380498．790．19270．19000．379498．2698．280．800．19270．19000．377397．160．19270．19000．378998．00

2.10 样品含量测定 取不同批次的妇阴舒洗液供5批，按供试品制备方法制备及测定，结果(见表2)。

表2 5个批号妇阴舒洗液的含量测定结果

批号称样量(mL)平均值(mg/mL，n=3)总平均值(mg/mL)201202014．03．197RSD=1．1%201203014．03．854RSD=0．9%201003024．03．261RSD=1．2%3．639201204014．03．684RSD=0．9%201205014．04．368RSD=1．3%

3 讨论

3.1 色谱条件的选择 本文在色谱条件的选择上，采用了3种不同品牌色谱柱：Hypersil ODS C18(250mm×4.6mm 5μm)、lichrspher5-C18(150mm×4.6mm 5μm) 、 Diamonsil HPLC C18(4.6×250mm 5μm)色谱柱；流动相的选择：甲醇-0.5%醋酸酐水溶液(20∶80)、甲醇-3%冰醋酸(8∶92)[5]、甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(15∶85∶1∶0.3)[6]、0.4%磷酸溶液-乙腈(85∶15)[7]等4种，在各系统条件下对绿原酸进行检测，结果发现以流动相甲醇-0.5%醋酸酐水溶液(20∶80)进行洗脱时，绿原酸在不同色谱柱上均能得到了良好的分离。

3.2 本研究考察了5个批次妇阴舒洗液中绿原酸含量，结果显示妇阴舒洗液中绿原酸含量平均为3.639 mg/mL。采用高效液相色谱法对妇阴舒洗液中绿原酸含量进行测定，此方法具有分离度大于1.5，且该试验方法精密度、稳定性、重现性、以及加样回收率试验结果满意，可作为妇阴舒洗液生产过程中的质量控制参考。

[1] 江苏新医学院.中药大词典[M].上海：科学技术出版社，1997：1335.

[2]侯家玉，方泰惠.中药药理学[M].北京：中国中药出版社,2007:53.

[3]国家药典委员会.中国人民共和国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社， 2010：205-206.

[4] 胡生俊，徐岳鑫，董塞文，等.高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量[J].中国药业，2011,20(3)：33.

[5]姜锋卫.HPLC法测定清热解毒注射液中绿原酸的含量[J].中国医学工程，2011，19(9)：46-47.

[6]唐慧慧，蔡清宇.高效液相色谱法测定柴银口服液中绿原酸含量[J].解放军药学学报，2011，27(5)：442-443.

[7]史国举.HPLC法测定双花百合片中绿原酸的含量[J].中国当代医药，2011,18(20)：38-39.

[收稿2013-03-03;修回2013-04-05]

(编辑：王福军)

HPLCdeterminationforthecontentofchlorogenicacidinFuYinShulotions

Ranqijun,Xuyang,Dingning

(1.Department of Pharmacy, The Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Guizhou Zunyi 563099, China;2.Departmene of Pharmscy,Guiyang College of TCM,Guizhou Guiyang 550002 ,China)

ObjectiveTo establish the determination method for the content of chlorogenic acid inFuYinShulotions by HPLC.MethodsThe content of chlorogenic acid was determined by HPLC with Diamonsil column (4.6mm×250mm, 5μm) and column temperature of 25℃. The mobile phase was a mixture of methyl alcohol and 0.5% acetic anhydride (20∶80) with the flow rate of 1.0 mL/min and the detection wavelength of 327 nm.ResultsThe content of chlorogenic acid presented a good linearity from 0.25 μg to 2.50 ug (r=0.9999). The average recovery was 98.28% and RSD was 0.80% (n=5).ConclusionThis method is accurate and sensitive with a good reproducibility and could be used for the determination of chlorogenic acid content inFuYinShulotions.

Fuyinshulotions; chlorogenic acid; HPLC

R927.2

A

1000-2715(2013)03-0264-03

丁宁，男，副教授，研究方向：中药现代化，E-mail:360669971@qq.com。