丹参、维生素治疗HHcy兔腹主动脉血管超声及病理改变

王国庆 康爱英

南阳医学高等专科学校 南阳 473058

目前，有关高同型半胱氨酸血症（HHcy）兔腹主动脉血管超声检查的报道较少，而用丹参和维生素治疗兔HHcy，观察腹主动脉血管超声和病理变化的研究未见报道，本文采用高蛋氨酸饮食建立兔HHcy模型，用丹参、维生素（即叶酸、维生素B6和B12三联）作为干预药物，观察血清生化指标、腹主动脉血管超声及病理变化，探讨丹参和维生素对HHcy兔动脉血管变化的影响。

1 材料与方法

1.1动物分组与HHcy模型的建立筛选健康雄性家兔40只，月龄3～5个月，体质量1.5～2.0kg，标准饲料适应性喂养1周，随机分为4组，每组10只。动物饲料按100g／（d·只）计算。对照组：NC喂标准饲料；蛋氨酸组：Met喂蛋氨酸饲料，即标饲＋2%蛋氨酸制成；丹参组：SM喂蛋氨酸饲料＋丹参口服液3.3g／（kg·d）灌服，丹参口服液由南阳医专中药教研室用丹参经煎制、过滤、浓缩为1g／mL生药；维生素组：Vit喂蛋氨酸饲料＋叶酸1.5mg／（kg·d）、VB120.25mg／（kg·d）、VB620mg／（kg·d）灌胃，对照组和蛋氨酸组每天用等量生理盐水灌胃。通过测定血浆Hcy含量，以超过22.44μmol／L，判定HHcy兔模型制备成功。动物连续喂养8周。

1.2生化指标检测在实验进行第0周、4周、8周末时，自兔耳缘静脉采血2mL，用循环酶法检测血浆Hcy含量；8周末比色法测定 MDA、SOD，一氧化氮（NO）由硝酸还原酶法测定，血栓素B2（TXB2）由酶免法测定。

1.3血管超声检查第4周、8周末，进行腹主动脉血管超声检查（GE Lg－9彩色多普勒超声诊断仪，探头频率4～10 MHz），观察血管内膜光滑程度及有无粥样斑块形成，同时测量腹主动脉内－中膜厚度（IMT）和腹主动脉血流峰值（Vp）。

1.4病理学检查实验8周，处死动物，取腹主动脉血管，10%福尔马林固定、取材、石蜡切片、H－E染色，光镜观察。

1.5统计学处理各组数据用均数±标准差（s）表示，并用SPSS 13.0统计学软件进行处理，组间比较用F检验，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1血浆Hcy含量变化0周时各组血浆Hcy含量为16.67～22.44μmol／L（即正常参考值），超过此值上限确定为HHcy。Met和SM组在第4、8周末时Hcy均显著高于同期NC（P＜0.01），Vit组第4周时高于同期NC组，比 Met和SM组低，8周恢复正常水平（见表1）。实验期间家兔一般情况良好，Met组2只死亡。◆

表1 血浆Hcy含量比较 （s，μmol／L）

表1 血浆Hcy含量比较 （s，μmol／L）

注：与 NC组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；与 Met组比较，★P＜0.01；与SM组比较，◆P＜0.05，◆◆P＜0.01

NC组 18.15±1.71（10）18.12±1.33（10）19.09±1.20（10）Met组 19.34±1.65（10）62.92±2.26（9）＊＊ 65.23±1.12（8）＊＊SM 组 18.13±2.01（10）53.44±2.33（10）＊＊ 56.37±1.29（10）＊＊Vit组 19.23±2.47（10）32.53±1.28（10）＊★◆ 22.35±2.30（10）★◆

2.2血清NO、TXB2、MDA、SOD含量变化实验8周时，Met组与NC组比较，血清MDA、TXB2含量显著升高（P＜0.01），NO、SOD活力明显降低（P＜0.01）；SM 和 Vit组与Met组比较，MDA、TXB2含量显著下降，NO、SOD活性升高，见表2。

表2 血清NO、TXB2、MDA、SOD含量比较 （s）

表2 血清NO、TXB2、MDA、SOD含量比较 （s）

注：与 NC组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；与 Met组比较，#P＜0.05，﹟﹟P＜0.01

组别 n NO（μmol／L）TXB2（ng／L）MDA（μmol／L）SOD（U／mL）28±23.46 Met组 8 57.96±13.80＊ 345.33±35.27＊＊ 45.27±8.16＊＊ 285.35±26.30＊＊SM组 10 132.12±14.22＊﹟﹟ 154.48±21.43﹟﹟ 23.12±0.17﹟﹟ 473.69±28.09﹟﹟Vit组 10 159.37±30.26＊＊﹟﹟ 145.68±24.36﹟﹟ 22.48±7.44﹟﹟ 420.48±21.56 NC组 10 99.33±19.41 134.50±29.17 22.32±6.02 370.﹟﹟

2.3腹主动脉超声检查结果实验4周时NC组血管内膜线细、光滑、连续性好；Met组血管内膜欠光滑，边缘不整，有中等偏低回声团块，SM和Vit干预组无明显改变。8周末Met组血管IMT明显增厚，有偏强回声团，斑块边界不清，Vp显著增快。SM和Vit组与Met比较IMT显著减小，Vp显著减慢，均未见斑块形成。见图1～6。

图1 NC组4周内膜纤细、光滑

图2 NC组8周内膜光滑

图3 Met组4周内膜欠光滑，软斑

图4 Met组8周管腔狭窄，有斑块

图5 SM组8周内膜光滑，无斑块

图6 Vit组8周内膜轻度增厚，光滑

2.4 腹主动脉血管病理变化 大体观察：沿腹主动脉管壁剪开，NC组管壁光滑，Met组管腔内壁见黄色斑块及瓷白色大头针样纤维帽，内膜粗糙不平。光镜下观察：NC组血管内膜薄而光滑，与外膜平行，连续性好，中膜平滑肌细胞排列整齐，未见泡沫细胞。Met组：血管内膜粗糙，斑块突出于内膜面，斑块周围肉芽组织增生及淋巴细胞浸润，内膜下有大量不规则的平滑肌细胞，中层结构紊乱，斑块深部的泡沫细胞有变性坏死、崩解，形成粉红色无定形物质，中膜变浅，浅层肌纤维分离断裂。SM和Vit组血管内膜光滑，8周时内膜有轻度增厚，内膜下有少量泡沫细胞，中膜平滑肌细胞排列整齐，管壁均匀。见图7～14。

图7 NC组：10×10血管内膜光滑连续性好

图8 NC组：10×40内膜 下未见泡沫细胞

图9 Met组：10×10内膜下见斑块，管腔狭窄

图10 Met组：10×40有大量泡沫细胞，平滑肌细胞排列紊乱

图11 SM组：10×10，管壁厚薄均匀，膜下平滑肌排列稍乱

图12 SM组：10×40内皮完整，有少量泡沫细胞

图13 Vit组：10×10管壁厚薄均匀、平滑肌细胞排列整齐

图14 Vit组：10×40内皮完整、有少许泡沫细胞

3 讨论

近年的研究证实HHcy是AS新的、独立的危险因子［1］。因此，开展HHcy致AS形成和防治是心、脑血管疾病领域的热点问题。丹参具有祛瘀止通、活血通经之功效，但对HHcy导致兔AS是否有效及血管超声研究未见报道。

本研究给家兔喂高蛋氨酸饲料，分别在不同时段测定血清Hcy水平，Met组4周、8周时血清Hcy含量均显著高于NC组，表明兔HHcy模型制备成功。兔腹主动脉超声及组织学检查显示，Met组血管内膜明显增厚，中层结构紊乱，有大量的泡沫细胞及细颗粒状粥糜样物质；超声和光镜观查均发现有斑块形成，为动脉硬化改变征象，故认为HHcy可引起家兔动脉血管发生病理改变，是致AS的独立危险因素。

HHcy致动脉粥样硬化的机制目前尚未完全阐明，可能与血管内皮损伤、刺激血管平滑肌增值等因素有关［2］。实验发现，Met组家兔血清MDA、TXB2含量显著高于NC组，而NO、SOD活力则明显降低，提示HHcy家兔体内氧化应激增强，Hcy是多功能损伤因子［3］，其分子中的自由巯基可生成多种氧化产物，造成血管内皮细胞的损伤，MDA产生增多，消耗SOD；另外，Hcy升高，抑制SOD表达和分泌，导致内皮细胞抗氧化机制受损［3］，并增强超氧自由基介导的NO灭活作用，引起内皮细胞功能失调，使血管内皮细胞骨架结构发生变化；Hcy还使脂蛋白沉积，并被巨噬细胞吞噬形成泡沫细胞，引起动脉粥样硬化斑块形成。

丹参具有天然抗氧化作用［4］，可消除脂类自由基而阻断脂质过氧化反应。本研究中SM组血浆Hcy含量高于NC组，但与 Met组比较 MDA、TXB2含量显著降低，NO、SOD活力显著升高；血管超声及病理观察兔腹主动脉血管内膜光滑、无斑块形成，故认为丹参有干预HHcy兔动脉粥样硬化形成作用，其机制可能是丹参除抗氧化作用外，还降低缩血管成分TXB2水平，提升血管松弛因子NO含量，起到舒张血管，保护内皮细胞，具有延缓或阻止HHcy兔动脉粥样硬化形成的作用。

Vit组家兔血清生化指标及腹主动脉血管超声及组织学观察结果提示FA、VB6、VB12是同型半胱氨酸代谢酶必需的辅助因子［5］，加速 Hcy去路［6］，降低 Hcy水平，减轻血管内皮的损伤及血管平滑肌的增值，阻止AS的发生。

综上所述，高蛋氨酸饮食可诱发家兔HHcy，Hcy升高可通过氧化应激增强、损伤血管内皮、促进血管平滑肌增殖等机制，导致AS的发生。维生素降低Hcy的含量，丹参能对抗Hcy引起的氧化损伤、舒张血管等，延缓Hhcy所致心、脑血管疾病的发生。

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［2］刘娜，张书平，曹治宸，等 .高同型半胱氨酸血症对老年人血管疾病的影响［J］.临床荟萃，2003，18（19）：1 139－1 141.

［3］耿彬，常林，杜军保，等 .防止高同型半胱氨酸血症的新策略［J］.北京大学学报，2005，37（2）：215－219.

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［5］康爱英，王国庆 .血清叶酸、维生素B12、同型半胱氨酸水平与缺血性脑血管病的关系［J］.第四军医大学学报，2004，25（19）：封二.

［6］康爱英，王国庆 .多途径干预HHcy致免动脉粥样硬化的对比研究［J］.中国实用神经疾病杂志，2011，14（16）：1－4.