揉搓对玉竹中多糖提取率影响的研究※

钟喜光 刘瑞连 蒋晓煌 蒋孟良 刘朝晖 钟振平

玉竹为百合科植物玉竹Polygonatum odoratum(Mill.)Druce的干燥根茎。秋季采挖，除去须根，洗净，晒至柔软后，反复揉搓、晾晒至无硬心，晒干；或蒸透后，揉至半透明，晒干。具有养阴润燥，生津止渴的功能。用于肺胃阴伤，燥热咳嗽，咽干口渴，内热消渴[1]。玉竹提取物及多糖具有降血糖[2-4]、抗衰老[5-6]、免疫调节[6]、强心等作用[7-8]。玉竹产地加工，传统采用揉搓，但揉搓时间没有具体描述，全凭经验，以揉至玉竹条呈半透明、渗出糖质为宜。为探讨揉搓对玉竹多糖提取率的影响，本文以玉竹中多糖的提取率为评价指标，优选出玉竹的最佳揉搓时间。

1 实验材料

1.1 仪器UV-2000型紫外分光光度计（日本岛津）；DK-S22型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；AR5120型电子天平（OHAUS）；Tw1100型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；KDM型调温电热套（山东郓城华鲁电热仪器有限公司）。

1.2 试剂葡萄糖对照品（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号110833-201106）；其它试剂均为分析纯；水为纯水。

1.3 药物玉竹购于湖南省邵东县，经湖南中医药大学药学院中药鉴定教研室刘塔斯教授鉴定为百合科植物玉竹Polygonatum odoratum (Mill.)Druce的根茎。

2 方法与结果

2.1 药物炮制玉竹加工传统要求揉搓至渗出糖质，本实验对其揉搓时间进行了比较研究。将玉竹洗净，晒2天后除去须根，用两块砧板夹着来回揉搓2、4、6、10min，再切薄片，40℃烘干；另取晒2天除须根的玉竹条不揉搓，直接切薄片，干燥，备用。

2.2 多糖含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取 105℃干燥至恒重的无水葡萄糖 60.2mg，置 100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL中含无水葡萄糖0.602mg)。

2.2.2 供试品溶液的制备取揉搓不同时间的玉竹片10g，精密称定。置圆底烧瓶中，加水1000mL，加热回流1h，用脱脂棉滤过，如上重复提取1次，两次滤液合并，浓缩，移至1000mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。

2.2.3 线性关系考察精密量取对照品溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL，分别置 50mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液 2mL，置具塞试管中，分别加4%苯酚溶液1mL，混匀，迅速加入硫酸7.0mL，摇匀，于40℃水浴中保温30min，取出，置冰水浴中 5min，取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2010年版附录VA），在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程：y=9.084x－0.0071，r＝0.9997。

2.2.4 精密度试验精密吸取葡萄糖对照品溶液2.0mL同 2.2.3 线性关系考察方法测定吸光度，重复6次，计算6次吸光度的均数、标准差与RSD，结果RSD＝1.02 %，表明该方法精密度良好。

2.2.5 稳定性试验分别精密吸取同一份供试品溶液，于0、0.5、1.0、1.5、2.0h分别测定其吸光度，结果RSD＝1.42%，表明供试品溶液在2h内基本稳定。

2.2.6 重复性试验对同一批玉竹，按供试品溶液制备方法平行制备6份，依2.2.8 测定法测定吸光度，计算含量，其RSD=2.05%，实验表明该方法重复性好。

2.2.7 回收率试验精密称取已知含量（8.6%）的同一批玉竹约 0.5g 6份，精密称定，每份加入20.5mg/mL的葡萄糖对照品溶液2.0mL（与样品中葡萄糖含量的比例约为1:1），按供试品溶液制备方法分别制备供试品溶液，再依 2.2.8 测定法测定吸光度，按回收率（%）＝测得总含量－样品中含量/加入量×100 %计算，结果见表1。

表1 加样回收率实验结果

实验结果表明，该含量测定方法回收率高、准确性高，符合测定要求。

2.2.8 测定法 精密量取供试品溶液2mL，加乙醇10mL，搅拌，离心，取沉淀加水溶解，置50mL量瓶中，并稀释至刻度，精密量取2mL，照标准曲线的制备项下的方法，自“加4%苯酚溶液1mL”起，依法测定吸光度，用回归方程计算出供试品溶液中无水葡萄糖的重量，再按干燥品计算样品中葡萄糖的含量，测定结果见表2。

取本品粗粉约1g，精密称定，按文献方法提取、测定[1]，以其含量为100%，计算出不同揉搓时间多糖相对提取百分率，结果见表2。

表2 玉竹多糖提取率测定结果(n=3)

实验结果表明，玉竹未揉葡萄糖提取率最低，揉后提取率增加，且随时间增加而增加，到 6min含量最高，再延长揉搓时间，多糖提取率反而下降。

3 讨论

该研究表明，玉竹多糖提取率在一定内随时间的延长，多糖含量增加，这可能是在揉搓过程中，使糖汁从植物细胞中揉出，从而加快了糖的扩散、溶出所致，但随着揉搓时间延长，多糖含量反而下降，这也许是在揉搓过程中糖汁过多渗出，粘附容器内壁，导致损失所致。说明传统产地加工揉搓的重要性，以及揉搓程度的控制都非常重要。故玉竹在产地加工揉搓时，应掌握好揉搓程度，揉至玉竹柔软、渗出糖汁、半透明、粘手为宜。不及则多糖提取率较低，则玉竹条晒干后有皱纹，不饱满，玉竹片色泽不白，影响质量；过度揉搓多糖损失太多，提取率反而降低，且颜色太深，玉竹条易粘灰，难晒干，加之在贮藏中易泛油，也影响药材质量。揉的时间长短根据毛坯晒的程度、揉的方法以及搓的温度而异[9-11]。《中国药典》规定，玉竹含玉竹多糖以葡萄糖（C6H1206）计，不得少于 6.0%，本品含量为8.6%，故符合规定。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2010年版一部.北京:中国医药科技出版社,2010:78.

[2]Choi SB,Park SA.Steroidal glycoside from Polygonatum odoratum(Mill.)Druce.Improves insulin resistance but does not alter insulin secretion in 90%panereatectomized rats[J].Biosei Bioteehol Biochem,2002,66(10):2036-2043.

[3]陈莹,潘兴瑜,吕雪荣,等.玉竹提取物A对STZ诱导的I型糖尿病小鼠血糖及死亡率的影响[J].锦州医学院学报,2004,25(5):28-31.

[4]季峰,魏贤勇,刘广龙,等.玉竹多糖降血糖作用研究[J].江苏中医药,2006,27(9):70-71.

[5]单颖,潘兴瑜,姜东,等.玉竹多糖抗衰老的实验观察[J].中国临床康复,2006,10(3):79-81.

[6]单颖,姜东,潘兴瑜,等.玉竹多糖对衰老模型鼠细胞及体液免疫功能的影响[J].中国临床康复,2006,10(19):146-148.

[7]杨立平.玉竹总苷对大鼠血流动力学的影响[J].湖南中医药导报,2004,10(4):68.

[8]Jie AN,Jin-Zhi LIU,Chuan-Fang WU.Anti-HIV I/II Activity and Molecular Cloning of a Novel Mannose／Sialic Acid-binding Lectin from Rhizome of Polygonatum cyrtonema Hua[J].Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2006,38(2):70-78.

[9]康琪,朱若华.苯酚一硫酸法测定可溶性膳食纤维-聚葡萄糖含量的研究[J].首都师范大学学报(自然科学版),2007,28(6):38-41.

[10]谢雪芳.玉竹干片加工方法(下)[J].湖南农业,2006,(5):51-52.

[11]龚洵胜,陈卫军,刘卫平.玉竹 GAP生产及加工技术研究[J].湖南农业科学,2008,(5):51-52.