丙环唑和戊唑醇杀菌剂在香蕉中的残留检测方法研究

2013-10-09张月

湖南农业科学 2013年19期

张月

（中国热带农业科学院分析测试中心，海南海口 571101）

丙环唑和戊唑醇属于三唑类杀菌剂，是甾醇脱甲基抑制剂，具有保护、治疗、铲除三大功能，杀菌谱广、持效期长[1]。丙环唑的英文通用名称：Propiconazole，分子式：C15H17N3O2Cl2，分子量：342.2，CAS号：60207-90-1，常用于防治香蕉叶斑病、叶条斑病，残效期在1个月左右，一般只对皮肤和眼有刺激作用，经口误服，可引起恶心、呕吐等；戊唑醇的英文通用名称：Tebuconazole，分子式：C16H22CN3O，分子量：307.8，CAS 号：107534-96-3[2]，常用于防治香蕉叶斑病、黑星病。试验采用气相色谱和高效液相色谱分析方法，在两种仪器上同时检测两种农药，优化色谱分析条件，对比两种分析方法的回收率，为检测单位提供更多分析方法的基础资料。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

试验仪器：气相色谱仪TRACE GC Ultra（NPD），高效液相色谱仪Waters2695配2489紫外检测器，电子顶载天平，旋转蒸发仪及各种玻璃器皿。

试验试剂：丙酮、氯化钠、乙腈、正己烷、二氯甲烷、甲醇（分析纯）；甲醇、乙腈（色谱纯）。

1.2 药剂和香蕉样品

试验药剂：丙环唑标准品，100 mg/L国家标准样品（农业部环境保护科研监测所研制）；戊唑醇标准品，100 mg/L国家标准样品（农业部环境保护科研监测所研制）。

香蕉样品：供试香蕉样品来源于海口市秀英区永庄香蕉基地，未喷施丙环唑和戊唑醇杀菌剂。

1.3 标准溶液的配制

1.3.1 GC法从100 mg/L丙环唑和戊唑醇标准溶液中分别移取0.5 mL标准溶液于10 mL容量瓶中，加正己烷定容至刻度，贮备液浓度为5 μg/mL。从贮备液中分别移取 0.1、0.2、0.4、1.0、2 mL 于 10 mL容量瓶中，加正己烷定容至刻度，上机液浓度为0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 μg/mL。

1.3.2 HPLC法从100 mg/L丙环唑和戊唑醇标准溶液中分别移取0.5 mL标准溶液于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，贮备液浓度为5 μg/mL。从贮备液中分别移取 0.1、0.2、0.4、1.0、2 mL 于 10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，上机液浓度为0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 μg/mL。

1.4 添加回收率

称取25.00±1.00 g香蕉全果，置于150 mL烧杯中，分别滴加丙环唑和戊唑醇标准品1.25×10-3mg、2.5×10-3mg、1.25×10-2mg 于香蕉样品中，得到浓度为0.05、0.1、0.5 mg/kg的待测试样。

1.5 样品前处理[3]

1.5.1 GC法提取称取待测试样25.00±1.00 g，置于150 mL烧杯中，加入50 mL乙腈，在匀浆机中匀浆2 min，过滤于装有7.0 g左右氯化钠的具塞量筒中，收集滤液，盖上盖子，剧烈摇动2 min，在室温下静止30 min，待乙腈相与水相分层。

净化：吸取10.0 mL上清液，放入旋转蒸发瓶中，40℃旋转蒸发至干，加入2 mL正己烷溶解，将SPE弗罗里硅柱依次用5.0 mL丙酮+正己烷（体积比 10∶90，下同）、5.0 mL 正己烷预淋洗，样品全部转移至色谱柱上，用10 mL丙酮+正己烷分3次淋洗，洗脱液收集于旋转蒸发瓶中，于40℃旋转蒸发至干，加正己烷定容至2.5 mL，待测。

1.5.2 HPLC法提取称取待测试样25.00±1.00 g，置于150 mL烧杯中，加入50 mL乙腈，在匀浆机中匀浆2 min，过滤于装有7.0 g左右氯化钠的具塞量筒中，收集滤液，盖上盖子，剧烈摇动2 min，在室温下静止30 min，待乙腈相与水相分层。

净化：吸取10.0 mL上清液，放入旋转蒸发瓶中，40℃旋转蒸发至干，加入2 mL二氯甲烷+甲醇（体积比95∶5，下同）溶解，将NH2柱用5.0 mL二氯甲烷+甲醇预淋洗，样品全部转移至色谱柱上，再用10 mL二氯甲烷+甲醇分3次淋洗，洗脱液收集于旋转蒸发瓶中，于40℃旋转蒸发至干，用甲醇定容至2.5 mL，待测。

1.6 色谱条件

1.6.1 GC法色谱柱：ZB-35（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；升温程序：初始温度100℃，保持0.3 min，再以30℃/min速度升温至255℃，保持8 min，然后以35℃/min升温至280℃，保持4 min。进样口温度：250℃；NPD 检测器温度：300℃；高纯氮气（纯度99.999%）为载气；氮气流速：1.5 mL/min；空气流速：60 mL/min；氢气流速：2.5 mL/min；进样量：1 μL。

1.6.2 HPLC法色谱柱：C18（150 m×4.6 mm×5 μm）；流动相：乙腈:水为 55:45；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；波长：225 nm。

2 结果与分析

2.1 气相色谱方法

在气相色谱分析方法中，丙环唑为双峰，丙环唑和戊唑醇的保留时间是5.61 min和5.76 min，峰型对称，出峰集中。标准溶液谱图见图1。

图1 丙环唑和戊唑醇标准溶液谱图（GC法）

2.2 高效液相色谱方法

在高效液相色谱分析方法中，丙环唑和戊唑醇的保留时间是9.415 min和7.250 min，峰型对称，出峰集中。标准溶液谱图见图2。

图2 丙环唑和戊唑醇标准溶液谱图（HPLC法）

2.3 两种方法的准确度、精密度和灵敏度

丙环唑和戊唑醇在香蕉全蕉中的最低检测浓度是0.05 mg/kg。采用外标法峰面积定量，添加回收率用标准曲线法定量，添加浓度及回收率结果见表1。GC方法中，用正己烷作溶剂，配制丙环唑和戊唑醇混合标准溶液：0.05、0.10、0.20、0.50、1.0 mg/L，在上述仪器的条件下测定，得出丙环唑标准曲线方程：y=1.204 11×10-7x，相关系数R2=0.997；戊唑醇标准曲线方程：y=1.533 67×10-7x，相关系数R2=0.997。HPLC方法中，用甲醇作溶剂，配制丙环唑和戊唑醇混合标准溶液：0.1、0.2、0.5、0.8、1.0 mg/L，在上述仪器的条件下进行测定，得出丙环唑标准曲线方程：y=3.29×104x-6.13×102，相关系数R2=0.998；戊唑醇标准曲线方程：y=1.84×104x+1.11×102，相关系数 R2=1.000。

从表1中可知，GC方法中，丙环唑在香蕉中平均回收率为86.9%～111.0%，相对标准偏差为3.0%～7.4%；戊唑醇在香蕉中平均回收率为104.0%～115.0%，相对标准偏差为3.1%～6.5%；HPLC方法中，丙环唑在香蕉中平均回收率为77.2%～93.0%，相对标准偏差为3.1%～8.9%；戊唑醇在香蕉中平均回收率为102.0%～106.0%，相对标准偏差为5.5%～7.5%；均符合农药残留分析的要求[4]。相关谱图见图 3～图 6。