肾茶联合泼尼松对多柔比星肾病大鼠核因子－KB、白介素－8水平的干预研究

王丽敏，穆斯塔凡，王 蕾

(佳木斯大学附属第一医院儿科，黑龙江佳木斯154003)

微小病变型肾病是小儿肾病综合征最常见的类型之一，以大量蛋白尿(＞3.5g/d)、低蛋白血症(＜30g/L)、高脂血症及全身不同程度的水肿为主要临床表现，大量蛋白尿及低蛋白血症为最主要指标。其中尿蛋白的产生与肾小球滤过膜的分子及电荷屏障受损有关。目前临床对肾病综合征主要采取糖皮质激素及免疫抑制剂、抗凝等对症治疗，其中以糖皮质激素为主要治疗药物，但长期单独用药会导致骨质疏松等一系列副作用，给家庭带来沉重的经济和心理负担。核因子－KB(nuclear factor－KB)是一种具有多向性调节作用的核转录因子，与许多基因特别是免疫相关基因的转录调节密切相关，肾病综合征患儿存在免疫功能紊乱，故可以通过调节NF－KB纠正其免疫失衡[1]。具相关研究表明[2]，核因子－KB与白介素－8具有直线正相关关系，而白介素－8在肾病综合征的早期发病过程中发挥重要的作用，可通过激活中性粒细胞损伤足突细胞和基底膜，从而引起蛋白尿。肾茶具有显著的免疫调节功能，抗炎[3]等作用。因此，我们通过多柔比星制备肾病综合征大鼠模型，观察探讨肾茶和泼尼松联合治疗对多柔比星肾病大鼠核因子－KB、白介素－8水平的影响及其可能机制。

1 材料和方法

1.1 实验动物及分组

6周龄雄性Wistar大鼠50只，体重100～120g，由大连医科大学动物实验中心提供，两次尿蛋白定性试验均阴性。将50只大鼠随机分为两组:正常组(n=10)注射0.5mL生理盐水，肾病组(n=40)按照王峥等[4]尾静脉单次注射多柔比星(浙江省海正药业有限股份公司)5mg/kg制备肾病综合征模型。注射后第6天收集所有大鼠24h尿液，尿蛋白＞30mg/24h者为肾病综合征模型成功。期间死亡5只，不合格者5只予以剔除。剩余肾病组再随机分为3组:模型组(n=10)、肾茶组(n=10)、肾茶和强的松联合治疗组(n=10)。

1.2 研究方法

1.2.1 给药方法:肾茶组和联合治疗组在造模成功后第7天开始给予肾茶(泉州市医药公司)灌胃给药5mL/kg，正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃。联合治疗组在肾茶灌胃后1h给予泼尼松[5]，即在造模成功后第1～7天每天给药13.5mL/kg(6.3mg/kg)第8～15天，每天减量10%，第16～28 天每天给药 2.7mL/kg(1.25mg/kg)。

1.2.2 各组大鼠24h尿蛋白的测定:在多柔比星注射后第6、20、41天收集24h尿液，用全自动生化分析仪检测24h尿蛋白定量。

1.2.3 各组大鼠核因子－KB、白介素－8的检测:以下严格按照说明书进行操作，在第7、21、42天大鼠清晨空腹采静脉抗凝血2mL，用淋巴细胞分离液分离出单个核细胞并用PBS液制成2×106/mL细胞悬液，同时采集非抗凝血1mL，分离血清置于－80℃冰箱保存备用，用IL－8试剂盒、NF－KB试剂盒(美国Activemotif公司)分别检测白介素－8和核因子－KB。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 尿蛋白的变化

模型组、肾茶组及联合治疗组的24h尿蛋白较正常组明显升高，差别具有显著性 (F=2564.88，319.59，1824.50，P均 ＜0.01)，但联合治疗组与肾茶组比较，尿蛋白明显减少，差异具有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

表1 各组大鼠尿蛋白定量(±s，mg/24h，n=10)

表1 各组大鼠尿蛋白定量(±s，mg/24h，n=10)

注:△与正常组比较P＜0.01，★与肾病组比较P＞0.05;●与肾病组比较P＜0.01;□与肾茶组比较P＜0.01。

7d 21d 42d正常组组别6.59±0.31 6.86±0.31 7.18±0.33模型组 40.89±1.15△ 101.67±11.13△ 209.1±6.21△肾茶组 38.49±1.21△ 92.67±7.88△★ 100±5.93△●联合组 38.03±1.13△ 88.6±7.55△★ 56.4±9.42△●□

2.2 核因子－KB的变化

模型组、肾茶组及联合治疗组的核因子－KB水平较正常组明显升高，差别具有显著性 (F=118.97，98.41，218.33，P＜0.01)，但联合治疗组与肾茶组比较，核因子－KB水平明显减少，差异具有统计学意义(P＜0.01)。见表2。

表2 各组大鼠核因子－KB(±s，OD 值，n=10)

表2 各组大鼠核因子－KB(±s，OD 值，n=10)

注:△与正常组比较P＜0.01;★与肾病组比较P＞0.05;●与肾病组比较P＜0.01;□与肾茶组比较P＜0.01。

7d 21d 42d正常组组别0.167±0.031 0.288±0.034 0.301±0.021模型组 0.405±0.012△ 0.507±0.041△ 0.713±0.030△肾茶组 0.349±0.028△ 0.484±0.022△★ 0.614±0.055△●联合组 0.29±0.04△ 0.459±0.027△★ 0.359±0.053△●□

2.3 白介素－8的变化

模型组、肾茶组及联合治疗组的白介素－8水平较正常组明显升高，差别具有显著性(F=177.91，24.18，506.80，P均 ＜0.01)，但联合治疗组与肾茶组比较，白介素－8水平明显减少，差异具有统计学意义(P＜0.01)。见表3。

表3 各组大鼠白介素－8(±s，pg/mL，n=10)

表3 各组大鼠白介素－8(±s，pg/mL，n=10)

注:△与正常组比较P＜0.01;★与肾病组比较P＞0.05;●与肾病组比较P＜0.01;□与肾茶组比较P＜0.01。

7d 21d 42d正常组组别2820±95 3184±69 3420±103模型组 3762±82△ 3957±228△ 4602±67△肾茶组 3504±74△ 3755±242△★ 3888±46△●联合组 3340±72△ 3575±252△★ 3694±53△●□

2.4 相关性分析

肾病组、肾茶组及肾茶与泼尼松联合治疗组各组的NF－KB 与 IL－8具有相关关系 (r=0.963，0.979，0.916，P 均＜0.01);正常组 NF－KB与 IL－8不具有相关关系(r=0.106，P＞0.05)。肾病组、肾茶组及肾茶与泼尼松联合治疗组各组的尿蛋白与IL－8具有相关关系(r=0.980，0.881，0.908，P均 ＜0.01);正常组尿蛋白与IL－8不具有相关关系(r=0.099，P ＞0.05)。

3 讨论

肾病综合征在儿童其患病率为16/100000[6]，其发病机制极其复杂。有的学者认为[7]肾病综合征可为抗体对肾小球基底膜的损伤所致，从而引起肾小球滤过膜结构及电荷屏障变化，致使肾小球滤过膜通透性增加，产生蛋白尿，这与Pighetti[2]等研究一致，且认为IL－8在肾小球足细胞和基底膜的早期损伤发挥着重要的作用。也有的学者认为[8]，循环免疫复合物可通过多种途径活化补体系统，产生多种具有炎性递质作用的活性片段，进而介导肾脏组织的损伤。近年来细胞免疫在肾病综合征的致病机制也有所研究[9]，患儿可出现T细胞免疫功能紊乱，而抑制核因子－KB可发挥免疫抑制作用[1]。本实验通过抑制核因子－KB、白介素－8而使治疗组大鼠尿蛋白较肾病组明显减少，差别具有统计学意义(P＜0.01)，从而进一步证实了，核因子－KB及白介素－8在肾病综合征的致病机制中发挥着一定的作用。降低核因子－KB及白介素－8水平，减少尿蛋白，可为治疗肾病综合征提供了一个新的治疗途径。

曾有学者试用泼尼松冲击疗法治疗肾病综合征[10]以期尽快缓解病情，但单独激素冲击疗法的有效性及安全性尚待定论。本实验以肾茶组及肾茶、泼尼松联合组为治疗组，肾茶为单味中药，较为安全可靠，与泼尼松联合使用，可减少单用激素的不良反应，且激素可快速直接地作用于效应细胞，诱导肝药酶系统[11]，这与本实验研究一致，肾茶和泼尼松联合治疗组的尿蛋白比单用肾茶组尿蛋白明显减少，差别具有显著性(P ＜0.01)。据相关文献报道[12]，NF－KB是糖皮质激素抗炎效应最基本的调节因子，且激素能够部分抑制核因子－KB的活性和白介素－8的分泌。这与本实验研究一致，激素可通过以上机制减少尿蛋白，从而缓解肾病综合征病情。本实验中肾茶组及联合治疗组的核因子－KB及白介素－8水平较同期肾病组的水平低，差别具有统计学意义(P＜0.01)。这为治疗肾病综合征的治疗开辟了新的途径。但由于肾病综合征的发病机制复杂，影响核因子－KB通路的因素众多，且本实验周期较短，观测指标有限，仅限于初步研究，还需要进一步的研究及探讨，以便更好的应用于临床。

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