GBP术对降低T2DM大鼠微血管病变风险评估

高 佳，王跃生

(佳木斯大学附属第一医院普外科，黑龙江佳木斯154003)

当今对人类的身体健康危害严重的几种慢性病当中，糖尿病位居前列。当前据统计全世界的糖尿病患者已经超过1.7亿[1]，糖尿病患者长期高血糖可通过多种机制促进小血管的粥样硬化，使血管内皮细胞功能受到损害，微血管发生病变，释放组织因子，激活凝血系统后形成高凝血症和纤溶亢进，致使多种器官受到损害，尤以糖尿病视网膜病变(DR)、糖尿病肾病(DN)等微血管病变常见[2]，是患者致死、致残的主要原因。近年来国外医学专家通过分析接受减肥手术的病理性肥胖患者发现。Roux－en－Y胃转流术(Roux－en－Y gastric bypass，GBP)不仅在治疗病理性肥胖方面能够取得满意的疗效，而且对2型糖尿病的控制具有意料之外的作用[3]。本实验通过研究糖化血红蛋白，血小板参数等对2型糖尿病微血管病变有显著意义的参数，在对T2DM大鼠行GBP术前后的变化进行分析。尝试探索GBP术是否是预防并治疗2型糖尿病微血管病变风险最有效的治疗方法，准确地把握手术时机能否使早期2型糖尿病轻微的微血管病变可逆。

1 材料与方法

1.1 材料

清洁级近交系雄性Wistar大鼠50只，体重170～220g。药品与试剂，器械:0.5% 戊巴比妥钠由佳木斯大学生化实验室提供。链脲佐菌素(STZ)购自美国Sigma公司。基础饲料，高脂高糖饲料由佳木斯大学生化实验室提供。全自动血液分析仪，全自动生化分析仪Olympus 640罗康全卓越型全自动血糖仪(德国罗氏公司)由佳木斯大学附属第一医院检验科提供。

1.2 实验方法

1.2.1 实验造模

雄性Wistar大鼠适应性饲养1周，随机分为造模组35只及非造模组15只。制作2型糖尿病大鼠的模型，非造模组喂养普通饲料，正常饮食8周;造模组给予高糖分高脂肪饲料持续4周后按30mg/kg于左下腹穿刺，腹腔注射1%的STZ溶液(pH4.20.1 mmol/L的柠檬酸钠一柠檬酸缓冲液冰浴中新鲜配置)，1周后测血糖，选取连续2次空腹血糖＞7.8mmol/L大鼠作为造模组，再连续高糖分高脂肪饲料喂养4周，然后测大鼠尾静脉血糖值＞13.6mmol/L、稳定5d为成功模型，共有33只成模。

1.2.2 实验分组

分组实验动物，将非造模组大鼠随机取10只作为普通对照组(P)，成模大鼠随机选取30只，每10只一组，分别分为行GBP干预组(A)，经不规律内科治疗组(B)和不行干预继续高糖分高脂肪饲料喂养组(C)。

1.2.3 干预方法

A组行 GBP术:大鼠术前停止喂食12h，不限饮水，0.5%戊巴比妥钠(50mg/kg)注射入腹腔内，麻醉后固定于手术台上，无菌条件下上腹部正中切口长3cm切开进腹，闭合胃远端，距Treitz韧带10cm切断空肠，空肠远端与近端的胃后壁吻合，距胃肠吻合口远端10cm行空肠端侧吻合，完成后均用庆大霉素20mL冲洗腹腔后关腹。

B组行不规律内科治疗:将二甲双胍片按每日5000mg起混于饲料内喂养，随机加大或减少给药量，模拟内科用药时的不确定性，可将高糖高脂饲料和普通饲料随机混合喂养，模拟患者对于生活习惯的不自律性。

C组则不行任何干预，继续高糖高脂饲料喂养。

1.2.4 检测指标与方法

术前与术后1，2，4周检测各大鼠糖化血红蛋白(GHb)、血小板计数(PLT)、血小板平均容积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血小板比容(PCT)参数值。大鼠隔夜禁食12～14h，采用断尾取血法采血。切割鼠尾取血约4mL，分别加入肝素抗凝管(测GHb)和EDTA－K2(测血常规)抗凝管各2mL，混匀后2h内测定，GHb采用免疫比浊法用全自动生化分析仪Olympus 640测定，MPV、PDW、PLT用佳木斯大学附属第一医院检验科提供全自动血细胞分析仪测定。

1.3 统计学分析

采用SPSS15.0软件进行两因素方差分析和t检验，数据以均数±标准差(±s)表示，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

见表1～3。

表1 术前各组间血小板参数和糖化血红蛋白的关系(±s)

表1 术前各组间血小板参数和糖化血红蛋白的关系(±s)

＊P＜0.01

PLT MPV PDW PCT普通组(P) 4.58±1.76 313.0±132.4 5.8±1.2 17.5±0.9 0.27 HbA1C1(%)±0.07手术造模组(A) 7.41±2.51＊ 155.52±48.87＊ 11.67±5.51＊ 35.21±4.12＊ 0.35±0.14不规律内科治疗组(B)7.38±2.91＊ 164.38±50.12＊ 10.78±4.41＊ 34.13±+3.89＊ 0.26±+0.11不经干预组(C) 7.37±2.89＊ 158.72±49.64＊ 11.04±5.13＊ 32.78±3.46＊0.28±0.16

表2 术后1周各组间血小板参数和糖化血红蛋白的关系(±s)

表2 术后1周各组间血小板参数和糖化血红蛋白的关系(±s)

＊P＜0.01

HbA1C1 PLT MPV PDW PCT P 5.16±1.37 307.0±130.45 5.6±1.1 16.8±0.87 00.26±0.04.26±0.09 A 6.37±1.41 303.39±104.87 6.53±0.43 16.60±0.69 0.24±0.17 B 7.42±1.13* 186.42±101.76* 11.70±2.21* 37.84±3.91* 0.24±0.06 C 7.78±1.82* 159.14±140.23* 12.93±1.60* 39.71±3.38*

表3 术后4周各组间血小板参数和糖化血红蛋白的关系(±s)

表3 术后4周各组间血小板参数和糖化血红蛋白的关系(±s)

＊P＜0.01

.45 0.25±0.05 A 4.97±2.14 316.45±128.11 5.75±1.2 17.1±0.86 0.26±0.07 B 10.64±2.16＊ 81.59±25.67＊ 32.29±2.70＊ 46.31±9.41＊ 0.27±0.08 C 12.32±2.14＊ 51.54±9.26＊ 40.52±1.10＊ 66.31±3.42＊HbA1C1 PLT MPV PDW PCT P 5.08±2.03 311.46±123.77 5.56±1.28 16.27±00.26±0.12

3 讨论

近年的实验证实，糖尿病微血管病变中，血小板参数的改变起到了重要作用。但血小板参数的改变并不是糖尿病微血管病变所独有的，所以在动态监测血小板参数的同时，联合测定HbA1c1才能了解糖尿病有无微血管病变的存在。传统治疗并不能确切治愈2型糖尿病。近年相关临床病例表明，GBP是确切治愈2型糖尿病的唯一方法[4]。

本实验结果显示术前四个组的血小板参数、糖化血红蛋白造模组之间比较无统计学意义，而造模组与健康对照组之间比较有统计学意义。而术后第一周B、C组与P、A组对比PLT、MPV、PDW、HbA1c1均有统计学意义(P ＜0.01);P组与A组，B组与C组相比较则无统计学意义(P＞0.05)，四组PCT比较则无统计学意义(P＞0.05)。术后四周B、C组与P、A组对比 PLT、MPV、PDW、HbA1c1均有统计学意义(P＜0.01);B组与C组相比较MPV、PDW有统计学意义(P＜0.01);P组与A组相比较则无统计学意义(P＞0.05);四组PCT比较则无统计学意义(P＞0.05)。说明A组术后 PLT不再下降，MPV，PDW也不再上升，HbA1c1趋于恒定。而B组PLT、MPV、PDW、HbA1c1值上下波动明显，且MPV与HbA1c1值趋于升高。C组各项指标均趋向于加重糖尿病微血管病变风险。

本实验结果提示，PLT降低可能由于2型糖尿病患者持续高血糖水平，导致血红蛋白糖基化，引起细胞氧交换不足和脂类代谢异常，血管内皮细胞损伤，血小板活化功能增强，血小板数量降低，从而刺激骨髓巨核细胞过度再生，释放体积不均的大体积血小板，MPV增大，PDW增加，血小板的体积与功能关系密切，体积大的血小板相对寿命长，含致密体多，酶活性高。血小板大量黏附、凝集和释放，形成微血栓。微血栓进一步促进血小板的黏附、凝集和释放，使微血管长期处于缺血、缺氧和内皮损伤状态。这是糖尿病产生微血管并发症的病理基础之一[5]。本实验观察的B、C组的MPV明显高于行GBP术后的A组和健康组也证实了这一点。动态监测血小板参数的变化，可辅助判断微血管病变发病的风险，从而对糖尿病血管并发症的早期诊断有确切的作用。因此，糖尿病患者存在微血管病变风险时，PLT、MPV、PDW 结合起来可反映微血管病变的风险程度。

本文在术前造模组的HbA1c1、MPV、PDW 均高于健康对照组，术后未行GBP术组高于行GBP术干预组和健康对照组，三组之间具有显著性差异(P＜0.01)，说明糖尿病患者的HbA1c1增高和微血管病变的发生有直接关系，HbA1c1越高发生微血管病变的风险越大。检测HbA1c1联合测定血小板参数有利于2型糖尿病患者早期诊断微血管病变，同时血小板参数的改变与糖尿病微血管病变的形成关系密切。对于早期微血管病变患者，尽早行GBP术是唯一避免微血管病变加重的方法，尽早行GBP术或可逆转微血管病变。

[1]Wild S，Roguc G，Green A，et al.Global prevalence of diabetes[J].Diabetes Care，2004，27(5):1047-1053

[2]朱小丽.糖化血红蛋白检测在糖尿病微血管病变中的应用[J].医药论坛杂志，2010，31(24):77-78

[3]Pories WJ，Swanson MS，MacDonald KG.Who would have thought it An operation proves to be the most effective therapy for adult—onset diabetes mellitus[J].Ann Surg，1995，222:339-350

[4]王跃生，史洪军.2型糖尿病大鼠血清C反应蛋白动态变化及胃转流术干预后改变[J].黑龙江医药科学，2010，24(4):32-34

[5]G entilesdhi P，K ini S，Catarci M ，et al.Evidence—based medicine:open and laparoscopic bariatric surgery[J].Surg Endosc，2002，16(5):736-744