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高效液相色谱法测定麻保沙星溶液的含量

2013-10-09林仙军吕伟军周芷锦

中国兽药杂志 2013年6期
关键词:沙星喹诺酮回收率

林仙军,穆 琳,吕伟军,周芷锦

(浙江省兽药监察所,杭州 310020)

麻保沙星(Marbofloxacin,MBF)是一种动物专用的新型氟喹诺酮类抗菌药[1-2],其化学名为9-氟-2,3-二氢-3-甲基-10-(4-甲基-1-哌嗪)-7 - 氧 -7H - 吡啶 -[3,2,1 -ij][4,1,2]-苯并噁二嗪-6-羧酸,分子式为C17H19FN4O4,分子量362,为第三代喹诺酮类药物,由瑞士罗氏公司研制,并于1995年首次在英国上市,目前仅批准作为宠物药使用于犬和猫。麻保沙星具有抗菌谱广,抗菌活性强,体内分布广泛,耐受性好,与其他抗菌药物无交叉耐药性等特征,其生物利用度高,毒性低,较安全,被列为动物专用药。目前,测定麻保沙星含量的方法有高效毛细管电泳法[3]、HPLC/MS法[4]和梅雪珍等报道的麻保沙星在山羊体内的药物动力学[5]以及黄显会等报道的麻保沙星在鸡体内的生物利用度及药物动力学[6],均为测定血浆中麻保沙星残留的反相高效液相色谱法,未见使用HPLC法测定麻保沙星溶液的含量。为了制定科学合理的质量控制方法,研究建立了HPLC法测定麻保沙星溶液含量的方法,为麻保沙星溶液的质量监控提供参考。

1 材料

1.1 主要仪器 Waters2695高效液相色谱仪,配Waters2487紫外检测器(美国Waters公司);TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);XS-205电子天平(Mettler公司);SL502 N电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);DELTA 320酸度计(Mettler公司);KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 主要试剂 乙腈,甲醇均为色谱纯,默克公司;磷酸为优级纯,浙江三鹰化学试剂有限公司;高氯酸钠为分析纯,上海市国药集团化学试剂有限公司;醋酸铵为色谱纯,SIGMA公司;水为超纯水。

1.3 对照品和供试品 麻保沙星对照品,批号为R090501,含量为99.7%;麻保沙星溶液,规格为100mL:2.5 g,批号为090201、090202 和090203,均由浙江国邦制药有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 波长的选择 取麻保沙星适量,用甲醇溶解并稀释制成5μg/mL的溶液,在200~400 nm波长范围内进行扫描。结果麻保沙星在291 nm波长处有最大吸收(图1),故检测波长选择为291 nm。

图1 浓度为5μg/m L麻保沙星对照品溶液紫外光吸收图谱

2.2 对照品溶液的制备 取麻保沙星对照品适量,用15%、23%、30%和40%甲醇溶液超声溶解并稀释制成每1 mL中含麻保沙星0.1 mg的溶液,摇匀,作为对照品溶液。

2.3 麻保沙星供试品溶液的制备及稀释溶液的确定 精密量取麻保沙星溶液适量,用15%、23%、30%和40%甲醇溶液超声溶解并稀释制成每1 mL中含麻保沙星0.1 mg的溶液,摇匀,作为供试品溶液。结果23%甲醇溶液峰形最好,故选择23%甲醇溶液作为稀释溶液。

2.4 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Waters symmetry C18,5μm,4.6 mm×250 mm),以醋酸铵高氯酸钠溶液(取醋酸铵4.0 g和高氯酸钠7.0 g,加水1300 mL使溶解,用磷酸调节pH值至2.2)-乙腈(85∶15,V/V)为流动相,检测波长291 nm,流速1.0 mL/min,柱温40℃,进样量10μL。照2.2项和2.3项下的方法分别制备供试品溶液和对照品溶液,进样分析,色谱图见图2。

图2 麻保沙星色谱图(a、对照品 b、样品)

2.5 线性关系考察 取麻保沙星对照品适量,用23%甲醇溶液超声溶解并稀释制成每1 mL中含麻保沙星1 mg的溶液,摇匀,作为对照品贮备液。分别取贮备液0.25、0.5、1、2、5、10mL,置50mL 容量瓶,用23%甲醇溶液稀释至刻度,浓度分别为5、10、20、40、100、200 μg/mL,依照浓度由小到大的次序,按上述色谱条件进样分析,以系列标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图3),得线性方程 Y=4.68 ×104X+3.64 ×105,r=0.9998,结果表明麻保沙星在5~200μg/mL范围内线性关系良好。

图3 麻保沙星标准曲线

2.6 精密度试验 取麻保沙星对照品溶液,按上述色谱条件重复连续进样6次,每次进样量为10μL,测定 峰 面 积 分 别 为 2556256、2514556、2537886、2535446、2516895 和 2527081,RSD 为 0.6%,表明此方法的仪器精密度符合要求。

2.7 稳定性试验 取批号为090201的麻保沙星溶液依法配制供试品溶液,分别于0、2、4、6、12和24 h进行测定,结果,麻保沙星溶液的含量分别为102.5%、102.3%、102.1%、102.0%、102.0% 和101.8%,RSD为0.2%,表明供试品溶液稳定性良好。

2.8 加样回收率试验 分别称取麻保沙星原料0.5101 、1.2589和2.5145 g于50 mL 量瓶中,用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度,使成为10.20 mg/mL、25.18 mg/mL和50.29 mg/mL的加样样品,依法进行测定。每个浓度连续3 d,每次做5份平行样,计算测定浓度、批内变异系数和批间变异系数。结果,方法的平均回收率为98.3% ~100.3%,批内变异系数为0.4% ~1.0%,批间变异系数为0.4% ~0.9%。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

3 讨论与小结

由于企业所提供的麻保沙星原料有粉末状和颗粒状两种,检测过程中发现,在称样量接近和溶剂相同的情况下,粉末状的麻保沙星易溶解,而颗粒状的麻保沙星很难溶解,甚至不能溶解,但是,当把颗粒磨成粉末时,则易溶解。因此,在加样回收率试验中所加的麻保沙星为粉末状或颗粒磨成的粉状,以确保试验准确可靠。

本文建立了HPLC法测定麻保沙星溶液含量的方法,方法平均回收率为98.3% ~100.3%,批内变异系数为0.4% ~1.0%,批间变异系数为0.4% ~0.9%。结果表明,该方法操作简便,结果准确、可靠,适用于麻保沙星溶液的含量测定。

[1] 邱银生,吴 佳.动物专用氟喹诺酮类药物研究进展简介[J].中国兽药杂志,1998,32(3):46 -48.

[2] 王志强,陈杖榴.动物专用氟喹诺酮为抗菌新药——麻保沙星[J].中兽医医药杂志,2001,20(4):38 -41.

[3] 李志伟,崔 哲,刘 波,等.高效毛细管电泳法用于麻保沙星的测定[J].河北科技大学学报,2011,32(1):75 -77,81.

[4] 沈慧芳,张燕红,兰仁华,等.α-三连噻吩和麻保沙星的HPLC-MS分析[J].华南理工大学学报,2001,29(11):48-49.

[5] 梅雪珍,李引乾,庞利娜,等.麻保沙星在山羊体内的药物动力学[J].西北农业学报,2009,18(3):38 -41.

[6] 黄显会,陈杖榴,张淑婷,等.麻保沙星在鸡体内的生物利用度及药物动力学[J].中国兽医学报,2002,22(3):279 -281.

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