高效液相色谱法测定麻保沙星溶液的含量

2013-10-09林仙军吕伟军周芷锦

中国兽药杂志 2013年6期

林仙军，穆琳，吕伟军，周芷锦

(浙江省兽药监察所，杭州 310020)

麻保沙星(Marbofloxacin，MBF)是一种动物专用的新型氟喹诺酮类抗菌药［1－2］，其化学名为9－氟－2，3－二氢－3－甲基－10－(4－甲基－1－哌嗪)－7 －氧－7H －吡啶－［3，2，1 －ij］［4，1，2］－苯并噁二嗪－6－羧酸，分子式为C17H19FN4O4，分子量362，为第三代喹诺酮类药物，由瑞士罗氏公司研制，并于1995年首次在英国上市，目前仅批准作为宠物药使用于犬和猫。麻保沙星具有抗菌谱广，抗菌活性强，体内分布广泛，耐受性好，与其他抗菌药物无交叉耐药性等特征，其生物利用度高，毒性低，较安全，被列为动物专用药。目前，测定麻保沙星含量的方法有高效毛细管电泳法［3］、HPLC/MS法［4］和梅雪珍等报道的麻保沙星在山羊体内的药物动力学［5］以及黄显会等报道的麻保沙星在鸡体内的生物利用度及药物动力学［6］，均为测定血浆中麻保沙星残留的反相高效液相色谱法，未见使用HPLC法测定麻保沙星溶液的含量。为了制定科学合理的质量控制方法，研究建立了HPLC法测定麻保沙星溶液含量的方法，为麻保沙星溶液的质量监控提供参考。

1 材料

1．1 主要仪器 Waters2695高效液相色谱仪，配Waters2487紫外检测器(美国Waters公司);TU－1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);XS－205电子天平(Mettler公司);SL502 N电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);DELTA 320酸度计(Mettler公司);KQ－500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1．2 主要试剂乙腈，甲醇均为色谱纯，默克公司;磷酸为优级纯，浙江三鹰化学试剂有限公司;高氯酸钠为分析纯，上海市国药集团化学试剂有限公司;醋酸铵为色谱纯，SIGMA公司;水为超纯水。

1．3 对照品和供试品麻保沙星对照品，批号为R090501，含量为99．7%;麻保沙星溶液，规格为100mL:2．5 g，批号为090201、090202 和090203，均由浙江国邦制药有限公司提供。

2 方法与结果

2．1 波长的选择取麻保沙星适量，用甲醇溶解并稀释制成5μg/mL的溶液，在200～400 nm波长范围内进行扫描。结果麻保沙星在291 nm波长处有最大吸收(图1)，故检测波长选择为291 nm。

图1 浓度为5μg/m L麻保沙星对照品溶液紫外光吸收图谱

2．2 对照品溶液的制备取麻保沙星对照品适量，用15%、23%、30%和40%甲醇溶液超声溶解并稀释制成每1 mL中含麻保沙星0．1 mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

2．3 麻保沙星供试品溶液的制备及稀释溶液的确定精密量取麻保沙星溶液适量，用15%、23%、30%和40%甲醇溶液超声溶解并稀释制成每1 mL中含麻保沙星0．1 mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。结果23%甲醇溶液峰形最好，故选择23%甲醇溶液作为稀释溶液。

2．4 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Waters symmetry C18，5μm，4．6 mm×250 mm)，以醋酸铵高氯酸钠溶液(取醋酸铵4．0 g和高氯酸钠7．0 g，加水1300 mL使溶解，用磷酸调节pH值至2．2)－乙腈(85∶15，V/V)为流动相，检测波长291 nm，流速1．0 mL/min，柱温40℃，进样量10μL。照2．2项和2．3项下的方法分别制备供试品溶液和对照品溶液，进样分析，色谱图见图2。

图2 麻保沙星色谱图(a、对照品 b、样品)

2．5 线性关系考察取麻保沙星对照品适量，用23%甲醇溶液超声溶解并稀释制成每1 mL中含麻保沙星1 mg的溶液，摇匀，作为对照品贮备液。分别取贮备液0．25、0．5、1、2、5、10mL，置50mL 容量瓶，用23%甲醇溶液稀释至刻度，浓度分别为5、10、20、40、100、200 μg/mL，依照浓度由小到大的次序，按上述色谱条件进样分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图3)，得线性方程 Y=4．68 ×104X+3．64 ×105，r=0．9998，结果表明麻保沙星在5～200μg/mL范围内线性关系良好。

图3 麻保沙星标准曲线

2．6 精密度试验取麻保沙星对照品溶液，按上述色谱条件重复连续进样6次，每次进样量为10μL，测定峰面积分别为 2556256、2514556、2537886、2535446、2516895 和 2527081，RSD 为 0．6%，表明此方法的仪器精密度符合要求。

2．7 稳定性试验取批号为090201的麻保沙星溶液依法配制供试品溶液，分别于0、2、4、6、12和24 h进行测定，结果，麻保沙星溶液的含量分别为102．5%、102．3%、102．1%、102．0%、102．0% 和101．8%，RSD为0．2%，表明供试品溶液稳定性良好。

2．8 加样回收率试验分别称取麻保沙星原料0．5101 、1．2589和2．5145 g于50 mL 量瓶中，用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，使成为10．20 mg/mL、25．18 mg/mL和50．29 mg/mL的加样样品，依法进行测定。每个浓度连续3 d，每次做5份平行样，计算测定浓度、批内变异系数和批间变异系数。结果，方法的平均回收率为98．3% ～100．3%，批内变异系数为0．4% ～1．0%，批间变异系数为0．4% ～0．9%。结果见表1。