原发性胆汁性肝硬化患者自身抗体检测分析

翁厚光，曹维克，张迎梅，吴尚农

（南京医科大学附属淮安第一医院，江苏 淮安223300）

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种病因尚不明确、慢性进行性胆汁淤积性自身免疫性肝脏疾病。可能在一定遗传背景下，由于持续性感染（细菌、病毒、真菌等）、环境因素或毒物作用等，导致免疫调节紊乱和自身免疫反应。病理学特点为汇管区炎症及免疫介导的肝内胆管的破坏，最终造成肝纤维化、肝硬化及肝衰竭［1］。临床上多见于40－60岁女性，实验室检查除碱性磷酸酶（ALP）、γ－谷氨酰转肽酶（GGT）等明显升高及抗线粒体亚型－丙酮酸脱氢酶复合物（抗AMA－M2抗体）阳性外。还有抗M2－3E（BPO）抗体、抗早幼粒细胞性白血病（PML）抗体、抗核包膜蛋白（GP210）抗体、抗多核点（SP100）抗体等自身抗体阳性。本文拟对62例经病理检查确诊为PBC的患者进行自身抗体联合检测并分析其临床意义，以提高对本病的早期诊断。

1 资料与方法

1．1 研究对象 收集我院2005年3月至2010年5月原发性胆汁性肝硬化患者62例血清标本，其中男6例，女56例，年龄38－65岁，平均年龄51岁；血清γ－谷氨酰转肽酶（GGT）（483．0±75．3）U／L、碱性磷酸酶（ALP）（538．0±83．3）U／L。排除：（1）病毒性肝炎；（2）肝内外占位、梗阻及原发性硬化性胆管炎；（3）药物性及酒精性肝损害；（4）肝豆状核变性及血色病。PBC诊断标准符合2009年美国肝病学会PBC诊断指南［2］。同时收集乙肝后肝硬化患者30例（疾病对照组）及健康体检者50例（正常对照组）血清标本。病毒性肝炎病原学分型符合2000年9月西安会议病毒性肝炎防治方案中诊断标准［3］。正常对照组所有对象均无心、肝、肺等器官疾患，肝功能检测无异常。PBC患者与两对照组年龄、性别差异无显著性。

1．2 检测项目及检测方法 免疫印迹法检测包括：抗AMA－M2抗体、抗 M2－3E抗体、抗SPl00抗体、抗PML抗体、抗GP210抗体、抗LKM－1抗体、抗LC－1抗体、抗SLA／LP抗体等自身抗体。试剂为德国欧蒙医学实验诊断股份公司产品。操作按试剂盒说明进行。结果判定：用标准对照膜条图观察特定区域膜条，清晰可见着色者判为阳性。

1．3 肝脏穿刺活检组织病理学检查 B超引导下穿刺，标本长1．5－2．0cm，镜下包括至少6个汇管区，10%甲醛固定，石蜡包埋，HE及Masson染色。由我院病理科经验丰富的主任医师采用统一标准一次性阅片。

1．4 统计学方法 应用SPSS15．0统计软件包进行统计学处理，计数资料采用χ2检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 各种自身抗体阳性率检测结果 见表1。

抗AMA－M2抗体对PBC诊断的敏感度82．3%，特异度91．2%；抗 M2－3E抗体对PBC诊断的敏感度90．3%，特异度93．8%；抗SPl00抗体对PBC诊断的敏感度35．5%，特异度98．8%；抗PML抗体对PBC诊断的敏感度29．0%，特异度98．8%；抗GP210抗体对PBC诊断的敏感度41．9%，特异度97．5%，由此说明，抗 AMA－M2抗体、抗3E抗体、抗SPl00抗体、抗PML抗体、抗GP210抗体的联合检测对PBC的诊断有着较高的应用价值，对于PBC的筛查可起到重要作用。

表1 各种自身抗体阳性检出率 ［%（例）］

2．2 自身抗体阳性和阴性患者肝功能衰竭的发生率 62例PBC患者中，抗GP210抗体阳性患者肝功能衰竭的发生率明显高于抗体阴性患者（P＜0．05）。而抗 AMA－M2 抗 体、抗 SPl00 抗体、抗PML抗体阳性和阴性患者组之间肝功能衰竭发生率差异无统计学意义（P＞0．05）。见表2。

表2 各种自身抗体与肝功能衰竭发生率 （%）

3 讨论

PBC属于自身免疫性肝病之一，近年来随着国内外对此病的研究和诊断技术的提高以及临床医生对该病认识程度的加深，PBC在我国肝病患者中检出比例逐年增多。其早期可无症状，部分患者仅有乏力、纳差等非特异性表现。对该病早期的积极治疗不仅可以延缓病程的发展，而且一定程度上可以改善预后。很多患者发现确诊时，已达到后期严重的肝硬化及其并发症。因此早期诊断至关重要。

抗线粒体抗体M2亚型是PBC的特异性抗体。AMA－M2的靶抗原主要是抗线粒内膜上的丙酮酸脱氢酶复合体（PDC－E2）、酮戊二酸脱氢酶复合体（OGDC－E2）和支链二氧酸脱氢酶复合体（BCOADC－E2），3个靶抗原（BPO）联合检测，其敏感性和特异性都会升高［4］。本研究发现，在PBC的诊断中以天然M2抗原和BPO融合蛋白M2－3E为靶抗原的免疫印迹法比传统的仅以PDC为靶抗原的免疫印迹法有更高的敏感性和特异性。此结果与文献报道一致［5］。

核点型抗核抗体主要的靶抗原包括：①SP100蛋白，主要存在于PBC患者中的一种转录激活蛋白；②早幼粒细胞白血病蛋白（PML），为细胞转化和生长抑制蛋白，异常表达在早幼粒细胞白血病细胞，最早在急性早幼粒白血病患者的白血病细胞中发现，是和维甲酸受体融合的蛋白。据文献报道，PBC中抗SP100抗体的阳性率大约为35%，在排除了其他疾病的可能性，并且符合PBC的临床表现的情况下，特别是对于抗线粒体抗体阴性的患者来说，抗SP100抗体对PBC的诊断具有高度的特异性；约90%的PBC患者可同时检测到抗SP100抗体和抗PML抗体，两者具有相同的敏感性和特异度，且出现抗SP100抗体和抗PML抗体的PBC患者病情进展快，预后较差。以上说明，在PBC中这种特殊的抗SP100抗体和抗PML抗体实际上预示了PBC的早期诊断，提高了PBC检出率，并且具有高度特异性，是检测PBC的重要诊断标志［6，7］。本研究结果显示：抗SP100抗体和抗PML抗体的敏感性分别为35．5%和29．0%、特异度均为98．8%，与文献报道基本一致。

GP210为核孔复合物的主要相关糖蛋白，核孔区域是PBC抗体识别核包膜自身抗原的另一个区域，25%的PBC患者存在抗核包膜蛋白自身抗体，GP210抗体诊断PBC的特异性为99%，被认为是PBC的高特异性抗体［8，9］。核孔复合体具有将核质转运至细胞质及维持细胞功能的作用，从理论上分析，该位点受损可直接影响细胞功能并加重病情，因此抗GP210抗体与PBC的严重程度和预后具有更为紧密的相关性。抗GP210抗体与严重的界面性肝炎和小叶炎症有关，阳性提示易进展为肝衰竭［10］。本次研究结果表明，抗GP210抗体的敏感度41．9%、特异度97．5%，抗GP210抗体阳性患者中肝功能衰竭的发生率为30．8%，明显高于抗GP210抗体阴性患者，仅为2．8%，与文献报道相符。而与PBC相关的自身抗体：抗AMA－M2抗体、抗SPl00抗体、抗PML抗体阳性与阴性患者中肝功能衰竭的发生率差异无统计学意义（P＞0．05），表明它们与该病的预后并不相关。因此抗GP210抗体不仅可协助早期诊断PBC，对该病的预后亦有重要意义。

综上所述，抗AMA－M2抗体、抗 M2－3E抗体、抗SP100抗体、抗PML抗体、抗GP210抗体检测在PBC患者血清中具有很高的特异度和相当的敏感度，可作为PBC诊断的高度特异性抗体，联合检测极大地增加了PBC的诊断率，使临床不容易漏诊。将使更多的PBC患者得到早期诊断和正确治疗，并为进一步开展PBC发病机制及临床研究奠定基础。

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