倒地铃提取物降血糖作用研究△

谭银丰，张小坡，李洪福，赖伟勇，李海龙，符乃光

(海南医学院 海南省热带药用植物研究开发重点实验室，海南 海口 571159)

倒地铃提取物降血糖作用研究△

谭银丰，张小坡，李洪福，赖伟勇，李海龙，符乃光*

(海南医学院 海南省热带药用植物研究开发重点实验室，海南 海口 571159)

目的：研究倒地铃不同提取部位降血糖的作用。方法：用高脂高糖饲料喂养加小剂量注射链脲佐菌素(STZ)方法诱导小鼠2型糖尿病模型，用不同剂量的倒地铃不同提取部位进行干预，测定小鼠体重变化、空腹血糖、口服糖耐量和血清胆固醇(CHO)。结果：各组小鼠体重差异无统计学意义，倒地铃水提取物及30%醇洗脱物能显著降低糖尿病小鼠空腹血糖(P<0.05)，提高1 h葡萄糖耐量(P<0.01)，60%醇洗脱物能提高小鼠1 h葡萄糖耐量(P<0.01)。结论：倒地铃降血糖作用的主要有效部位为30%醇洗脱物、60%醇洗脱物。

倒地铃；降糖；提取物

倒地铃CardiospermumhalicacabumL.为无患子科倒地铃属植物，分布于两广、福建、海南等我国西南地区，广泛生长于旷野田间，在海南民间常用倒地铃全草熬水作为治疗糖尿病偏方。Chinnadurai Veeramani等[1]研究了倒地铃叶的乙醇提取物降血糖作用，发现倒地铃叶乙醇提取物能显著降低血糖和糖化血红蛋白HbA1c，增加胰岛素和血红蛋白Hb，陈君等[2]对倒地铃全草乙醇提取物的急性毒性和降血糖作用也进行了初步研究，结果倒地铃乙醇提取物能明显降低四氧嘧啶和肾上腺素诱导的小鼠急性糖尿病的血糖值。本文拟根据民间用法经验，用水提取倒地铃全草，提取物上大孔树脂，以不同浓度乙醇洗脱，考察不同洗脱部位的降血糖作用，以期确定倒地铃降血糖作用的有效部位。

1 实验动物、仪器和材料

昆明种小鼠，雄性，18～22 g，湖南省东创实验动物科技服务部提供，动物合格证号：HNACSDC20120866。高脂高糖饲料由广东医学动物中心加工提供。

D101大孔树脂(安徽皖东树脂科技有限公司)，安稳血糖测试仪(长沙三诺生物传感技术有限公司)，V-650紫外-可见分光光度计(日本JASCO公司)，胆固醇试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公司)。

倒地铃药材采自海口市周边地区，经海南医学院药学院生药学教研室曾念开讲师鉴定为无患子科植物倒地铃CardiospermumhalicacabumL.全草。消渴丸(广州中一药业有限公司，批号：P01317)，链脲佐菌素(Sigma S0130-100 mg),柠檬酸、柠檬酸钠为分析纯。

2 方法与结果

2.1 试药的制备

称取晒干后切碎的倒地铃2 kg，加入50 L水加热煎煮2 h，过滤后滤渣再加50 L水加热煎煮2 h，合并2次煎煮液，浓缩至一定体积，留取约200 mL,其余浓缩液上大孔树脂，依次用30%，60%，90%乙醇洗脱，洗脱物蒸发干燥，计算得率依次分别为5.6%，1.1%，0.3%。

2.2 动物实验方法

取18～22 g雄性昆明种小鼠，随机分为空白组、倒地铃水提物组、30%乙醇洗脱物不同剂量组、60%乙醇洗脱物不同剂量组、90%乙醇洗脱物不同剂量组、阳性对照组、模型组，每组8只。空白组喂食常规饲料，其他组喂食高脂高糖饲料(饲料配方：2%胆固醇、10%猪油、0.4%胆盐、10%蔗糖、77.6%常规饲料混合)。对不同时期小鼠进行称重，观察体重变化。4周后，各给药组分别灌胃给予相应剂量药物，阳性对照组给予消渴丸1.0 g·kg-1，空白组、模型组灌胃给予等体积0.9%氯化钠溶液，每天给药1次，连续给药3周。给药第2周后空白组注射0.1 mol·L-1柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH=4.5),其余各组腹腔注射用缓冲液配制的链脲佐菌素(STZ)75 mg·kg-1，注射STZ后第3天尾静脉取血测空腹血糖值(FBG)。注射STZ后第6天，小鼠禁食12 h后，灌胃葡萄糖溶液2.5 g·kg-1，1 h后尾静脉取血测血糖值(糖耐量试验，GOTT)。注射后第7天，摘眼球取血，4 000 r·min-1离心10 min,取血清按试剂盒方法测定血清胆固醇(CHO)含量。实验过程如图1所示，实验数据采用单因素方差分析，结果见表1、表2。

结果表明，小鼠喂食高脂高糖饲料7周后，与喂食正常饲料小鼠比较，体重差异无统计学意义，倒地铃水提取物及30%醇洗脱物能显著降低糖尿病小鼠空腹血糖，提高1 h葡萄糖耐量，60%醇洗脱物能提高小鼠1 h葡萄糖耐量，水提取物和90%醇洗脱物能降低血清胆固醇。

图1 动物实验流程

表1 不同时期各组小鼠体重/g

表2 各组小鼠血糖血脂水平

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，与空白组比较，#P<0.05，#P<0.01

3 结论与讨论

研究前期通过预试验研究了3种不同剂量的倒地铃水提物对糖尿病模型小鼠血糖的作用，确定了倒地铃水提物10 g·kg-1具有降低糖尿病模型小鼠血糖作用。进一步研究倒地铃水提物上大孔树脂不经水洗脱直接用不同浓度乙醇洗脱后，其降血糖主要有效部位集中在30%乙醇洗脱物、60%乙醇洗脱物；实验结果显示90%乙醇洗脱物能降低小鼠血清胆固醇，但该部位得率非常低(0.3%)，其降血脂作用潜在开发意义不大。文献报道从倒地铃中分离得到的化合物较少，目前已发现木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、金圣草黄素、棕榈酸等成分[3]，为进一步阐明倒地铃降血糖作用的物质基础，有必要进行进一步的化学分离及药效学验证研究。

高热量食物加低剂量STZ注射小鼠是较为常用的2型糖尿病模型造模方法，但是该造模方法不适用于雌性小鼠[4-5]，同时还要注意的是大部分高热量饲料都添加大量的油脂，使饲料变得松软油腻，不太适合小鼠的口味及啮齿类动物磨牙的习性，因此在饲养时常常混搭少量常规饲料,作者印证了前人的研究[6]。

[1] Chinnadurai Veeramani,Ganesan Pushpavalli,Kodukkur Viswanathan Pugalendi.Antihyperglycaemic effect ofCardiospermumhalicacabumLinn.leaf extract on STZ-induced diabetic rats[J].J Appl Biomed,2008,6:19-26.

[2] 陈君，韦建华，苗伟生,等.倒地铃急性毒性及降血糖作用的初步研究[J].时珍国医国药，2012，23(5)：1083-1085.

[3] 韦建华，陈君，蔡少芳，等.倒地铃化学成分研究(Ⅰ)[J].中草药，2011,42(8)：1509-1511.

[4] 牛屹东，梁蜀龙，王新生.雌性小鼠不适于构建HFD-STZ联合诱导的2型糖尿病模型[J].四川动物，2008，27(4):547-551.

[5] 王嘉惠，沈小玲，符崇威，等.高脂喂养联合链脲佐菌素诱导大鼠2型糖尿病模型研究[J].吉林医学，2011，32(4)：629-633.

[6] 杨娜，孟宪丽，董光新,等.链脲佐菌素加膳食诱导的小鼠2型糖尿病模型研究[J].中药药理与临床，2007，23(1):74-76.

StudyonHypoglycemicEffectofCardiospermumhalicacabumL.Extracts

TAN Yin-feng，ZHANG Xiao-po，LAI Wei-yong,LI Hai-long,FU Nai-guang*

(HainanMedicalUniversity，HainanProvincialKeyLaboratoryofR&DofTropicalHerbs，Haikou571101，China)

Objective： To study the hypoglycemic activity of different extractive fraction fromCardiospermumhalicacabumL.Methods： Type 2 mice diabetic model were induced by high-fat,high-sugar fed and low dose streptozotocin(STZ)intraperitoneal injection.Every group mices were treated with different extractive fraction ofCardiospermumhalicacabumL.,the body weight,fasting blood-glucose and glucose tolerance were determined.Results: Compared with control group,the body weight had no significant difference.Compared with model group,water extract and 30% ethanol elution significantly reduced fasting blood-glucose(P<0.05),increased glucose tolerance(P<0.01)，60% ethanol elution significantly increased glucose tolerance(P<0.01).Conclusion: The hypoglycemic active fraction ofCardiospermumhalicacabumL.are 30% and 60% ethanol elutions.

Cardiospermumhalicacabum; Hypoglycemic; Extracts

2012-12-20)

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海南医学院科研培育基金(HY2010-015)

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符乃光，男，高级工程师，主要从事药物研究工作，Email:funaiguang@126.com