类风湿胶囊质量控制研究

阮建兵，邹文哲，金学平

(武汉软件工程职业学院 环境与生化工程系，湖北 武汉 430205)

类风湿胶囊质量控制研究

阮建兵*，邹文哲，金学平

(武汉软件工程职业学院 环境与生化工程系，湖北 武汉 430205)

目的：建立类风湿胶囊的质量控制方法。方法：采用显微鉴别法、薄层色谱法对类风湿胶囊中黄芪、当归、淫羊藿进行定性鉴别，HPLC法对制剂中阿魏酸进行含量测定。结果：显微鉴别特征明显；薄层色谱法分离度好，专属性强；阿魏酸在HPLC测定中线性范围为0.020 596～0.205 96 μg(r=0.999 5)，平均加样回收率为98.93%，RSD=0.72%(n=9)。结论：该法专属性强、准确度高、重现性好，能有效进行类风湿胶囊的质量控制。

类风湿胶囊；显微特征；薄层色谱；高效液相色谱；阿魏酸

类风湿胶囊是医院制剂，由黄芪、当归、淫羊藿等30味中药组成，具有补肝益肾，补精益髓，通经活血，散寒止痛，消肿化瘀，消炎镇痛，提高免疫力的功能。用于风湿、类风湿性关节炎、强直性脊椎炎、红斑狼疮、痛风等证候者。为控制质量，对处方中黄芪、当归、淫羊藿进行了定性鉴别，同时用HPLC法测定了制剂中阿魏酸的含量，建立了可靠、准确、专属性强、重现性好的质量控制方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津LC-20ATVP高效液相色谱仪(LC-20AT四元泵，SPD-M20A检测器，SIL-20A自动进样器，LC solution 色谱工作站)；CBL9960A超声波清洗器(上海科导超声仪有限公司)；METTLER TOLEDOAG135型电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2 试药

类风湿胶囊(湖南省沅陵县中医骨伤专科医院制剂，批号：060301，070409，070812)；阴性对照品(自制)。

1.3 对照品及对照药材来源

黄芪甲苷(批号：110781-200512，供鉴别用)、当归(批号：120927-200613，供鉴别用)、淫羊藿(批号：110737-200414，供鉴别用)，购自中国食品药品检定研究院。

2 方法与结果

2.1定性鉴别

2.1.1 显微鉴别 取类风湿胶囊内容物少许，水合氯醛透化，稀甘油装片，显微镜下观察：不规则碎块，淡灰黄色，表面及周围扩散出众多细小颗粒，久置溶化。不规则碎片淡灰黄色，半透明，渗出油滴，加热后油滴溶化，现正方形草酸钙结晶。石细胞长方形或类方形，壁稍厚。草酸钙针晶成束或散在，长20～90 μm。

2.1.2 黄芪薄层色谱鉴别 取类风湿胶囊内容物20 g，置圆底烧瓶中，加甲醇40 mL，加热回流1 h，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100～120目，5 g，内径10～15 mm)上，用40%甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30 mL溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液；用水洗涤2次，每次20 mL；弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5 mL溶解，作为供试品溶液。同法制得缺黄芪的阴性对照品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1 mg·mL-1溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版附录ⅥB)试验，吸取上述溶液：阴性对照溶液5 μL、供试品溶液10 μL、对照溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰[1-3]。供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365 nm)下显相同的橙黄色荧光斑点[4]；阴性对照品无干扰，见图1。

1.阴性对照；2.供试品(批号：060301)；3.供试品(批号：070409)；4.供试品(批号：070812)；5.黄芪甲苷对照品(批号：110781-200512)图1 类风湿胶囊中黄芪薄层色谱图

2.1.3 当归薄层色谱鉴别 取类风湿胶囊内容物5 g于圆底烧瓶，加乙醚20 mL，浸泡20 min，滤过，滤液加1%碳酸氢钠溶液20 mL，振摇，弃去乙醚液，碱液用稀盐酸调节pH 2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[1]。同法制得缺当归的阴性对照品溶液。另取当归对照药材2 g，同法制成对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版附录ⅥB)试验，吸取上述溶液：阴性对照品溶液5 μL、供试品溶液10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙醚-醋酸(10∶10∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365 nm)下检视[1-2]。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照品无干扰，见图2。

1.阴性对照；2.供试品(批号：060301)；3.供试品(批号：070409)；4.供试品(批号：070812)；5.当归对照品(批号：120927-200613)图2 类风湿胶囊中当归薄层色谱图

2.1.4 淫羊藿薄层色谱鉴别 取类风湿胶囊内容物10 g于圆底烧瓶中，加70%乙醇30 mL，加热回流1 h，滤过，水浴蒸干，残渣加水20 mL使溶解，加水饱和的正丁醇萃取2次，每次15 mL，合并正丁醇萃取液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10 mL，弃去水层，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[5]。同法制得缺淫羊藿的阴性对照品溶液。另取淫羊藿苷对照品加甲醇制成1 mg·mL-1溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版附录ⅥB)试验，吸取上述溶液：阴性对照溶液5 μL、供试品溶液10 μL、对照溶液5 μL分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-丁酮-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365 nm)下检视[1-3]。供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色荧光斑点；阴性对照品无干扰，见图3。

1.阴性对照；2.供试品(批号：060301)；3.供试品(批号：070409)；4.供试品(批号：070812)；5.淫羊藿对照品(批号：110737-200414)图3 淫羊藿薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Dikma Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸(30∶70)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：25 ℃；检测波长：320 nm；进样量：5 μL[6]。经实验研究表明在此色谱条件下类风湿胶囊样品和阿魏酸对照品分离良好，按阿魏酸峰计理论塔板数不低于8 000。

2.2.2 溶液的配制

2.2.2.1 对照品溶液配制 精密称取阿魏酸对照品10.34 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，再取5 mL置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.010 34 mg·mL-1阿魏酸对照溶液。

2.2.2.2 供试品溶液配制 精密称取类风湿胶囊内容物5.0 g，精密加70%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率160 W，频率50 kHz，60 min)，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.2.3 阴性对照溶液的配制 依供试品制备方法制备缺当归的阴性样品，照供试品溶液制备方法同法操作，制得阴性对照液。

2.2.3 阴性干扰试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5 μL，按上述色谱条件分别进样测定并记录色谱图。结果显示，阴性对照溶液对测定结果无干扰，见图4～6。

图4 阿魏酸对照品HPLC图

图5 类风湿胶囊样品HPLC图

图6 阿魏酸阴性对照品HPLC图

2.2.4 线性关系考察 精密称取阿魏酸对照品4.14，10.34，20.68，31.02，41.36 mg，分别置 50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，再取5 mL 置 100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.004 14，0.010 34，0.020 68，0.031 02，0.041 36 mg·mL-1阿魏酸对照溶液。分别精密吸取5份不同浓度的阿魏酸对照溶液5.0 μL，注入液相色谱仪测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，进行线性回归，回归方程为Y=5 639 401.283X-2 491.366(r=0.999 5)。进样量在0.020 596～0.205 96 μg呈良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验 按上述色谱条件，用同一供试品溶液连续进样6次，每次5 μL，分别测得阿魏酸峰面积，RSD=0.57%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别在0，2，4，8，10，12 h时进样5 μL，测定阿魏酸峰面积，RSD=1.05%，表明供试品溶液至少在12 h内稳定。

2.2.7 重现性试验 取同一批样品，按供试品溶液制备方法，平行制备6份，依2.2.1色谱条件试验，测定阿魏酸含量，6份样品含量的RSD=1.38%，表明本法的重现性好。

2.2.8 加样回收试验 称取类风湿胶囊内容物(阿魏酸含量：0.165 5 mg·g-1)约2.5 g，共9份，按供试品溶液制备方法制备供试液，分3组，分别精密加入阿魏酸对照品溶液(0.4 mg·mL-1)0.8，1.0，1.2 mL，混匀，依法进行含量测定，结果见表1。

2.2.9 样品含量测定 取060301，070409，070812 3批样品，按供试品溶液制备方法制备，依2.2.1色谱条件试验，测定阿魏酸含量，结果分别为0.165 3，0.165 0，0.166 1 mg·g-1。

表1 类风湿胶囊中阿魏酸加样回收试验

3 讨论

类风湿胶囊为医院制剂，由于处方量大、成分复杂，其质量控制必须选择多项指标。本法采用显微观察和薄层色谱相结合的方法进行定性鉴别。显微鉴别发现类风湿胶囊内容物特征明显。用薄层色谱法对处方中黄芪、当归、淫羊藿进行鉴别，采用不同的展开剂和层析条件，实现了特征斑点的较好分离，斑点清晰。

HPLC法测定类风湿胶囊中阿魏酸的含量，采用Dikma Diamonsil C18柱，以甲醇-0.1%磷酸溶液(30∶70)为流动相，流速为1.0 mL·min-1，柱温为25 ℃，检测波长为320 nm，研究表明阿魏酸进样量在0.020 596～0.205 96 μg线性关系良好(r=0.999 5)，平均加样回收率为98.93%，RSD=0.72%，且准确度高，重现性好。

实验建立的质量控制方法专属性强、准确度高、重现性好，可作为类风湿胶囊质量控制方法。

[1] 何丽一.平面色谱方法及应用[M].北京:化学工业出版社.2005：234-246.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：284，124，307.

[3] 陈学松，刘慧妍. 阳春片的质量标准研究[J].中国现代应用药学，2010，27(3)：263-265.

[4] 祝晨蔽，曾秀花，黄琳，等.补血宁神片组成药味的薄层鉴别研究[J].广东药学，2002，12(5)：24-26.

[5] 肖遐. 骨松宝片的质量标准研究[J].中国医药导报，2005，11(11)：49-61.

[6] 柯薇，李劲. 反相高效液相色谱法测定麝香接骨胶囊中阿魏酸含量[J].中国药业，2009,18(19)：27-28.

QualityControlResearchofRheumatoidArthritisCapsules

RUAN Jian-bing*, ZOU Wen-zhe, JIN Xue-ping

(EnvironmentandBiochemicalEngineeringDepartment,WuhanVocationalCollegeofSoftwareandEngineering,Wuhan430205,China)

Objective：To set up a method for the quality control of rheumatoid arthritis capsules.Methods: Microscopic features and thin-layer chromatography was used to indentify Milkvetch root, Angelica sinensis and Epimedium brevicornu Maxim. in rheumatoid arthritis capsules. HPLC was used to determine ferulic acid content in rheumatoid arthritis capsules.Results: The microscopic features of rheumatoid arthritis capsules were obvious. The method of TLC showed a good separation and strong specificity. Ferulic acid content showed a good linear relationshi Pwithin the range of 0.020 596～0.205 96 μg (r=0.999 5). The average recovery was 98.93%, and RSD was 0.72% (n=9).Conclusion: The established method is specific, accurate and reproducible, which can be used for the quality control of rheumatoid arthritis capsules.

Rheumatoid arthritis capsules; Microscopic features; TLC; HPLC;Ferulic acid

2012-06-07)

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阮建兵，Tel:(027)81655007，E-mail：ruanjianbing@163.com