HPLC-ELSD测定复方芪参片中黄芪甲苷的含量

江延辉

(黑龙江省智诚医药科技有限公司，黑龙江 哈尔滨 150060)

HPLC-ELSD测定复方芪参片中黄芪甲苷的含量

江延辉

(黑龙江省智诚医药科技有限公司，黑龙江 哈尔滨 150060)

目的：建立复方芪参片的质量控制方法。方法：采用RP-HPLC法，Kromasil 100A C18色谱柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(30∶70)；漂浮管温度:40 ℃。流速:1.0 mL·min-1，载气流速:2.8 L·min-1。结果：在0.844 4～13.510 4 μg范围内，黄芪甲苷峰面积与进样量有良好的线性关系，r=0.999 9；平均回收率为98.48%，RSD=0.42%。结论：本方法灵活、简便、准确，可用于复方芪参片中黄芪甲苷含量的质量控制。

高效液相色谱-蒸发光检测法；复方芪参片；黄芪甲苷

复方芪参片是我公司研制的中药复方制剂，由黄芪、丹参、白芍、三七等中药组成，具有益气，活血，通络之功效。临床用于中风后遗症属气虚血瘀所致的半身不遂或麻木，口眼歪斜，语言不利者。我们通过引入蒸发光散射检测器，采用HPLC-ELSD测定法对其进行质量控制，结果表明此法准确，精密度、重现性好，回收率高，阴性对照显示制剂中其他成分对黄芪甲苷的测定无干扰，可作为该制剂含量测定的指标。

1 仪器与药品

高效液相色谱仪：日本岛津LC-10ATvp溶剂输送泵；蒸发光散射检测器：SEDEX75(法国)；XWK-3A空气泵(天津市分析仪器厂)，Sartorius AGME253S电子分析天平(德国赛多利斯)。

复方芪参片(本公司自制，批号：20120501，20120502，20120503)；黄芪甲苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：0781-201201)。乙腈为色谱纯(美国，Tedia公司)，其他试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法和结果[1-6]

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil 100A C18column(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(30∶70)；流速1.0 mL·min-1。蒸发光散射检测器：漂浮管温度40 ℃，雾化气体为高纯空气，载气流速2.8 L·min-1。对照品溶液进样量为10，20 μL；供试品溶液进样量为2 0μL。在此色谱条件下黄芪甲苷峰与其他峰达到基线分离，阴性空白溶液没有干扰，对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液色谱图见图1～3。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取在60 ℃减压干燥4 h的黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10片，研细，取约5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率220 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL浓缩至干，残渣加水20 mL，微热使溶解，移入分液漏斗中，用乙醚振摇提取2次，每次10 mL，弃去乙醚液；再用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20 mL，必要时50 ℃加热消除乳化层，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50 mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

1.黄芪甲苷图1 黄芪甲苷对照品HPLC图

1.黄芪甲苷图2 复方芪参片供试品HPLC图

图3 缺黄芪阴性对照品HPLC图

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按本品处方比例称取除黄芪外的其余中药适量，依照制剂工艺制成阴性对照制剂，照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.3 线性试验

精密称取黄芪甲苷对照品21.11 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密吸取对照品贮备溶液0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别取上述对照品溶液及贮备液各20 μL注入液相色谱仪，测定黄芪甲苷的峰面积，以进样量的对数值为横坐标，峰面积的对数值为纵坐标进行线性回归，得标准曲线方程Y=1.835 7X+2.054 9(r=0.999 9)。说明黄芪甲苷在0.844 4～13.510 4 μg，黄芪甲苷峰面积的对数值与进样量的对数值有良好的线性关系。

2.4 精密度试验

精密吸取对照品溶液20 μL，在上述色谱条件下连续进样6次，测定峰面积。结果表明，对照品溶液峰面积值的RSD=1.282%，说明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别于0，2，4，6，8 h，精密吸取20 μL注入液相色谱仪，测定峰面积。结果表明，供试品溶液的峰面积值的RSD=0.562%，说明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

2.6 重复性试验

取本品6份，按上述供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，在相同色谱条件下测定供试品溶液和对照品溶液的峰面积，计算黄芪甲苷的含量。结果表明，6份样品中黄芪甲苷含量的RSD=0.735%，说明含量测定方法的重复性良好。

2.7 回收率试验

精密称取已知含量的样品(批号20120501，含量0.228 mg·g-1)约3g，置具塞锥形瓶中，精密加入黄芪甲苷对照品贮备液(0.410 4 mg·mL-1)1.5 mL，水浴挥干甲醇，按供试品溶液的制备方法制备加样回收供试品溶液，并按照上述色谱条件，分别吸取供试品溶液和对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定黄芪甲苷的峰面积，计算回收率，结果见表1。

表1 复方芪参片中黄芪甲苷回收率测定

注：黄芪甲苷对照品加入量均为0.615 6 mg

2.8 样品含量测定

按照上述含量测定方法，分别对20120501，20120502，20120503 3批样品进行含量测定，黄芪甲苷含量测定结果分别为0.228，0.224，0.236 mg·g-1。

3 讨论

3.1 提取方法考察

实验通过对提取溶剂甲醇、70%甲醇、70%乙醇的比较研究，结果表明甲醇提取所得的黄芪甲苷含量最高，所以选择甲醇作为提取溶剂。提取方法考察了超声提取30 min、加热回流1 h、冷浸过夜后索氏提取至无色等3种提取方法，结果表明3种提取方法的提取率基本接近；考虑到超声提取法具有方便、快捷等特点，所以选择超声提取30 min为提取方法。

3.2 前处理方法考察

在供试品溶液制备中，我们比较了经过和不经过大孔树脂纯化的样品，发现不经过大孔树脂纯化的黄芪空白对照品对黄芪甲苷的测定有部分干扰，因此确定了供试品溶液通过大孔树脂柱纯化。

[1] 李欣荣，吴爱英，宿洁.高效液相色谱-蒸发光检测法测定八宝颗粒中黄芪甲苷含量[J].中国药业，2012，19(11)：28-29.

[2] 马艳蓉，刘泓，柴国林，等.HPLC-ELSD测定黄芪中黄芪甲苷含量及相关试验条件选择的探讨[J].现代中药研究与实践，2003，17(6)：17-19.

[3] 闫彩萍，郝润喜.高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量[J].中国药物与临床，2004，4(6)：477-478.

[4] 谢委，方建国，杜光,等.高效液相色谱-蒸发光散射法测定扶正强筋片中黄芪甲苷含量[J]．医药导报，2012，31(2)：208-210.

[5] 何江敏，丁洁，叶虹.高效液相色谱-蒸发光散射法测定养胃颗粒中黄芪甲苷含量[J]．中国药业，2010，19(22)：43-44.

[6] 胡端龙，姜丽珍，奚静芳,等.丹溪玉屏风颗粒中黄芪甲苷的含量测定[J]．中国现代中药，2011，13(6)：41-42.

DeterminationofAstragalosideinFufangQishenTabletsbyHPLC-ELSD

JIANG Yan-hui

(HeilongjiangProvinceZhichengMedicineTechnologyCo.Ltd.，Harbin150060,China)

Objective：To establish a HPLC determination method of astragaloside in Fufang Qishen Tablets.Methods： The separation was performed on the Kromasil 100A C18column (200 mm×4.6 mm，5 μm) ;the mobile phase was acetonitrile-water (30∶70); the temperature of the drift tube was set at 40 ℃，the flow rate was 1.0 mL·min-1，the flow rate of gas was set at 2.8 L·min-1.Results：The linear range of astragaloside was 0.844 4～13.510 4 μg (r=0.999 9)，the average recovery rate was 98.48%，RSD was 0.42%.Conclusion:The method is accurate，precise，repeatable and suitable for the quality control of astragaloside in Fufang Qishen Tablets.

HPLC-ELSD; Fufang Qishen Tablets; Astragaloside

2012-11-22)

*

江延辉，E-mail：jyhcgf28401@yahoo.com.cn