外周血单个核细胞分泌Th细胞因子IFN-γ，IL-10在原因不明反复流产患者的研究

施培瑶 陈丕绩 蔡巧青

反复自然流产(RSA)，指连续两次及以上的自然流产，近半数原因不明。近年的研究进一步表明，正常妊娠中母胎的免疫反应主要为Th2分泌的IL-10介导的体液免疫为主，但是RSA患者却以Th1分泌的IFN-γ介导的细胞免疫过为主。细胞免疫过度表达令妊娠女性流产。

1 资料与方法

1.1 一般资料 从2011年15月至2012年05月在深圳市盐田区人民医院经过妇检，B超，正常，无不孕，无死胎或流产史，要求人流的妇女20例为正常对照组。年龄27～34岁，平均(29.5±2.6)岁，孕周6～10周，平均(9.1±1.3)周，孕次3～5次，平均(3.5±1.1)次。相同时间经我院排除因遗传，感染及血型不合，抗精子抗体阳性等因素，确诊为RSA的妇女20例为研究组。年龄26～38岁，平均(30.1±3.1)岁，孕周9-13周，平均(10.1±1.6)周，孕次4～7次，平均(5.1±2.2)次。以上年龄，孕周，孕次比较，P＞0.05，差异无统计学意义。

1.2 设备及试剂 采用双抗体夹心ABC-ELISA法，按照试剂盒说明书进行操作。

1.3 标本收集和处理 从2010年10月至2011年10月在深圳市盐田区计生中心经过妇检，B超。

1.3.1 分别抽取外周静脉血3 ml，分离血清后分装，-70℃冻存。

1.3.2 分别抽取外周静脉血6 ml，肝素抗凝，淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，苔盼蓝排斥试验检测。经PHA刺激再接种于培养板孵育24 h。

1.3.3 统计学方法 采用SPSS 13.0统计学处理软件包进行数据分析，计量资料采用均数±标准差(±s)表示，P＜0.05认为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组与研究组资料比较

表1 对照组与研究组外周血IFN-γ、IL-10(pg/ml)水平的检测(±s)

表1 对照组与研究组外周血IFN-γ、IL-10(pg/ml)水平的检测(±s)

注:对照组与研究组IFN-γ、IL-10经过统计学比较差异有统计学意义(P＜0.05)

例数 IFN-γIL-10对照组20 43.5±32.4 45.6±26.1研究组20 115.2±45.3 29.7±17.2

表2 对照组与研究组24 hPHA刺激外周血单个核细胞IFN-γ、IL-10(pg/ml)水平的检测(±s)

表2 对照组与研究组24 hPHA刺激外周血单个核细胞IFN-γ、IL-10(pg/ml)水平的检测(±s)

注:对照组与研究组IFN-γ、IL-10及其比值经过统计学比较差异有统计学意义(P＜0.05)

例数 IFN-γIL-10对照组20 182.4±54.4 115.3±27.3研究组 20 392.2±45.3 33.9±19.6比值9.2±4.53 1.98±0.74

2.2 小结 研究组外周血IFN-γ水平高于正常对照组，但是IL-10水平下降。外周血单个核细胞在PHA刺激下，对照组分泌IL-10水平高于研究组，但是IFN-γ水平低于对照组，两组间的IFN-γ水平与IL-10水平之比明显高于对照组。

3 讨论

正常妊娠时候免疫细胞所分泌的细胞因子IFN-γ水平与IL-10水平等影响着胚胎的着床与发育、胎盘以及内分泌功能等，保证妊娠的正常进行［1］。母体对胚胎的免疫主要以 Th2分泌的IL-10的体液免疫为主，Th1分泌的IFN-γ细胞免役可导致妊娠无法成功，所以在孕期细胞免疫一般受到抑制。与对照组相比，有胚胎毒性者 Th1型细胞因子的浓度显著增高，Th2型细胞因子的浓度明显降低。研究证实，与正常孕鼠相比，易流产的孕鼠分泌的 IL-10浓度低，但IFN-γ浓度高［2］。Th1型细胞因子通过直接或间接激活巨噬细胞、NK、细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)等多种毒性细胞不利于妊娠，Th2型细胞因子主要是通过抑制Th1型因子的产生及其功能来维持妊娠［3］，RSA患者缺乏产生足够的Th2型因子而Th1型因子过度表达导致妊娠无法继续［4］。但经过系统主动免疫治疗后，可促进机体向Th2淋巴细胞转化而抑制Th1淋巴细胞，利于妊娠成功［5-7］。

本实验中在PHA刺激下，正常妊娠妇女外周血单个核细胞分泌IL-10浓度高于反复流产组，相比之下IFN-γ浓度明显低于反复流产组，反复流产组IFN-γ与 IL-10浓度的比值又高于正常妊娠妇女，与国内相关报道相一致［8，9］，流产与患者分泌Th1/Th2型细胞因子失衡相关。

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