小陷胸汤对动脉粥样硬化大鼠血清炎症因子水平及主动脉内膜厚度的影响＊

孙勤国 吕 琨

1武汉市第三医院中医科，武汉 430060

2湖北中医药大学，武汉 430065

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一组称为动脉硬化的血管病中最常见、最重要的一种，其特点是动脉管壁增厚变硬、失去弹性和管腔缩小[1]。在AS病理机制的认识上，1999年Ross[2]在内皮损伤反应学说基础上提出，AS是一种炎症性疾病。炎症反应贯穿于AS起始、病变进展、斑块破裂及血栓形成的全过程[3]。因此，针对炎症机制有望寻找到抗动脉硬化的新靶点与治疗手段[4]。本实验通过高脂饲料喂养联合腹腔注射维生素D3建立AS大鼠模型，观察小陷胸汤对AS大鼠主动脉病理形态学、炎性因子及主动脉内膜厚度的影响，探讨其抗AS的可能机制。

1 材料与方法

1.1 动物

健康SPF级雄性Wistar大鼠60只，体重（210±20）g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，合格证号：0018633，饲养于安静、洁净、避强光的环境中，室温（20±5）℃，相对湿度40%～60%。

1.2 药物与试剂

小陷胸汤出自《伤寒论》，由黄连6g，半夏12g，栝楼实30g组成。以上药材均由本院中药房提供，中药炮制室用传统方法浸泡，煎煮，过滤，浓缩，制成煎剂，其中小、中、大剂量每毫升含生药分别为0.21、0.42、0.84g，真空包装，低温冷藏备用。阿托伐他汀（立普妥），10mg／片，购自美国辉瑞制药有限公司（批号：J20030047）。维生素D3注射液购自上海通用药业股份有限公司（批号：H31021404）。大鼠白介素－6（IL－6）、氧化型低密度脂蛋白（ox－LDL）、血管细胞黏附分子－1（VCAM－1）的ELISA试剂盒购自上海瑞齐生物科技公司。急性期反应蛋白（CRP）试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司。

1.3 动物分组及造模

适应性喂养1周后，采用随机数字表法将大鼠随机分成6组：正常组、模型组、阿托伐他汀组及小陷胸汤低、中、高剂量组，每组10只。正常组进食基础饲料（53.0%碳水化合物、9.0%脂肪、21.0%蛋白质）。其余各组在喂食高脂饲料（3.0%胆固醇、0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%胆酸钠、10.0%猪油、5.0%白糖、81.3%基础饲料）的同时，在进食高脂饲料第1天，一次性腹腔注射维生素D360万IU／kg[3]，正常组注射同等体积的生理盐水。

造模第3周开始，根据人与大鼠体表面积换算法，小陷胸汤低、中、高剂量组大鼠分别灌胃小陷胸汤小剂量、中剂量、大剂量煎剂（按2ml／200g计算），1次／d。阿托伐他汀组给予阿托伐他汀5mg／kg水溶液灌胃，1次／d。正常组及模型组则分别灌服等容积的生理盐水。各组均连续灌胃12周。

1.4 血清学检测指标

末次给药后，隔夜禁食12h，腹主动脉采血，3 000 r／min离心10min，分离血清。采用ELISA法检测血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1浓度，采用免疫比浊法测定血清CRP水平。

1.5 动脉内膜厚度的测定

取3.0cm左右长的主动脉血管，剥离外膜附着组织，制作冰冻切片，然后进行油红O染色，步骤如下：将冷冻切片常温干燥25min后，60%异丙醇浸洗10min，油红O染液染色10min，用60%异丙醇漂洗除去多余染料，Mayer苏木精复染1min，自来水蓝化1～3min，蒸馏水洗，滤纸吸干水分，甘油明胶封片。光镜下观察其病理形态，组织细胞中脂滴呈橘红色，核呈蓝色。应用计算机图像分析系统（motic images advanced 3.0图像分析软件）测主动脉内膜厚度，每片随机取3个视野，取其平均值。

1.6 统计学处理

采用SPSS 16.0统计软件进行分析，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠血清炎性因子水平

与正常组比较，模型组大鼠血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP水平明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，小陷胸汤各剂量组及阿托伐他汀组大鼠血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP 水平明显降低（P＜0.01）。见表1。

表1 各组大鼠血清炎性因子水平的比较（n＝10，±s）

表1 各组大鼠血清炎性因子水平的比较（n＝10，±s）

与正常组比较＊＊P＜0.01；与模型组比较△△P＜0.01

组别 IL－6（ng／L） ox－LDL（mmol／L） VCAM－1（pg／ml） CRP（mg／L）96.25±13.65 4.38±1.47 0.78±1.91 0.50±0.67模型组 406.46±23.15＊＊ 17.84±3.38＊＊ 5.67±3.03＊＊ 4.52±0.18＊＊小陷胸汤低剂量组 253.75±16.45△△ 9.85±2.41△△ 2.13±2.05△△ 1.84±0.41△△小陷胸汤中剂量组 158.75±15.97△△ 9.65±1.45△△ 1.65±1.76△△ 0.77±0.73△△小陷胸汤高剂量组 161.46±18.55△△ 10.12±2.07△△ 1.84±2.26△△ 1.76±0.77△△阿托伐他汀组 325.21±20.36△△ 15.74±2.31△△ 3.71±2.54△△ 2.45±0.21正常组△△

2.2 各组大鼠主动脉内膜厚度

与正常组比较，模型组内膜厚度显著增加（P＜0.01）；与模型组比较，各治疗组内膜厚度明显降低（P＜0.05，P＜0.01）。见表2。

2.3 各组大鼠主动脉病理形态学

正常组大鼠主动脉内膜表面光滑，内膜无脂质沉积，未见异常改变；模型组大鼠主动脉内膜明显增厚，可见大量红色脂质沉积，油红O染色阳性区呈片状；各治疗组大鼠血管腔内亦可见红色脂质沉积，但较对照组呈不同程度减轻。见图1。

表2 各组大鼠主动脉内膜厚度的比较（n＝10，mm，±s）

表2 各组大鼠主动脉内膜厚度的比较（n＝10，mm，±s）

与正常组比较＊＊P＜0.01；与模型组比较△P＜0.05，△△P＜0.01

1.77±0.43模型组 18.18±2.23＊＊小陷胸汤低剂量组 14.79±1.93△小陷胸汤中剂量组 6.21±1.35△△小陷胸汤高剂量组 8.98±0.65△△阿托伐他汀组 3.78±0.66组别 主动脉内膜厚度正常组△△

图1 各组大鼠主动脉病理形态学（油红O染色，×400）

3 讨论

AS主要累及大中动脉，其基本病变是在动脉内膜形成粥样斑块，使动脉壁变硬，管腔狭窄，从而引起一系列继发性病变[1]，因其常并发心、脑血管意外事件而占疾病病死率的首位。越来越多的研究[5－10]表明，AS是一种慢性、亚临床的炎症性疾病，疾病的发生进展都和炎症相关，与炎症反应相关的IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP在AS的形成和发展中起到重要作用。

小陷胸汤由黄连、半夏、栝蒌实三味药组成，方出《伤寒论》，具有清热化痰，消痞散结之功效，临床上该方加减后广泛用于心血管类疾病的治疗。左建国[11]用加味小陷胸汤联合辛伐他汀治疗高脂血症42例，结果总有效率为95.2%。刘远婷等[12]用小陷胸汤联合丹参饮治疗痰瘀闭阻型冠心病心绞痛患者30例，取得了较好疗效。李景君等[13]用加味小陷胸汤治疗不稳定型心绞痛，选择符合诊断标准的不稳定型心绞痛患者30例，结果总有效率90.0%。

本研究采用高脂饲料配合维生素D3腹腔注射，复制AS大鼠模型，可观察到脂质斑块形成，主动脉内膜明显增厚。该方法价格低廉，且能快速建立AS模型，是目前研究AS应用最为广泛的模型建立方法之一[14]。本研究发现，模型组血清 IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP水平明显高于正常组，提示上述炎性介质与AS的形成密切相关，与目前众多研究结果是一致的[15－17]。经小陷胸汤灌胃12周后，大鼠血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP水平明显降低，主动脉内膜厚度减小，其中小陷胸汤中剂量组效果更明显。

综上所述，小陷胸汤可降低AS大鼠血清炎性因子水平，抑制内膜厚度的增加，这可能是小陷胸汤抗AS的机制之一。

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