利巴韦林片负荷降解的研究

2013-09-18郑凝坚

中国现代药物应用 2013年11期

郑凝坚

强制降解试验是指将原料药或制剂置于比较剧烈的试验条件下，考察其稳定性的一系列试验。一般而言，该试验的目的主要有以下两方面:一是通过考察药品在一系列剧烈条件下的稳定性，了解该药品内在的稳定特性及其降解途径与降解产物。例如，通过高温降解试验，可以了解所考察的药品在高温条件下是否稳定;如果不稳定，大致在何种条件下不稳定，该药品又是通过何种降解途径得到何种降解产物。其二，这些试验也能在一定程度上对有关物质分析方法用于检查降解产物的专属性进行验证。对于创新药，由于对其各方面的性质均不够了解，因此，通过设计比较完整的强制降解试验，可以比较全面地了解其稳定特性，从而为制剂处方、工艺的设计，以及产品储存条件的确定等提供有益的参考。所以对于创新药而言，通过强制降解试验来了解药物的稳定特性就显得尤为重要。在《中国药典》中只有对药品进行高温、高湿研究的要求。在ICH中只是对光照试验有指导文件。而本研究是综合了《中国药典》［1，2］、ICH 及外国cGMP的要求，对药品进行了一个全面的研究。下面是我们对药品利巴韦林片进行强降解试验研究的全部内容。

利巴韦林片是抗病毒药，主要适用于呼吸道合胞病毒引起的病毒性肺炎与支气管炎，皮肤疱疹病毒感染。国外更大量用于丙型肝炎的配合治疗。

为了掌握药品利巴韦林片在极端恶劣环境下的降解情况，并证明我们所采用的分析方法对杂质分析的专属性，我们综合了国内外对药品的稳定性试验的要求，制定了负荷降解实验研究。将利巴韦林片在酸、碱、热、氧化和光照条件下进行降解，15 d(360 h)内降解量要达到20%(±10%)。所有的样品都用带有UV检测器的HPLC检测系统进行含量及杂质检测，峰纯度用带有DAD检测器的HPLC检测系统进行检测。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂仪器:HP1100高效液相色谱系统(HPLC)，色谱柱:Aminex Fast Acid Analysis阳离子交换柱(9μm，100 mm ×7.8 mm)，检测方法:USP 利巴韦林测定方法。

1.2 样品制备

1.2.1 酸处理实验样品溶液的制备酸处理贮备液(平行制备两份):准确称取相当于200 mg利巴韦林原料的片剂样品，置于100 ml容量瓶中，加入适量的 HCL(1N)溶液溶解，并定容至刻度，摇匀。置于暗处，于室温下放置24～144个小时。

1.2.2 碱处理实验样品溶液的制备碱处理贮备液(平行制备两份):准确称取相当200 mg利巴韦林原料的片剂样品，置于100 ml容量瓶中，加入约70 ml KOH(0.1N)溶液溶解，并定容至刻度，摇匀。置于暗处，于室温下放置4～144个小时。

1.2.3 热处理实验样品的制备取5个称量瓶，每个瓶中放入相当于400 mg利巴韦林原料的片剂样品，放入130℃的烘箱中，烘24～360个小时。

1.2.4 光照实验样品的制备取5个称量瓶，每个瓶中放入相当于400 mg利巴韦林原料药的片剂样品，置于光照试验箱日光灯下(照度:10000±1000Lux)，放置24～360个小时。

1.2.5 氧化处理实验样品溶液的制备氧化试验贮备液(平行制备两份):准确称取相当于100 mg利巴韦林原料药的片剂样品，置于100 ml容量瓶中，加入约100 ml 3% 双氧水溶解，然后稀释至100 ml，摇匀，置于恒温恒湿箱中(40℃±5℃，避光)，放置24～360个小时。

1.2.6 杂质溶液的制备杂质标准品贮备液:分别准确称取10 mg 杂质标准品(RTCOOH、TCOOH、Ribavirin α-Anomer、TCONH2、5’ARTCONH2)，置于五个不同的 50 ml容量瓶中，用稀释液溶解并定容至刻度，摇匀。再准确称取25 mg利巴韦林标准品，置于另外一个50 ml容量瓶中，用稀释液溶解并定容至刻度，摇匀。

1.3 实验程序按照上述负荷降解处理条件，将利巴韦林片分别进行酸、碱、热、光、氧化处理，然后运用HPLC分析系统，根据设定的仪器及色谱条件，对处理后的样品溶液进行含量、杂质及峰纯度测定。碱处理样品处理4 h后测定，酸处理样品在第24、48、144 h分别测定一次，热处理、光处理和氧化处理样品在第 24、72、120、240、360 h 分别测定一次。

图1 酸处理实验利巴韦林片样品图谱

2 实验结果及分析

2.1 酸处理实验总结按照已定的实验方案，在酸处理实验第24、48、144 h，我们分别对处理后的利巴韦林片样品进行了HPLC检测，结果表明，利巴韦林片经过酸处理144 h后，发生了明显降解，所检测出的已知杂质有 RTCOOH、TOOOH、TCONH2等，见图1。

2.2 碱处理实验总结按照已定的实验方案，在碱处理实验第4小时，我们对处理后的利巴韦林片样品进行了HPLC检测，结果表明，利巴韦林片经碱处理4 h后，发生了明显降解。这说明:在碱性条件下，利巴韦林片降解产生RTCOOH杂质，见图2。

图2 碱处理实验利巴韦林片样品图谱

2.3 光处理实验总结按照已定的实验方案，在光处理实验第24、72、120、240、360 h，我们分别对处理后的利巴韦林片样品进行了HPLC检测，结果表明，利巴韦林片干品经过光照处理360 h后，均未发生明显降解。这说明:在光照条件下，利巴韦林片相对比较稳定。

2.4 热处理实验总结按照已定的实验方案，在热处理实验第24、72、120、240、360 h，我们分别对处理后的利巴韦林片样品进行了HPLC检测，结果表明，利巴韦林片干品经热处理360 h后，未发生明显降解，这说明:在较高温度条件下，利巴韦林片干品相对比较稳定。

2.5 氧化处理实验总结按照已定的实验方案，在氧化处理实验第24、72、120、240、360 h，我们分别对处理后的利巴韦林片样品进行了HPLC检测，结果表明。在氧化条件下，利巴韦林片中核糖基与三氮唑环之间的C-N键发生断裂，由于核糖基不包含能吸收紫外光的发色团，故而不能被UV检测器检出，见图3。