北虫草复合制剂对小鼠免疫功能的影响

齐 贺，黄竹青*，郑剑玲，吴素琴，宫雁冰，王美惠，魏赤平

(1.辽宁卫生技术职业学院，辽宁 沈阳 110101;2.北京大学首钢医院，北京 100144)

北虫草是北冬虫夏草的简称，也叫蛹虫草，是国内外公认的药食两用真菌。北虫草真菌能够产生多种生物活性物质，如多糖、虫草酸、虫草素、超氧化物歧化酶(SOD)、B族维生素和多种氨基酸等，具有广泛的药理作用。以应对免疫抑制和免疫衰老为中心的免疫调节是当前北虫草免疫学研究中最为活跃和倍受关注的领域之一，特别是体液免疫和细胞免疫间调控的复杂性，它们之间往往组成免疫网络多重的形式。通过反馈和负反馈的机理来完成调控作用，维持机体内环境的平衡稳定。有关中草药提高免疫力的研究已有许多报道［1-2］，但有关复合北虫草提取物的免疫调节功能的药效作用尚未见相关报道。本文探讨北虫草复合制剂对免疫低下小鼠的胸腺指数、脾指数和绵羊红细胞致小鼠溶血素抗体生成相关的免疫学指标变化，为了解其对机体的免疫调节功能提供实验依据，以期合理开发利用北虫草。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 昆明种小鼠，雌雄各半，体重为18～24 g近交系普通级小鼠，购自中国医科大学实验动物部(动物合格证号:SCXK［辽］2003-0009)。在本实验室分笼饲养，自主进食，颗粒饲料，自动饮水，适应1周后进行实验，实验室温度(16±2)℃。

1.1.2 供试虫草 天赢北虫草(Cordyceps militaris)子实体由沈阳中天生物工程有限公司李春燕教授惠赠，子实体药号:国家食品药品监督管理局审批的人工北虫草药材研究(批件号2003L01393、药物临床研究号2003L01394)。

1.1.3 试剂与仪器 北虫草复合制剂(组成:北虫草、人参、五味子，含蛋白质、氨基酸、虫草素、虫草酸、多糖、超氧化物歧化酶和维生素E等成分，采用水提95%醇沉工艺)，含量5 mg/mL，绵羊红细胞悬液均由辽宁省基础医学研究所制备。都氏试剂(碳酸氢钠 1.0 g/L，高铁氰化钾0.2 g/L，氰化钾0.05 g/L)，HCI、NaOH 等均为分析纯。J2-21低温离心机(美国Beckman公司);BX41型荧光显微镜(美国Olympus公司);AL30107型分类血液细胞分析仪(美国Thremo公司);650-66荧光分光光度计(日本日立公司)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠胸腺指数和脾指数测定 实验用昆明种小鼠120只，随机分为6组，即对照组、衰老模型组、白介素-2(IL-2)与北虫草复合制剂高、中、低3个剂量组。采用灌胃给药，空白对照组给生理盐水。衰老模型组采用腹腔注射6%D-半乳糖(300 mg/kg/d)，1次/d，给药6周后，小鼠脱椎处死，处死前称重，处死后分别取出胸腺和脾脏，剥离脂肪组织，天平称重，测定胸腺指数和脾指数指标。

1.2.2 小鼠溶血素抗体的检测 将100只雄性小鼠分成10组:①对照组;②免疫抑制模型组(CPA);③IL-2组;④北虫草复合制剂低剂量3.5 g/kg+CPA;⑤中剂量给药组10 g/kg+CPA;⑥高剂量给药组30 g/kg+CPA。各组小鼠均以5%绵羊红细胞(SRBC)0.2 mL/只ip致敏。于致敏前4 d 2～9组灌服给药，给药7 d，每天1次。1组同时灌服相同体积的生理盐水。模型组在致敏当天开始腹腔注射CPA 7.5 mg/kg，每天1次，连续5 d。于停药后次日取血，分离血清，以生理盐水稀释500倍后，37℃水浴10 min，冰浴终止反应，离心10 min，取上清液1 mL，加1∶10稀释的豚鼠补体1 mL，加入都氏试剂4 mL，充分摇匀，放置10 min，利用紫外可见分光光度计，以对照管作空白于540 nm处测定吸收度，按下列公式计算半数溶血值(HC50)。样品HC50=样品的吸收度值/绵羊红血球溶血的吸收度值×稀释倍数

1.2.3 统计学处理方法 各组数据均数用平均数±标准差表示，组间比较采用t检验，显著性以P＜0.05和P ＜0.01表示。

2 结果与分析

2.1 北虫草复合制剂对小鼠胸腺指数和脾指数的影响

由表1可见，与衰老模型组比较，衰老实验组小鼠的胸腺和脾脏指数显著降低，IL-2组明显增加，而灌胃北虫草复合制剂的3个剂量组中，小鼠的胸腺指数和脾脏指数与之比较均有显著提高，统计学分析，具有显著性差异，P＜0.05，P＜0.01。

2.2 北虫草复合制剂对小鼠溶血素抗体生成的影响

由表 2可见，北虫草复合制剂 3.5、10、30 g/kg剂量对CPA所致免疫抑制小鼠有明显的增强免疫功能的作用。中高剂量组抗体水平明显高于CPA组，具有显著性差异，P＜0.01。

表1 北虫草复合制剂对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响(n=12，单位:mg/10 g体重)Table 1 Extract production from Cordyceps Militaris on thymus index and spleen index influence(n=12，unit:mg/10 g body weight)

表2 北虫草复合制剂对绵羊红细胞所致小鼠溶血素抗体生成的影响(n=7～11;单位:mg;g/kg体重;给药途径:灌胃和腹腔)Table 2 Extract production from Cordyceps Militaris on sheep red blood cells caused by the impact of hemolysin antibody in mice(n=7～11;unit:Mg;g/kg body weight;route of administration:intragastric administration and intraperitoneal)

3 讨论

虫草复合制剂的有效成分对机体有补益强壮和增强免疫的功能［3］。虫草和人参中的多糖及核苷类等有效成分具有增强免疫力、延缓衰老和抗肿瘤等药理作用已有许多报道［4］;而北虫草具有显著提高免疫力的作用一直受到关注。实验结果表明:与模型组比较，衰老实验组小鼠的胸腺和脾脏指数显著降低，而北虫草复合制剂的3个剂量组的胸腺指数和脾脏指数均有显著提高，白细胞介素-2作为免疫增强剂亦表现出同样的效果。本研究中的北虫草复合制剂3.5、10、30 g/kg剂量对CPA所致免疫抑制小鼠也表现出具有明显的增强免疫功能的作用，小鼠溶血素抗体水平高于CPA组。CPA具有抑制免疫功能的作用已被广泛认知［5］，同时还具有使脾细胞IL-2活性降低的生物效应，二者之间表现为负相关。CPA可通过淋巴细胞内的相应受体，抑制淋巴细胞增殖，减少IL-2表达［6］，本实验中北虫草复合制剂提高免疫功能低下小鼠的胸腺指数和脾脏指数及溶血素抗体水平的结果表明与增加正常小鼠的免疫器官-脾脏和胸腺的重量相关，由于免疫器官的应答，继而使小鼠机体免疫功能加强，表现出溶血素抗体生成提高。机体的免疫调节网络十分复杂，尚需更深入的研究，以解释北虫草复合制剂提高机体免疫力的机制和作用，为更科学地利用北方特色资源提供参考。

［1］ 林飞卿，余传霖，何球藻.医学基础免疫学［M］.上海:上海医科大学出版社，1992:1-90.

［2］ 邢安辉，王洪军，谷凤文，等.北虫草提取物促进运动性疲劳血生化指标恢复的实验研究［J］.时珍国医国药，2010，21(10):2481-2483.

［3］ 王洪军，吕真麟，张博平，等.北虫草提取物增强小鼠生理体能的研究［J］.解放军预防医学，2009，27(3):165-167.

［4］ 黄国鑫，严钦惠，张仲敏，等.北虫草提取物延缓皮肤衰老的实验研究［J］.中国美容医学，2011，20(4):612-614.

［5］ 吴克枫，冯燕梅，俞红，等.不同剂量环磷酰胺对小鼠的免疫毒性研究［J］.贵州医药，1999，23(2):91-92.

［6］ 王文蔚，方芳，李春明.环磷酰胺对小鼠骨髓细胞微核率的影响作用研究［J］.中国卫生检验杂志，2006，16(9):1127-1128.