城口东俄芹化学成分研究

秦 南，苏艳芳 ，*，王亚笛，张 慧，吴振海，高秀梅

1天津大学药物科学与技术学院，天津 300072;2天津中医药大学天津市中药化学与分析重点实验室，天津 300193;3西北农林科技大学生命科学学院，杨凌 712100

城口东俄芹(Tongoloa silaifolia)别名甜三七(秦岭)，为伞形科东俄芹属(Tongoloa)植物。该属植物全世界有15种，其中13种为我国特有［1］。城口东俄芹生长在海拔2000～3500 m的山坡林下或高山草地，分布于陕西(秦岭及太白山等地)、四川、湖北、云南等省。其性平，味甘、微苦，具有止血镇痛、活血散瘀、祛风湿、强筋骨等功效，用于跌打损伤、外伤出血、崩漏、风湿性腰腿及周身疼痛、劳伤等［2］。尚未见有关城口东俄芹和东俄芹属植物的化学成分研究报道，本实验从城口东俄芹的乙醇提取物中分离鉴定了6个化合物，分别为suberosin(1)、crenulatin(2)、7-羟基-8-甲氧基香豆素(3)、luteolin-7-O-α-L-arabinopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside(4)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷 (5)、daphnolin(6)。以上化合物均首次从东俄芹属中分离得到，其中3、4和6首次从伞形科植物中分离得到。

图1 化合物1～6的化学结构Fig.1 The chemical structures of compounds 1-6

1 仪器与材料

核磁共振谱用 Bruker AvanceⅢ 400 MHz和Varian INOVA 500 MHz核磁共振仪测定;柱色谱用硅胶(100～200、200～300目)及薄层色谱用硅胶GF254均为青岛海洋化工厂产品;ODS(Chromatorex，20～45 μm)为 Fuji Silysia Chemical Ltd 生产;柱色谱用聚酰胺(60～80目)及聚酰胺薄膜均为浙江台州市路桥四甲生化塑料厂生产;D101型大孔吸附树脂为天津市海光化工有限公司产品;葡聚糖凝胶Sephadex LH-20为Pharmacia产品;所用试剂均为分析纯。

城口东俄芹全草于2007年7～8月采自陕西省眉县，经西北农林科技大学吴振海教授鉴定，植物标本(No.S200709001)保存于天津大学药学院天然药物化学实验室。

2 提取与分离

城口东俄芹干燥全草0.935 kg，用95%乙醇于室温下冷浸2 d后分别用95%乙醇回流提取3次，60%乙醇回流提取2次，每次2 h，合并提取液，减压回收乙醇得到无醇味浓缩液，加适量水混悬，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取物45.0 g，正丁醇萃取物 62.5 g。

乙酸乙酯萃取物(45.0 g)经硅胶柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇-水梯度洗脱，共得到132个流分:流分16～22合并后经两次硅胶柱色谱，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得到化合物1(50 mg);流分57～72合并后经聚酰胺柱色谱，二氯甲烷-丙酮梯度洗脱，结合重结晶纯化(石油醚)，得到2(10 mg)，3(15 mg)。

正丁醇萃取物和水部分(260.0 g)经D101大孔吸附树脂柱，依次用水、30%乙醇、50%乙醇和95%乙醇洗脱，30%乙醇洗脱物(29.0 g)经聚酰胺柱色谱，乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，共得到90个流分:流分73～82合并后经聚酰胺柱色谱，乙酸乙酯-甲醇-水梯度洗脱，再经聚酰胺柱色谱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，结合重结晶纯化(甲醇)，得到4(8 mg)。50%乙醇洗脱物(15.9 g)经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇-水梯度洗脱，共得到87个流分:流分49～59合并后经聚酰胺柱色谱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，再经ODS反相硅胶柱色谱纯化，44%甲醇-水洗脱，得到化合物5(12 mg)。流分60～63合并后经两次聚酰胺柱色谱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，再经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，最后经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱，得到化合物6(15 mg)。

3 结构鉴定

化合物1 白色针状结晶，C15H16O3，易溶于氯仿，1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:7.64(1H，d，J=9.6 Hz，4-H)，7.20(1H，s，5-H)，6.80(1H，s，8-H)，6.25(1H，d，J=9.6 Hz，3-H)，5.30(1H，t，J=7.6 Hz ，2'-H)，3.92(3H，s，7-OCH3)，3.33(2H，d，J=7.2 Hz，1'-H)，1.72(3H，s，4'-CH3)，1.79(3H，s，5'-CH3);13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:161.7(C-2)，160.9(C-9)，154.7(C-7)，143.8(C-4)，133.9(C-3')，127.7(C-10)，127.6(C-5)，121.6(C-2')，113.0(C-3)，112.1(C-6)，98.7(C-8)，56.1(7-OCH3)，28.0(C-1')，26.0(C-5')，18.0(C-4')。以上波谱数据与文献［3，4］报道基本一致，鉴定化合物1为suberosin。

化合物2 浅灰黄色片状结晶，C11H8O4，易溶于氯仿，1H NMR(CDCl3，400 MHz)δ:10.4(1H，s，6-CHO)，8.02(1H，s，5-H)，7.72(1H，d，J=9.6 Hz，4-H)，6.91(1H，s，8-H)，6.36(1H，d，J=9.6 Hz，3-H)，4.04(3H，s，8-OCH3);13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ:187.9(6-CHO)，164.4(C-7)，159.9(C-2)，159.8(C-9)，143.4(C-4)，129.2(C-5)，122.4(C-10)，114.8(C-3)，112.7(C-6)，100.1(C-8)，56.6(7-OCH3)。1H NMR 波谱数据与文献［5］报道基本一致，鉴定化合物2为crenulatin。

化合物3 浅灰黄色片状结晶，C10H8O4，易溶于甲醇、氯仿，1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:7.86(1H，d，J=9.6 Hz，4-H)，7.23(1H，d，J=8.4 Hz，5-H)，6.87(1H，d，J=8.4 Hz，6-H)，6.22(1H，d，J=9.6 Hz，3-H)，3.96(3H，s，8-OCH3);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:163.2(C-2)，155.5(C-4)，149.7(C-7)，146.5(C-9)，136.0(C-8)，124.9(C-5)，114.8(C-10)，114.2(C-3)，112.5(C-6)，61.8(8-OCH3)。以上波谱数据与文献［6］报道基本一致，鉴定化合物3为7-羟基-8-甲氧基香豆素。

化合物4 黄色粉末，C26H28O15，易溶于二甲基亚砜，1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:7.48(1H，d，J=8.4 Hz，6'-H)，7.46(1H，d，J=8.4 Hz，2'-H)，6.91(1H，d，J=8.0 Hz，5'-H)，6.79(1H，d，J=1.6 Hz，8-H)，6.75(1H，s，3-H)，6.46(1H，d，J=1.6 Hz，6-H)，5.01(1H，d，J=7.2 Hz，1''-H)，4.18(1H，d，J=6.0 Hz，1'''-H)，3.95(1H，br d，J=10.4 Hz，6''-H)，3.27 ～3.66(m，8H，2''-H ～5''-H and 2'''-H ～ 5'''-H);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:182.4(C-4)，165.1(C-2)，163.4(C-7)，161.6(C-5)，157.5(C-9)，150.4(C-4')，146.2(C-3')，121.9(C-1')，119.8(C-6')，116.5(C-5')，114.1(C-2')，105.9(C-10)，103.6(C-3)，103.5(C-1''')，100.4(C-1'')，100.1(C-6)，95.2(C-8)，76.7(C-5'')，76.1(C-3'')，73.6(C-2'')，72.9(C-2''')，71.0(C-3''')，70.0(C-4'')，68.1(C-6'')，67.6(C-4''')，65.0(C-5''')。以上波谱数据与文献［7］报道基本一致，鉴定化合物4为luteolin-7-O-α-L-arabinopyranosyl(1 → 6)-β-D-glucopyranoside。

化合物5 黄色固体，C21H20O10，易溶于二甲基亚砜，1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:12.97(1H，s，5-OH)，10.41(1H，s，4'-OH)，7.97(2H，d，J=8.4 Hz，2'-H and 6'-H)，6.95(2H，d，J=8.8 Hz，3'-H and 5'-H)，6.88(1H，s，3-H)，6.84(1H，s，8-H)，6.45(1H，s，6-H)，5.07(1H，d，J=6.8 Hz，1''-H)，3.19 ～ 3.73(m，5H，2''-H ～ 6''-H);13C NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ:182.5(C-4)，164.8(C-2)，163.5(C-7)，161.9(C-5)，161.6(C-4')，157.4(C-9)，129.1(C-2'and C-6')，121.5(C-1')，116.5(C-3'and C-5')，105.8(C-10)，103.6(C-3)，100.5(C-1'')，100.0(C-6)，95.4(C-8)，77.7(C-5'')，76.9(C-3'')，73.6(C-2'')，70.1(C-4'')，61.1(C-6'')。以上波谱数据与文献［8］报道基本一致，鉴定化合物5为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物6 淡黄色粉末，C24H20O13，易溶于二甲基亚砜，1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:8.32(1H，d，J=9.6 Hz，4-H)，8.02(1H，d，J=9.6 Hz，4'-H)，7.50(1H，d，J=8.8 Hz，5'-H)，7.00(1H，d，J=8.4 Hz，6'-H)，6.38(1H，d，J=9.6 Hz，3-H)，6.25(1H，s，6-H)，6.25(1H，d，J=9.2 Hz，3'-H)，4.46(1H，d，J=7.6 Hz，1''-H);13C NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ:160.6(C-2)，160.3(C-2')，154.6(C-7')，148.9(C-7)，148.8(C-9')，146.9(C-5)，145.4(C-4')，143.6(C-9)，139.7(C-4)，129.7(C-8)，128.5(C-8')，126.7(C-5')，114.3(C-3)，113.2(C-3')，113.0(C-6')，112.6(C-10')，105.3(C-10)，102.9(C-1'')，97.7(C-6)，77.6(C-3'')，76.4(C-5'')，73.5(C-2'')，69.1(C-4'')，60.1(C-6'')。以上波谱数据与文献［9］报道基本一致，鉴定化合物6为daphnolin。

1 Pan ZH，Watson MF.20.Tongoloa H，Wolff，Notizbl.Bot.Gart.Berlin-Dahlem.9:279.1925.东俄芹属 dong e qin shu.Flora of China，2005，14:34-37.

2 Guo ZJ(郭增军).Shaanxi Qiyao(陕西七药).Shaanxi:Shaanxi Science and Technology Press，2001.60-61.

3 Tosum A.Occurrence of coumarins in Seseli hartvigii growing in Turkey.Chem Nat Compd，2006，42:608-609.

4 El-Shafae AM，Ibrahim MA.Bioactive kaurane diterpens and coumarins from Fortunella margarita.Pharmazie，2003，58:143-147.

5 Wu TS，Furukawa H.Acridone alkaloids.Ⅶ.1)Constituents of Citrus sinensis Osbeck var.brasiliensis Tanaka.Isolation and characterization of three new acridone alkaloids，and a new coumarin.Chem Pharm Bull，1983，31:901-906.

6 Wu LJ(吴立军).Shi yong you ji hua he wu guang pu jie xi(实用有机化合物光谱解析).Beijing:People's Health Press，2009.182-183.

7 Bylka W，Matlawska I.Rutinosides and vicianosides of quercetin，apigenin and luteolin from Symphoricarpus albus L.Blake(Caprifoliaceae).Acta Pol Pharm，1999，56:249-252.

8 Ma YM，Zhang ZW，Feng CL.Flavonoids of Broussonetia papyrifera.Chem Nat Compd，2009，45:881-882.

9 Sun WX，Zhang Q，Jiang JQ.Chemical constituents of Daphne giraldii Nitsche.J Integr Plant Biol，2006，48:1498-1501.