不同HBV-DNA载量慢性乙肝患者血清MIF和IL-17的表达意义

邹同

我国是乙肝病毒感染的高发区，约8% ～20%的患者一旦诊断慢性乙型肝炎病毒感染，经过5年即进展为肝硬化，而失代偿期肝硬化患者预后极差，仅有14% ～35%的5年生存率［1］，因此对于慢性乙肝的治疗非常重要，但是目前多局限在抗病毒的治疗，对于病毒引起的肝脏免疫反应，从而导致肝硬化等方面的治疗进展有限，发现乙肝病毒的免疫反应指导临床治疗尤其重要。巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是一种独特的促肿瘤发生发展的细胞因子已有许多研究，但是其作为炎症介质可以参与机体炎症及免疫反应［2］，而在慢性乙肝的免疫反应有何作用，鲜有报道。白细胞介素-17(IL-17)在自身免疫性肝病、脂肪肝、及肝脏肿瘤中发挥重要作用，参与了肝脏损伤及再生过程［3］，而是否其也参与到乙肝病毒引起的免疫反应中?本研究探讨慢性乙肝患者不同HBV-DNA载量血清MIF和IL-17的变化。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2009年10月至2012年12月本院的慢性乙型肝炎患者，慢性乙肝的诊断依据2010年中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会制定指南诊断标准［4］，共106例，其中男61例，女45例，年龄17～63 岁，平均年龄(36.1±8.7)岁。根据HBV DNA载量(copies/ml)将慢性乙肝患者分为三组:高载量组(＞107 copies/ml)29例，其中男16例，女13例，年龄17～61岁，平均年龄(35.9±7.2)岁;中载量组(106～107 copies/ml)46例，其中男26例，女20例，年龄19～63岁，平均年龄(36.3±9.2)岁;低载量组(＞105 copies/ml)37例，其中男21例，女16例，年龄19～63岁，平均年龄(35.8±7.8)岁。三组患者性别、年龄、病情等无明显差异(P＞0.05)，具有可比性。所有患者近3个月未用过抗病毒药物及糖皮质激素等影响免疫功能的药物，排除其他HAV、HCV、HDV、HEV或HIV的合并感染及肝硬化、肝癌等失代偿肝病患者。

1.2 hBV-DNA，MIF和IL-17的测定 空腹采静脉血5 mL，置于室温放置2 h或4℃过夜，于1000 r/min离心20 min，于-20℃冰箱将标本放置保存待测，但应避免反复冻融，采用聚合酶链反应法检测血清HBV DNA，检验灵敏度为1000拷贝/ml，使用Roche LightCycler检测仪，所用试剂为深圳匹基公司生产。采用生物素一亲合素双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(ABC-ELISA)测定血清MIF和IL-17的浓度，试剂盒均由美国Biotich-nology Systems公司提供。

1.3 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件进行数据处理。计数资料用χ2检验，计量资料采用均数±标准差(±s)表示，独立样本t检验，采用非参数检验中的Wilcoxon秩和检验不符合正态分布的数据，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

三组患者血清MIF和IL-17的比较:经比较，高载量组和中载量组患者血清MIF和IL-17明显高于低载量组(P＜0.01)，高载量组MIF和IL-17均明显高于中载量组(P＜0.05，P ＜0.01)，见表1。

表1 三组患者血清MIF和IL-17的比较(±s)

表1 三组患者血清MIF和IL-17的比较(±s)

注:与高载量组比较*P＜0.05，＊＊P＜0.01;中载量组与低载量组比较#P＜0.05，##P＜0.01

3 讨论

乙肝病毒在肝内持续复制可导致在肝内大量的淋巴细胞浸润，大量细胞因子及炎性递质释放，机体自我保护在清除病毒的同时使肝细胞变性、坏死，如果此种病变持续反复发展，纤维隔、再生结节可在肝小叶内形成，从而导致肝硬化，发生不可逆变化，临床治疗相当困难。目前诊断乙型肝炎最常用的方法:乙型肝炎患者体内病毒水平的变化采用聚合酶链反应法检测HBV-DNA含量能更直接和特异地反映。在临床常规抗病毒治疗时，如果抗病毒药物治疗有效，常用标准为HBV-DNA水平降低或低于检测限，但机体对乙肝病毒免疫状况的恢复并不一定能反映，特别是HBV-DNA降低出现在应用核苷类似物时，此时更多的可能是由于病毒被暂时抑制［5］。并且已有研究HBV病毒本身并不直接导致肝细胞的损伤，导致肝组织损伤的主要病理生理机制是其引发的机体细胞免疫。

在HBV感染后多种疾病状况的发生、发展中Th细胞亚群和细胞因子网络失衡扮演了重要的角色。以往研究多集中在TH1/Th2的平衡方面，对在HBV感染和慢性乙肝疾病的病理进程中，新发现的Thl7细胞亚群仅有少量的文献报道，对于其所致的肝脏炎性损伤中发挥的作用更是鲜有报道。Thl7细胞在慢性乙肝肝细胞内优先释放增加，Thl7细胞可能参与慢性HBV感染的免疫学诱导，同时这可以激活单核细胞和mDCs释放炎症细胞因子发生炎症反应。IL-17是Thl7细胞分泌的重要细胞因子之一。具有促炎症作用，可诱导基质金属蛋白酶、趋化因子、和促炎细胞因子(如IL-6、TNF)的表达，参与中性粒细胞的增殖、成熟和趋化，引起组织细胞浸润和破坏，对T细胞的活化亦起协同刺激作用。在动物实验中发现［6］，IL-l7可以间接通过激活巨噬细胞产生的炎症因子激活肝星状细胞(HSC)，HSC是肝脏产生细胞外基质(ECM)的主要细胞，其活化、增殖是肝纤维化发生的中心环节，也可以直接激活HSC产生ECM在小鼠肝纤维化过程中起到了重要的作用。Wang等［7］研究表明，血清IL-17随着乙型肝炎病程的进展其表达也增强。但对于和乙肝病毒的关系却没有报道。

MIF是巨噬细胞和淋巴细胞的一个细胞因子，巨噬细胞的移动可以被其抑制，MIF在炎症过程中发挥重要作用，作为一种前炎症因子，MIF抑制巨噬细胞游走，在炎症局部促进巨噬细胞的浸润、增生、激活及分泌一些细胞因子。近年的研究认为，MIF作为一种重要的前炎症因子，参与病毒性心肌炎、溃疡性结肠炎、急性胰腺炎、肾炎多种炎症性疾病的发病过程［8］。Shi和 Mitchell等［9，10］在研究中发现 MIF 促进持续的细胞外调节蛋白激酶(ERK)活化作用而在机体炎症反应中发挥作用，其主要通过激活促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成员和CD74来实现。由于其开始主要在肿瘤发展中发现，因此研究MIF可通过抑制P53基因引起的凋亡，促进肿瘤的发生和生长，长期慢性炎症，如肝炎、胃炎等容易发生癌变也可以通过其对P53功能的抑制表现出来［11］，在肝纤维化的过程中，MIF可以诱导巨噬细胞分泌IL-8，IL-8可通过趋化炎症细胞，刺激释放大量的肌酸激酶而间接激活HSC，影响肝纤维化的病理过程。

本研究显示，高载量组和中载量组患者血清MIF和IL-17明显高于低载量组(P＜0.01)，高载量组MIF和IL-17均明显高于中载量组(P＜0.05，P＜0.01)。综上所述，本研究结果表明在慢性乙型重型肝炎发病过程中MIF和IL-17可能起重要作用，检测血清MIF和IL-17水平可作为评估慢性乙型重型肝炎病情严重程度的重要指标，并有望成为治疗的新靶点。

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［4］ 中华医学会肝病学分会.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)．中华内科杂志，2011，50(2):168-179．

［5］ Jaroszewicz J，Serrano B C，Wursthorn K，et al.Hepatitis B surface antigen(HBsAg)levels in the natural history of hepatitis B virus(HBV)-infection:A European perspective．Journal of Hepatology，2010，52(4):514-522．

［6］ Veldhoen M，Hocking R J，Atkins C J．et al.TGFbeta in the context of an inflammatory cytokine milien supports de novo diferentiation of IL-17-producing T cells．Immunity，2006，24(7):179-189．

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［8］ 方芳，陈伟英.巨噬细胞移动抑制因子在在机体炎症反应中的作用及其机制.国外医学内科学分册，2004，31(5):210-213．

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［10］ Mitchell R A，Metz C N，Peng T，Bucala R.Sustained mitogenactivated proteinkinase(MAPK)and cytoplasmic phospholipase A2 activation by macrophage migration inhibitory factor(MIF).Regulatory role in cell pmliforation and glucocorticoid action．J Biol Chem，2008，274(25):18100-6．

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