“寿星宝”保健酒的抗皮肤衰老作用

向 芳 张国豪 张信江 (遵义医学院附属医院皮肤科，贵州 遵义 563003)

“寿星宝”保健酒是由淫羊霍、丹参、黄精等中药和贵州茅台酒经现代工艺研制而成的一种药酒，具有益气活血、补肾防衰的功效。药酒是中药的一种剂型，有“酒的作用和药物功效”的双重作用。本实验从衰老生化指标的角度来探讨“寿星宝”保健酒对小鼠皮肤的抗衰老功效及其作用机制，为其实际应用和功能学评价提供依据。

1 资料与方法

1.1 实验动物 SPF级12月龄的昆明种小鼠，雌雄兼用，体重45～55 g，由第三军医大学实验动物中心提供。

1.2 受试药物 药酒以淫羊霍、丹参、黄精、葛根、红花5种优质中药材为主要原料，以贵州茅台酒厂生产的酒度为53%酱香型的茅台酒作为基酒，经浸泡、过滤、提取制成。经毒理学安全性评价后，作为本实验的受试药物。

1.3 主要试剂与仪器 超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒 、丙二醛(MDA)试剂盒、皮肤羟脯氨酸(Hyp)试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。SHHW21.420A型电热恒温水箱、Multiskan Spectrum全波长酶标仪、FC104电子分析天平、Soniprep150型超声波分解器、Thermo Heraeus Multifuge X1R冷冻离心机，实验仪器均由学院中心实验室提供。

1.4 实验方法

1.4.1 实验步骤 80只昆明种老龄小鼠随机分成老龄对照组，保健酒低、中及高剂量组，每组20只。保健酒样品按人体(60 kg)推荐剂量为每人 60 ml/d，设计为 5、10、20 ml·kg－1·d－1三个剂量组，其中 10 ml·kg－1·d－1相当于人体推荐用量。对照组给予等量生理盐水，各组均采用灌胃法，2次/d，连续3个月。给药期间各组每周重新称重1次，按体重的变化重新计算药酒的剂量。实验结束后小鼠断颈处死，取背部皮肤迅速冷冻保存，拟作皮肤组织匀浆及测定皮肤抗衰老指标用。

1.4.2 10%皮肤匀浆的制备 取脱毛后背部皮肤组织0.5 g左右，经冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪和血液，滤纸拭干，称重量，放入小烧杯内。用移液器量取该组织块重量9倍冷生理盐水，先取2/3量倒入装有组织块烧杯中，剪碎组织块后倒入匀浆管中，将剩余1/3生理盐水冲洗烧杯壁，一起倒入匀浆管中进行匀浆，充分研碎使组织匀浆化。再将制备好的匀浆以转速2 000 r/min离心15 min，取上清液备用。

1.4.3 皮肤组织匀浆生化指标测定 皮肤组织匀浆SOD、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的测定，参照南京建成生物工程公司SOD、GSH-Px、MDA及Hyp试剂盒说明书方法测定。

1.5 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件处理，数据以±s表示，各组间比较用单因素方差分析(ANOVA)进行检验。

2 结果

保健酒对小鼠皮肤SOD活力、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的影响见表1。与老龄对照组相比，保健酒低、中、高剂量组小鼠皮肤SOD活力均明显升高，MDA含量明显降低(P＜0.01)，而GSH-Px活力、Hyp含量亦明显升高(P＜0.05)。其中中剂量组SOD活力、Hyp含量明显高于低剂量组，MDA含量明显低于低剂量组(P＜0.01)，中剂量组GSH-Px活力高于低剂量组(P＜0.05)。高剂量组SOD活力、Hyp含量、GSH-Px活力均明显高于低剂量组，MDA含量明显低于低剂量组(P＜0.01)。高剂量组SOD活力、GSH-Px活力、Hyp含量高于中剂量组，MDA含量低于中剂量组，但差异无统计学意义(P＞0.05)，提示“寿星宝”保健酒低、中、高剂量组均能明显提高小鼠皮肤SOD活力、GSH-Px活力、Hyp含量及降低MDA含量。其中高剂量组和中剂量组功效明显强于低剂量组，而高剂量组和中剂量组功效相当。

表1 “寿星宝”保健酒对小鼠皮肤SOD活力、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的影响(±s，n=20)

表1 “寿星宝”保健酒对小鼠皮肤SOD活力、GSH-Px活力、MDA及Hyp含量的影响(±s，n=20)

与老龄对照组比较:1)P＜0.01，2)P＜0.05;与保健酒低剂量组比较:3)P＜0.01，4)P＜0.05

组别 剂量(ml/kg)SOD活力(U/mgprot) GSH-Px活力(U/mgprot) MDA含量(nmol/mgprot) Hyp含量(μg/mg)13.48±1.88 33.73±5.33 2.37±0.47 1.69±0.24保健酒低剂量组 5 16.98±2.941) 37.85±6.242) 1.60±0.371) 1.90±0.222)保健酒中剂量组 10 20.99±2.591)3) 42.74±6.922)4) 1.24±0.301)3) 2.21±0.272)3)保健酒高剂量组 20 22.65±3.691)3) 45.30±6.572)3) 1.06±0.291)3) 2.30±0.392)3)老龄对照组 －

3 讨论

皮肤衰老是机体衰老的重要外在表现之一，而机体衰老源于细胞的衰老。自由基累积损伤是皮肤衰老的重要因素。随着机体的衰老，体内抗氧化系统功能衰退，抗氧化酶的活性不断降低，自由基过量积聚，就会引起机体损伤，将不饱和脂肪酸氧化成超氧化物，形成脂褐素。氧自由基过多还会破坏细胞膜及其他重要成分，使蛋白质和酶变性，最后造成细胞组织功能及形态结构损害，使皮肤表现出变性、萎缩、粗糙无光、弹性减退、皱纹显现等。同时，氧化性损伤造成体内具有合成胶原能力的成纤维细胞受损，从而使胶原蛋白合成也受到影响，加之细胞内羟化酶在自由基攻击下失去羟化功能，使羟脯氨酸的生成也减少，最终导致胶原纤维合成障碍〔1〕。SOD作为机体清除自由基的主要酶类，是抗衰老研究中公认的参考指标之一。由于各种原因引起的皮肤中SOD活性降低，会使自由基过度的攻击正常细胞，破坏各种生物膜，使细胞发生衰老，功能丧失。MDA是体内多价不饱和脂肪酸组分受活性氧作用后过氧化反应的产物，由其含量可推断体内自由基生成的多少及自由基对机体的损伤程度。GSH是一种低分子清除剂，它可以清除超氧阴离子、过氧化氢等，能够稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其他辅助因子受氧化损伤，因此GSH量的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素。Hyp是真皮内含量丰富而且比较稳定的氨基酸，它的含量可以直接反映出真皮内胶原纤维的含量变化，而胶原纤维的含量变化可以提示皮肤老化的程度。

现代药理学研究表明:淫羊霍中所含的黄酮及苷类具有清除自由基的能力，其抗氧化活性较强〔2〕。丹参中的丹参酮可减少自由基的产生，提高抗氧化酶活性，同时还可使成纤维细胞活性增强，胶原蛋白合成增加〔3〕。黄精中的黄精多糖可显著提高抗氧化酶活性，增强机体的抗氧化能力〔4〕。黄精外用有促进胶原纤维合成，延缓衰老，改善皮肤功能状态的作用〔5〕。葛根所含的葛根黄酮可提高抗氧化酶活性，增强其对自由基的清除能力，抑制脂质过氧化，降低体内MDA的生成，从而起到保护机体组织的作用〔6〕。红花中有效成分红花黄色素有抗氧化活性，具有较强的清除羟自由基和超氧阴离子自由基的能力，尤其对羟自由基的清除效果很好，清除率达98.31%〔7〕。贵州茅台酒具有独特的酿造工艺，除含有丰富的氨基酸和维生素外，还含有SOD及各种人体必需的微量元素，具有清除自由基、抗氧化、保护细胞的作用〔8〕。将上述各种具有协同作用的中药与酒融于一体制成药酒，不仅配制方便、药性稳定、安全有效，而且酒精是一种良好的半极性有机溶剂，中药的各种有效成分都易溶于其中，药借酒力、酒助药势而充分发挥其效力，提高疗效。

本实验说明“寿星宝”保健酒可能是通过有效提高皮肤抗氧化酶的活性，增强机体抗氧化和清除自由基的能力，刺激衰老皮肤成纤维细胞活力，促进胶原蛋白的合成，从而起到预防和延缓皮肤衰老的作用。

值得一提的是，适量饮用保健酒有益健康与养颜，但过度滥饮则会导致皮肤内毛细血管疲劳而缺氧，尤其是嗜酒者极易发展成慢性酒精中毒，久之不仅不利健康，而且有损容颜，故饮用保健药酒也要适可而止。

1 王 萍，王小燕.本草养颜膏对老龄大鼠皮肤SOD和Hyp的影响〔J〕.中医药学报，2009;37(1):18-20.

2 侯丽丽，张守勤，李东升，等.淫羊藿有效成分抗氧化活性研究〔J〕.安徽农业科学，2011;39(3):1376-7.

3 梁 杰，李 响.枸杞多糖与丹参酮延缓小鼠皮肤衰老的实验研究〔J〕.中国实用医药，2009;4(9):5-6.

4 王玉勤，吴晓岚，张广新，等.黄精多糖对大鼠抗氧化作用的实验研究〔J〕.中国现代医生，2011;49(5):6.

5 杨智荣，赵文树，李建民，等.外用黄精制剂对小鼠衰老皮肤胶原纤维影响的实验研究〔J〕.中医药学报，2005;33(4):42-3.

6 郑王巧，郭春花，张晓一，等.葛根黄酮对亚急性衰老模型小鼠抗氧化作用的研究〔J〕.四川生理科学杂志，2009;31(4):145-6.

7 冯 涛，阎婷婷，阎国荣，等.红花提取物清除自由基能力的初步研究〔J〕.天津农学院学报，2010;17(1):6-9.

8 吴 君，程明亮，张国豪，等.茅台酒与肝病关系的流行病学调查及病理组织学研究〔J〕.世界华人消化杂志，2001;9(12):1374-8.