祛瘀解毒消癥汤对子宫内膜异位症大鼠腹腔液中IL－6、IL－8水平的影响

张晓峰 张明亮 西安市中医医院（西安 710001）

子宫内膜异位症（EMT）既是妇科常见病、多发病，也是难治性疾病，因此近年来一直是妇科领域研究的热点。国内外学者［1－2］研究发现，腹腔微环境中巨噬细胞分泌多种细胞因子，而EMT患者腹腔液中许多细胞因子的水平高于正常妇女，提示细胞因子参与改变腹腔环境的免疫动态平衡，在EMT的发生发展中起着重要作用。本研究旨在观察祛瘀解毒消癥汤对EMT模型大鼠腹腔液中细胞因子白细胞介素－6（IL－6）、白细胞介素－8（IL－8）水平的影响，为临床以祛瘀通络、解毒化浊、消癥止痛为法组成的中药复方制剂治疗本病的有效性提供实验依据。

1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 实验动物：选取SPF级9周龄的健康性成熟未交配SD大鼠60只，体重180±20ɡ／只，动物合格证：SCXK（陕）2007－001号，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。饲养环境：室温25±5℃，湿度55±5%，空气清新，通风良好，自由进食标准大鼠饲料、自来水。

1.1.2 实验主要药品及试剂：祛瘀解毒消癥汤：由陕西中医学院制剂室，将中药煎煮浓缩成含生药2.0g／mL的汤剂。丹莪妇康煎膏：由昆明滇虹药业有限公司生产提供，批号：091208，以1%的甲基纤维素钠（CMC－Na）溶解成含生药0.2g／mL的溶液。IL－6、IL－8酶免试剂盒：购自西安永屹生物技术有限公司。10%水合氯醛250g／瓶：西安杨森制药厂生产，批号：0911635。0.9%氯化钠500mL／瓶：西安康华制药厂生产，批号：0912089。75%酒精500mL／瓶：西安康华制药厂生产，批号：1001920。注射用青霉素钠80万单位／支：哈药集团制药总厂，批号：A090801910。苯甲酸雌二醇注射液：2mg／mL，由上海通用药业股份有限公司提供，批号：100103。

1.1.3 药物制备：根据施氏法以每千克体重折算系数计算出给药剂量［3］，配备好的试验组及对照组药物均置冰箱4℃备用。

1.1.4 实验主要仪器及设备：电子分析天平、全自动酶标仪由上海恒平科学仪器有限公司生产；电热恒温鼓风干燥箱（DHG－9075）由上海一恒科技有限公司生产；高速旋转离心机由北京东讯天地仪器有限公司生产；快速混匀器（sk－1型）由常州国华电器有限公司生产；手提式压力蒸汽消毒器（YX－280B型）由江阴滨江医疗设备厂生产；NR－B17CC型冰箱由日本松下公司生产。

1.2 实验方法 1.2.1 模型制备、动物分组：EMT模型制备：采用经典的造模法［3］。建模成功的标志为异位病灶呈米粒大小之结节，切面可见线形闭合水孔，异位内膜组织均形成囊状，囊内为无色透明液体，有的囊形成多个串珠状，周围可见丰富血管形。在造模成功的大鼠中随机选出40只，随机分为5组，加空白组共6组，具体分组情况如下：A组为空白组，B组为模型组，C组为丹莪妇康煎膏组，D组为祛瘀解毒消癥汤低剂量组，E组为祛瘀解毒消癥汤中剂量组，F组为祛瘀解毒消癥汤高剂量组。

1.2.2 给药方法：每日清晨对大鼠称重后，采取同一时间灌胃给药，具体给药方法如下。

A组：生理盐水灌胃，10mL／kg·d，连续28d；B组：生理盐水灌胃，10mL／kg·d，连续28d；C组：丹莪妇康煎膏溶液，2g／kg·d，连续28d；D组：祛瘀解毒消癥汤10g／kg·d，连续28d；E组：祛瘀解毒消癥汤20g／kg·d，连续28d；F组：祛瘀解毒消癥汤40g／kg·d，连续28d。

1.2.3 实验观测指标及检测方法：1.2.3.1 大体观察大鼠异位内膜形态学变化：肉眼观察模型组及药物干预后各组大鼠异位内膜液体积聚、血管形成及与盆腔腹膜、大网膜粘连等情况。

1.2.3.2 腹腔液的采集：末次给药后，禁食不禁水12h，10%水合氯醛腹腔麻醉后，注入生理盐水5mL／只，取腹腔液2mL，2000rpm，10min离心，取上清液－20℃冻存。

1.2.3.3 IL－6、IL－8水平测定：用酶联免疫测定法（ELISA法）检测腹腔液IL－6、IL－8含量，严格按照试剂盒说明书所示方法进行实验操作。

1.2.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件，对数据进行分析处理。各组数据均用“均数±标准差（）”表示，采用t检验，P＞0.05表示无统计学意义，P＜0.05表示有显著性差异，P＜0.01表示有非常显著性差异。

2 实验结果 2.1 肉眼观察大鼠异位内膜形态学变化模型组：种植在腹壁上的子宫内膜呈透明的囊泡形状，可见液体积聚，与盆腔腹膜、大网膜广泛粘连，异位内膜表面有血管形成。

祛瘀解毒消癥汤低剂量组：囊泡样的异位内膜较模型组有所缩小，与周围组织粘连明显，囊内可见液体积聚。

祛瘀解毒消癥汤中剂量组：异位内膜囊泡缩小的程度较低剂量组明显，与周围组织粘连较低剂量组减轻，但囊内仍有少量的无色透明液体。

祛瘀解毒消癥汤高剂量组：异位内膜囊泡较模型组明显缩小，甚至消失，仅呈痕迹，个别异位内膜与周围组织有少量粘连，囊内未见液体。

丹莪妇康煎膏组：异位内膜缩小的程度与祛瘀解毒消癥汤中剂量组大体相似，但与周围组织粘连较为明显。

2.2 各组大鼠腹腔液IL－6水平的比较 见表1。

表1 腹腔液IL－6水平的比较（）

表1 腹腔液IL－6水平的比较（）

注：与模型组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01；与丹莪妇康煎膏组比较，◇P＜0.05。

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由上表可见，空白组大鼠腹腔液中IL－6含量的低表达，与模型组比较有非常显著性差异（P＜0.01）；祛瘀解毒消癥汤高剂量组与模型组比较有非常显著性差异（P＜0.01）；祛瘀解毒消癥汤低、中剂量组及丹莪妇康煎膏组，与模型组比较均有显著性差异（P＜0.05）；祛瘀解毒消癥汤各剂量组与丹莪妇康煎膏组比较均无显著性差异（P＞0.05）。

2.3 各组大鼠腹腔液IL－8水平的比较 见表2

表2 腹腔液IL－8水平的比较（）

表2 腹腔液IL－8水平的比较（）

注：与模型组比较，▲P＜0.01；与丹莪妇康煎膏组比较，□P＜0.01。

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由上表可见，空白组腹腔液中IL－8水平的低表达，与模型组比较有非常显著性差异（P＜0.01）；祛瘀解毒消癥汤各剂量组及丹莪妇康煎膏组IL－8均低表达，与模型组比较均有非常显著性差异（P＜0.01）；祛瘀解毒消癥汤各剂量组与丹莪妇康煎膏组比较均无显著性差异（P＞0.05）。

3 讨 论 3.1 祛瘀解毒消癥汤对异位内膜组织形态学的影响 本实验利用大鼠建立EMT模型，予中药祛瘀解毒消癥汤干预后，用肉眼大致观察到各试验组大鼠异位内膜体积较模型组明显缩小，与周围组织粘连的程度有所减轻。初步显示祛瘀解毒消癥汤有抑制异位内膜生长和炎症反应、阻止新生血管的作用。

3.2 祛瘀解毒消癥汤对EMT大鼠腹腔液IL－6、IL－8水平的影响 自从1860年VonRokitansky等首先描述EMT至今，其确切的病因及发病机制尚不完全明了，但普遍认为是遗传、免疫、内分泌等多种因素综合作用的结果。而免疫因素在EMT的发生、发展中的作用机理，则是目前最为引人注目的研究热点。国内外研究已经证实，细胞因子参与改变腹腔环境的免疫动态平衡，在本病的发生发展中起着重要作用。细胞因子种类繁多，而许多研究表明［4－5］，由单核和巨噬细胞产生的IL－1、IL－2、IL－6、IL－8均属于促炎细胞因子，参与细胞免疫反应。近年研究发现，IL－6、IL－8与 EMT关系尤为密切［6］。IL－6是一种糖蛋白，其作为一种最常见的前炎症介质，具有非常广泛的生物学效应。腹腔液中IL－6含量的增多，使得腹腔液中巨噬细胞和炎症细胞被介导吸引活化，从而发生炎症及免疫反应，导致盆腔粘连及免疫异常，加速了EMT的形成和发展。此外，高水平的IL－6还能促进B淋巴细胞终末分化为浆细胞，血中IgG、IgM增高，相应在体内产生多种自身抗体，发生抗原抗体反应，各种免疫复合物随即产生，造成患者机体免疫的损害［7］。本研究显示，EMT模型大鼠腹腔液中细胞因子IL－6水平明显高于空白组，证明细胞因子IL－6确实参与了子宫内膜异位病灶的种植和生长，并且可能与疾病的严重程度相关。而祛瘀解毒消癥汤干预后使IL－6水平降低，说明该方能调节和改善EM异常免疫状态、抑制渗出、粘附、增生等炎症反应，从而抑制了模型大鼠异位内膜的病理发展。

IL－8是一种低分子蛋白质，来源于活化的T淋巴细胞、单核－巨噬细胞、B细胞、自然杀伤细胞等多种细胞，具有趋化中性、嗜酸性、嗜碱性粒细胞及T淋巴细胞的作用。已有研究表明［8］，IL－8在EMT病人的腹腔液和外周血中浓度明显高于正常妇女；IL－8通过趋化炎性细胞聚集以及促使新生血管的形成，对盆腔内炎症、粘连产生及异位病灶中新生血管的生成等均有重要作用。本研究显示，EMT模型大鼠腹腔中IL－8含量明显高于空白组，再次证明细胞因子IL－8促进了子宫内膜异位病灶的种植和生长，而用祛瘀解毒消癥汤干预后IL－8水平明显降低，说明该方通过免疫调节，抑制了炎性细胞的聚集和新生血管的形成，从而阻止了模型大鼠异位内膜的形成、发展。

3.3 祛瘀解毒消癥汤立法依据及组方特点 结合现代医学对EMT发病的基本认识，中医认为本病源于“离经之血”，属于血瘀证范畴，故而运用活血化瘀法也就成为治疗本病之根本大法［9］，而观察用活血化瘀类中药对于EMT患者免疫功能的影响亦屡有报道［10］。针对本病虽属良性却具有增生、浸润、转移及高复发等恶性行为的特征，新近有不少学者提出EMT的发病机理为瘀血、恶血壅阻于胞宫、胞脉，日久蕴而化毒，转化为瘀毒，主张用祛瘀解毒法治疗本病［11］。我们在借鉴这些新的观点的基础上，结合当代中医新的络病学说和浊、毒理论，认为本病属络病，病位在胞宫、冲任之络脉，瘀、湿、浊、毒互结损络是其病理特征，“伏毒依时而发”是其发病特点。据此拟定祛瘀通络、解毒化浊、消癥止痛治法，并拟定祛瘀解毒消癥汤。前期研究显示，该方用于临床不仅对EMT之痛经、癥瘕有较好疗效，还能降低其升高的血清CA125，转阴血清抗子宫内膜抗体［12］。本研究显示祛瘀解毒消癥汤对模型大鼠腹腔液中异常升高的IL－6、IL－8水平具有改善作用，说明该方确能调节和改善EMT患者自身免疫功能的异常，此亦应是其临床有效性的作用机理之一。

［1］樊 杨，陈必良.细胞因子与子宫内膜异位症［J］.国外医学：妇幼保健分册，2003，14（4）：219－221.

［2］Kennedy S，Mardon H，Barlow D.Familial endometriosis［J］.Assist Reprod Genet，1995，2（1）：32－34.

［3］施新猷.现代医学实验动物学［M］.北京：人民军医出版社，2002：10.

［4］Gazvani R，Templeton A.New considerations for the pathogenesis of endometriosis［J］.IntJGynecol Obstet，2002，6：117－126.

［5］Ariei，MD.Local Cytokinesin Endometrial Tissue：The Roleo fInter leukin－8in The Pathogenesis of Endometriosis［J］.AnnNYAeademy of Seienee，2002，955：101－109.

［6］Adamson D.Endometriosis：traditional perspectives，current evidence and future possibilities［J］.Int J Fertil－WomensMed，2001，6（3）：151－168.

［7］Braun DP，Gobol H，House R，etal Spontaneous and induced synthesis of cytokines by peripheral blood monocytes in patients with endometriosis［J］.Fertil Steril，1996；65（6）：1125－1129.

［8］Sharpe－Timms KL，Zimmer RL，Ricke EA，et al.Endometriotic haptoglobin Binds to Peritoneal macrophages and alters their function in women with endometriosis［J］.Fertility＆Sterility，2002，78：810－819.

［9］陈可冀.活血化瘀研究与临床［M］.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993：184.

［10］胡国珍.活血化瘀法治疗子宫内膜异位症48例［J］.上海中医药杂志，1995，13（2）：38－40.

［11］连 方，王希波，张建伟，等.中医治疗子宫内膜异位症的思路与方法［J］.中医杂志，2002，3（7）：545－46.

［12］张晓峰，董鹂芸，王 青.祛瘀解毒消癥汤治疗子宫内膜异位症45例［J］.陕西中医，2009，30（3）：10.