甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)生产中去氧胆酸钠残留量测定方法的建立

韩中山

(河北省唐山怡安生物工程有限公司 河北唐山 063020)

甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)生产流程中提纯工艺阶段需用去氧胆酸钠进行细胞裂解，为此须控制生产工艺中残留去氧胆酸钠的含量。本文应用紫外分光光度法对残留去氧胆酸钠浓度进行比色测定，结果表明在此实验条件下，标准去氧胆酸钠浓度在10～80μg/mL范围内呈现比较好的线性关系(r2在0.96～0.99之间)，提示该方法可用于甲型肝炎灭活疫苗残留去氧胆酸钠残留量[1]的测定。

1 材料与方法

1.1 主要材料及试剂 去氧胆酸钠对照品溶液(100μg/mL)、60%醋酸溶液、43.5%硫酸溶液。

1.2 主要仪器 SPECTRO UV－VIS AUTO紫外分光光度计Labomed，Inc，U.S.A。

1.3 检测方法 精密量取供试品1.0mL，置50mL比色管中，加43.5%硫酸溶液14.0mL，摇匀，于70℃加热20分钟，冷却至室温，在387nm处测定吸光度。标准曲线:精确吸取去氧胆酸钠对照品溶液(100μg/mL)0mL、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL于50mL比色管中，各加60%醋酸溶液至1.0mL，使去氧胆酸钠浓度分别为 0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL，加 43.5% 硫酸溶液 14.0mL，摇匀，于 70℃加热20分钟，冷却至室温，在387nm处测定各管吸光度。以标准去氧胆酸钠浓度(X)为横坐标，以相应浓度的吸收度(Y)为纵坐标作图，将X值、Y值输入计算机，应用统计学软件STA1(14)进行数据处理，得一标准曲线回归方程，由回归方程及样品的稀释倍数计算出样品的去氧胆酸钠含量。

2 结果

2.1 标准曲线(99%可信限范围) 取不同浓度的去氧胆酸钠标准液，测定吸光值，重复3次，相关系数在0.9697～0.9864之间。表明去氧胆酸钠浓度在10～80μg/mL范围内，去氧胆酸钠标准溶液与吸收度具有较好的线性关系，见表1。

表1 标准曲线回归方程及相关系数

2.2 6批甲型肝炎灭活疫苗原液去氧胆酸钠残留量测定结果

应用该方法进行6批疫苗去氧胆酸钠含量测定，每批疫苗检测6次，结果去氧胆酸钠含量均小于10μg/mL，见表2。

表2 6批甲型肝炎灭活疫苗去氧胆酸钠含量测定结果

3 讨论

3.1 标准液浓度的确定 3条标准曲线在10～80μg/mL五个浓度下所测得的O.D值在0.008～0.08范围内，而根据理论吸收值在0.3～0.7之间比较稳定，标准去氧胆酸钠浓度应选择在100～800μg/mL。由于甲型肝炎灭活疫苗原液中去氧胆酸钠含量极低，所以标准去氧胆酸钠浓度还应在10～80μg/mL。因此要求操作人员在测量过程中准确、认真，将相关系数r2控制在0.96以上，以保证结果的可信度。

3.2 通过六批疫苗去氧胆酸钠含量测定的结果可以看出，去氧胆酸钠含量均小于10μg/mL，说明甲型肝炎灭活疫苗原液生产工艺稳定可行，建议甲型肝炎灭活疫苗残留去氧胆酸钠含量质量标准小于10μg/mL。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社，2010.124