枳术健胃颗粒的制备及 HPLC法测定辛弗林的含量

苏 瑾,田丽华,金 言

(佳木斯大学药学院 黑龙江省生物药制剂重点实验室,黑龙江 佳木斯 154007)

功能性消化不良(functional dyspesia,FD),是指具有腹痛、腹胀、早饱、嗳气、食欲不振、恶心呕吐等不适,经检查排除引起这些症状的器质疾病的一组临床综合。其病因和发病机制至今尚未清楚,一般认为,传统中药在治疗 FD方面具有独特优势[1]。枳实是常用的理气药,《中国药典》(2010年版)收载的枳实来源于芸香科植物酸橙 Citrus aurantium或甜橙 C.sinensis osbeck的幼果,具有破气、散痞、泻痰、消积的功效 ,主要用于胸腹胀满、胸痹、痞痛、水肿、食积、便秘、胃下垂、子宫下垂、脱肛等[2]。“枳术健胃颗粒”是由古方“枳实消痞汤”变化而来,其为常用消食强胃经典方,以其组成以枳实和白术命名。《脾胃论》注明该方可“治痞,消食,强胃”,还创立了一系列的变化方,对于饮食所伤而致的它证,亦可灵活使用枳术丸[3～5]。本课题选择将其制成颗粒剂,既保持了汤剂作用迅速的特点,又克服了临用时煎煮不便的缺点,且味道可口、体积小,服用、贮藏及携带均较方便,采用 HPLC法控制君药枳实中辛弗林含量,为该制剂的制备、质量控制及应用提供了可靠依据,从而为开发治疗功能性消化不良的中药复方制剂进行了初步探索。

1 实验材料

1.1 药品与试剂

辛弗林对照品(批号 120936-200804,含量测定用 ),中国药品生物制品检定所;枳实药材(购于佳木斯市大仁堂医药公司,经生药学方法鉴定为正品);其他试剂均符合规定。

1.2 仪器

Agilent1100高效液相色谱仪,美国 Agilent公司;Olympus显微成像系统 ,U-CM AD3型,日本;R系列旋转蒸发仪,上海申生科技有限公司;FA2004N型电子分析天平,上海恒平科技仪器有限公司。

2 实验方法

2.1 L9(34)正交实验法筛选提取工艺

取枳实等药材,粉碎后过80目筛,按处方比例称取,以乙醇的浓度、温度、超声时间、提取次数为考察对象,每个因素拟定3个水平,选用 L9(34)正交表,见表1。

表1 试验因素水平表

2.2 处方设计

根据工艺和提取率要求,辅料用量以40%为宜,考虑辅料与干粉混合后的吸湿性和流动性,以及辅料与干粉混匀后制成颗粒的吸湿性、成型性、溶解性等因素选择辅料[6]。

2.3 枳实健胃颗粒中辛弗林的含量测定[7～9]

2.3.1 色谱条件

用 Aglient 1100 Series高效液相色谱仪 (含四元泵 ,自动进样器,紫外检测器,柱温箱),采用 Zobax-C18柱(4.6mm×200mm)色谱柱,以甲醇-水(0.02%磷酸及0.1%十二烷基磺酸钠 )(55:45)为流动相 ,流速为 1.0mL/min,检测波长为224nm,柱温:室温 ,进样量 10μL。

2.3.2 对照品溶液的制备

精密称定以五氧化二磷为干燥剂减压干燥的辛弗林对照品3mg,加甲醇适量,制成每1mL含辛弗林3μg的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备

取枳实健胃颗粒一次计量 10g,精密称定,精密加入55%的乙醇 25mL,45℃回流提取三次 ,每次 0.5h,合并提取液 ,减压回收乙醇。真空烘干,残渣用甲醇溶解,定量转移至100mL的量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀 ,即得[10,11]。

2.3.4 系统适应性实验

取缺少枳实的阴性供试品,按照供试品溶液的制备方法制备成阴性对照品溶液。分别取对照品溶液,供试品溶液与阴性对照溶液按“2.3.1”相下所述色谱条件进样测定。

2.3.5 线性关系的考察及方法学研究

精密称取干燥至恒重的辛弗林对照品0.003g,于50mL容量瓶中,加甲醇溶解配制成含辛弗林为0.06mg/mL的对照品溶液,即为辛弗林对照品的贮备液。分别精密吸取4,8,10,14,16μL注入液相色谱仪中,按“2.3.1”述色谱条件测定峰面积,以峰面积 Y对进样量 X(mL)进行线性回归,得出辛弗林含量的回归方程。

精密度试验 同一批号的样品5份,照“2.3.3”项下的方法制备供试品,依次进样,测定辛弗林峰面积。

稳定性试验取同一供试品溶液于0,2,4,6,8,10h进样,测定辛弗林含量的峰面积。结果表明颗粒质量在24h内稳定。

重复性试验精密吸取同一供试品溶液按上述条件测定5次,比较测定结果,测得辛弗林。

回收率试验取已知含量的样品5份,分别精密加入辛弗林对照品,按“2.3.3”供试品溶液制备,“2.2.1”色谱条件进行含量测定,计算平均回收率98.9%,RSD2.9%。

2.3.6 样品测定

取不同批号的供试品 3批,按“2.3.3”项下供试品溶液制备方法提取制成供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液10 μL,对照品溶液10μL注入高效液相色谱仪 ,测定峰面积,计算样品中辛弗林含量。

3 实验结果

3.1 正交试验优化制备工艺

见表 2～3。

表2 正交试验结果

6 2 1 2 3 6.86 7 3 1 3 2 7.32 8 3 3 2 1 5.01 9 3 2 1 3 7.07 I 21.42 18.81 18.27 II 22.62 21.10 21.89 63.44 III 19.40 23.53 23.28 R 1.0733 1.5733 1.6700 477.1815 SS 1.7654 3.7142 4.4596

表3 方差分析结果

经统计分析,筛选出以实验3为最佳工艺提取有效成分,即用55%乙醇在45℃下超声30min提取 3次。

3.2 处方及制备工艺

选用乳糖、糊精为辅料,按照处方比例称取枳实、厚朴、半夏、白术、干姜、党参、茯苓,用 55%乙醇浸泡 ,45℃超声30min后,用纱布过滤,将药渣重复超声及过滤,合并 3次滤液。真空减压浓缩至干膏,再将干膏粉碎过80目筛,按干膏粉：蔗糖：糊精(6：3：1)比例投料,用75%的乙醇制软材 ,干燥后用12目筛制得三批颗粒。三批颗粒的编号分别为20110510、 20110513、20110515,规格为每袋 10g。

3.3 系统适应性实验

在所述色谱条件下,结果表明,对照品峰,供试品相应峰与阴性供试品峰无重叠,辛弗林峰与其它相邻组分峰分离完全,分离度均大于1.5,辛弗林峰保留时间为6.251min。

3.4 线性关系考察

以测定的峰面积 Y为纵坐标,进样量 X(μL)为横坐标进行线性回归,得出辛弗林的回归方程(n=5),Y=36.0756+226.5055X(r=0.9998),线性范围 0.24～0.96mg。

精密度实验、稳定性实验、重复性实验结果表明供试品溶液稳定、方法的重现性好,满足样品测定的要求。

3.5 样品中辛弗林含量测定

见表4。

表4 样品测定结果

根据枳实健胃颗粒中辛弗林的测定结果,该颗粒的含量按辛弗林计为0.122%,即辛弗林每袋10g中辛弗林含量不能少于 0.01g。

4 讨论

实验结果表明用正交试验设计优化制备枳实颗粒剂优于煎煮法,所得产物高于煎煮法。测定辛弗林的紫外吸收,在224nm、275nm处均有最大吸收,综合考虑其他因素,在224nm处优于275nm,故选择224nm为检测波长。配制流动相时,应把 SDS先溶于甲醇,不起泡沫,易于配制。

枳实在临床上广泛应用于心血管、胃肠道等疾病,说明其药理作用的物质基础是多样的,因枳实饮片中各类成分含量相差较大,其相应的质量评价指标也应该是多种指标的综合。在制剂质量控制中,可从多种成分进行综合评价。对药材主要成分进行控制,同时进行药效学比较,可做到对制剂质量的全面、客观评价,从而合理地应用于临床。

[1]郑宏斌,赵茂森.枳实消痞汤治疗功能性消化不良疗效观察 [J].四川中医,2007,25(3):61

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[s].2005版,北京:化学工业出版社,2010,附录 IC

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[5]郑宏斌,赵茂森.枳实消痞汤治疗功能性消化不良疗效观察 [J].四川中医,2007,25(3):61

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