解酒消脂汤对酒精性脂肪肝大鼠肝保护实验研究*

梁 卫 梁 涛张丽玲 龚 林唐永明 蔡 鹰沈素娥△ 苏 静

（1.中国人民解放军第四五四医院，江苏 南京 210002；2.南京中医药大学，江苏 南京 210046）

解酒消脂汤对酒精性脂肪肝大鼠肝保护实验研究*

梁 卫1梁 涛2张丽玲1龚 林1唐永明1蔡 鹰1沈素娥1△苏 静1

（1.中国人民解放军第四五四医院，江苏 南京 210002；2.南京中医药大学，江苏 南京 210046）

目的 研究解酒消脂汤对酒精性脂肪肝（AFL）的肝保护作用机制。方法 采用酒精联合脂肪乳剂法制备AFL大鼠模型，将雄性SD大鼠随机分正常组、模型组，复方益肝灵片组、解酒消脂汤低、中、高剂量组。对照组和模型组给予生理盐水，其余各组连续灌胃给予相应药物6周，6周末进行肝脏组织病理学观察，测定各组大鼠体质量、肝指数、血清天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、谷氨酰转肽酶（GGT）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）活性。结果 与模型组比较，解酒消脂汤中、高剂量组能明显减轻肝脏脂肪变性和炎症；显著降低显著降低肝指数、血清AST、ALT、GGT、TG、TC、LDL-C水平。体质量明显增加，血清HDL-C水平明显升高。结论 解酒消脂汤具有减轻肝脏脂肪变性和炎症、改善肝功能、降低血脂的作用，从而起保护肝脏的作用。

解酒消脂汤 酒精性脂肪肝 肝功能 血脂

大量饮酒对机体多个器官具有毒害作用，尤其对肝脏损害最普遍。随着人们生活水平的提高 ，因饮酒导致的肝脏损害逐年增加。酒精性肝病主要包括酒精性脂肪肝（AFL）、酒精性肝炎、酒精性肝硬化 ，脂肪变是其早期表现 ，故治疗 AFL以阻止酒精对肝脏进一步损害极其重要。解酒消脂汤为治疗AFL的临床验方，本研究观察该方对AFL模型大鼠肝脏的保护作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物SD大鼠60只，雄性，体质量 180～220 g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号：SCXK（沪）2007-0005。

1.2 试剂及仪器（1）试剂：解酒消脂汤由解放军第四五四医院自行研制，组成：葛根15 g，竹茹10 g，秦艽10 g，柴胡 6 g，白芍 10 g，陈皮 10 g，郁金 10 g，决明子15 g，垂盆草 20 g，泽泻 10 g，法半夏 10 g，海藻 10 g，白术 10 g，茯苓 10 g，丹参 15 g，生山楂 30 g，五味子10 g。各药物浸泡0.5 h，加水煎煮2次，第1次加水2500mL，煎煮2h，过滤得煎出液，药渣再次加水1800mL，煎煮1.5 h，过滤得煎出液，合并2次煎出液，浓缩至规定浓度4 g/mL，分装备用。临用前以蒸馏水按所需浓度配制成水溶液，冰箱保存，用时37℃水浴温育，摇匀，备用。复方益肝宁片（吉林省博维药业有限公司，批号100407），56%北京二锅头 （北京顺通三星酒业有限公司生产，批号20100502），胆固醇（天津化学试剂有限公司生产，批号：20100603），脱氧胆酸钠（上海索莱宝生物科技有限公司提供）。丙二醇、吐温80（AR级）、玉米油、白砂糖、全脂奶粉、动物用复合维生素均为市售产品。丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所提供。（2）仪器：XHF-D型匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司），TD6001型电子天平（天津市天马仪器厂），LDZ 5－2型离心机（北京医用离心机厂），SyneRgy HT型酶标仪 （美国Bio-Tek）LX-20型生化分析仪（美国Beckman-coulter）。

1.3 动物模型参照文献［1］改良，以酒精联合脂肪乳剂灌胃，每日1次。脂肪乳剂组成：玉米油35 g，胆固醇 10 g，蔗糖 10 g，胆盐 1 g，奶粉 10 g，复合维生素0.3 g，吐温80 3.1 g，丙二醇3.6 g，加蒸馏水至 70 mL，造模前3 d以15%（V/V）酒精适应性灌胃，自第4日起，每3日酒精浓度增加5%，至酒精浓度40%止。脂肪乳剂每日灌胃量10 mL/kg。

1.4 干预方法正常喂养1周后的大鼠随机分为6组：正常组、模型组、解酒消脂汤低剂量组（予解酒消脂汤16.5 g/kg）、解酒消脂汤中剂量组（予解酒消脂汤33 g/kg）、解酒消脂汤高剂量组（予解酒消脂汤66 g/kg）、复方益肝灵片（予复方益肝灵片0.042 g/kg），每组10只。模型组不使用药物，正常饮食水，用药组在造模同时，按相应药物剂量灌胃给药。于第6周末，所有大鼠禁食12 h后，称重，麻醉，颈动脉采血，常规制备血清待测，处死取肝组织。

1.5 指标检测（1）肝脏组织病理学观察：大鼠处死后，取肝脏组织，4%多聚甲醛固定，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察。（2）肝指数：称量肝质量，计算肝指数＝肝湿质量/体质量×100%。（3）血清中肝功能、血脂指标检测：采集大鼠动脉血，静置30 min后，3000 r/min离心10 min取血清，按照试剂盒说明书要求进行操作，测定血清ALT、AST、GGT、TC、TG、HDL-C、LDL-C 含量。

1.6 统计学处理应用SPSS16.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组间比较用两样本均数的t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠肝组织病理学比较见图1。正常组：肝小叶清晰，内无脂肪变性、炎症坏死，肝细胞索排列整齐。模型组：肝小叶结构紊乱，肝细胞肿胀，胞浆疏松，肝细胞内大量脂滴生成，汇管区伴有炎细胞浸润以及部分点状肝细胞坏死，解酒消脂汤中剂量组、高剂量组和复方益肝灵片组能够明显减轻肝脏脂肪变性和炎症。

图1 酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织光镜观察（HE，×200）

2.2 各组大鼠肝指数和体质量比较见表1。正常组动物精神充沛、饮食正常、皮毛整洁有光泽。模型组大鼠嗜睡、食欲减退，少数腹泻、皮毛凌乱欠光泽。与正常组比较，模型组大鼠体质量明显减轻（P＜0.01），肝指数显著增加（P＜0.01）。与模型组比较，解酒消脂汤中、高剂量组和复方益肝灵片组大鼠体质量显著增加（P＜0.05或 0.01），肝指数显著下降（P＜0.05或 0.01）。

表1 各组大鼠肝指数和体质量比较（±s）

表1 各组大鼠肝指数和体质量比较（±s）

与正常组比较，*P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。 下同。

组 别 n 体质量（g） 肝指数（%）正常组 10 334.50±22.78 2.98±0.37模型组 10 288.27±23.38* 3.67±0.27*复方益肝灵片组 10 320.46±20.91△△ 3.12±0.36△△解酒消脂汤低剂量组 10 308.69±21.95 3.46±0.36解酒消脂汤中剂量组 10 318.67±27.34△ 3.24±0.46△解酒消脂汤高剂量组 10 326.46±17.85△△ 3.19±0.38△△

2.3 各组大鼠肝功能比较见表2。模型组大鼠血清ALT、AST、GGT含量明显高于正常组。解酒消脂汤中、高剂量组及复方益肝灵片组大鼠血清ALT、AST、GGT含量均显著低于模型组（P＜0.05或0.01），并呈现剂量依赖性。解酒消脂汤高剂量组较复方益肝灵片组ALT、AST、GGT 含量显著下降（P＜0.05）。

表2 各组大鼠肝功能比较（U/L，±s）

表2 各组大鼠肝功能比较（U/L，±s）

与复方益肝灵片组比较，□P＜0.05。

组 别 n GGT正常组 10 1.60±0.49模型组 10 3.70±1.27*复方益肝灵片组 10 2.20±0.60△△解酒消脂汤低剂量组 10 3.50±0.81解酒消脂汤中剂量组 10 2.60±0.13△解酒消脂汤高剂量组 10 2.30±0.46△△ALT AST 48.80±4.33 146.80±14.67 68.20±7.43* 211.00±10.89*57.90±5.75△△ 187.80±6.73△△62.70±5.59 204.30±9.54 60.80±6.51△ 195.10±17.36△52.70±4.36△△□ 181.60±5.71△△□

2.4 各组大鼠血清血脂比较见表3。模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均明显高于正常组，HDL-C明显低于正常组（P＜0.01）。解酒消脂汤中、高剂量组及复方益肝灵片组血清TC、TG、LDL-C含量均显著低于模型组 （P＜0.05或0.01），HDL-C含量显著高于模型组（P＜0.05或 0.01）。

表3 各组大鼠血清血脂比较（mmol/L，±s）

表3 各组大鼠血清血脂比较（mmol/L，±s）

组别 n LDL-C正常组 10 0.13±0.01模型组 10 0.18±0.04*复方益肝灵片组 10 0.14±0.01△△解酒消脂汤低剂量组 10 0.17±0.01解酒消脂汤中剂量组 10 0.15±0.02△解酒消脂汤高剂量组 10 0.14±0.01△△TC 1.35±0.24 1.82±0.21*1.51±0.14△△1.71±0.14 1.64±0.13△1.56±0.23△TG HDL-C 0.77±0.17 0.61±0.05 1.33±0.22* 0.48±0.05*1.03±0.16△△ 0.57±0.06△△1.25±0.08 0.52±0.05 1.11±0.16△ 0.54±0.06△1.06±0.13△△ 0.55±0.04△△

3 讨 论

长期大量饮酒是AFL发病的基础，酒精及其代谢产物直接或通过免疫机制损害肝细胞，形成肝细胞脂肪变性及脂肪贮积，发生本病。AFL归属于中医学“酒积”、“酒癖”、“酒鼓”、“酒疸”、“伤酒”、“胁痛”等范畴。本病本虚标实，湿热痰瘀毒为标实，气血阴阳亏损为本虚。根据上述病因病机，初中期治疗以祛邪为主，治当清解酒毒、疏肝健脾、行气化湿、祛痰降浊、活血化瘀，同时顾护脾胃之气、肝肾之阴。

根据上述治则治法，笔者拟定解酒消脂汤治疗AFL，经前期临床研究发现该方对AFL有良好的治疗作用［2］。方中葛根、竹茹、秦艽善解酒毒、醒脾和胃止呕；柴胡、白芍、陈皮、郁金疏肝解郁；决明子、垂盆草、泽泻清利肝胆湿热毒邪；半夏、海藻化痰降浊；白术、茯苓健脾燥湿；丹参、生山楂活血化瘀；五味子滋补肝肾。全方共奏清解酒毒、化湿理气、祛痰化瘀之功效。现代药理学研究表明，垂盆草的水提取物、正丁醇高剂量组能极显著地降低ALT和AST，并有保肝降酶的作用［3］。柴胡皂苷是柴胡产生保肝作用和肝毒性的主要物质基础，其对肝脏的药理作用主要表现在抗肝损伤和抗肝纤维化作用［4］。 丹参可促进肝脏对 HA、PCll、LN 的摄取与分解使其含量下降，从而改善肝纤维化［5］。

ALT和AST是反映肝细胞损害的常用酶学检查指标，是肝细胞损害的敏感标志。血清中的GGT主要来源于肝胆系统，肝脏受损或肝胆疾病均可引起GGT升高，大量持续饮酒可引起GGT升高［6］。此外，大量乙醇一次性进人机体后，在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化为乙醛和乙酸盐，使三羧酸循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢［7］。 血清 TC、TG、LDL-C 升高，在AFL的形成和发展过程中起重要作用。本实验研究结果显示：解酒消脂汤能明显减轻肝脏脂肪变性和炎症；能显著降低肝指数、升高体质量；明显降低AFL大鼠血清ALT、AST、GGT含量，表明该方对肝细胞具有保护作用；能显著降低血清TG、TC、LDL-C的含量，明显升高HDL-C含量，具有改善脂质及脂蛋白代谢紊乱、防止肝细胞脂肪变性的作用，达到防治AFL的目的。

通过动物实验为解酒消脂汤的临床运用提供了实验依据，表明该方能保护肝细胞、改善脂质代谢，对恢复肝损伤起到积极的作用，初步探讨解酒消脂汤治疗AFL的肝保护作用机制，为该方的开发和应用奠定基础。

［1］王媛媛，李俊，曹琦，等.豹皮樟总黄酮对大鼠酒精性脂肪性肝炎的防治作用及部分机制［J］.安徽医科大学学报，2006，42（2）：179.

［2］梁卫，徐华强，张丽玲，等.解酒消脂汤治疗酒精性脂肪肝临床研究［J］.时珍国医国药，2007，18（11）：2817-2818.

［3］潘金火，何满堂，罗兰，等.垂盆草不同提取部位保肝降酶试验［J］.时珍国医国药，2001，12（10）：888.

［4］黄幼异，黄伟，孙蓉.柴胡皂苷对肝脏的药理毒理作用研究进展［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17（17）：298.

［5］安峰，李生棣，刘宪玲.丹参对肝纤维化指标的影响［J］.西北药学杂志，2001，16（8）：25.

［6］金凤影.谷氨酰转肽酶的测定对酒精性肝炎的诊断价值［J］.中国实用医药，2009，4（13）：149-150.

［7］陈东方，李立，王亚东，等.解酒口服液对乙醇致急性肝损伤的保护作用［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17（10）：199.

Effect of Hepatic-protective in Jiejiuxiaozhi Decoction on Rats of Alcoholic Fatty Liver

LIANG Wei1，LIANG Tao2，ZHANG Li-ling1，et al. 1 No.454 Hospital of PLA，Jiangsu，Nanjing 210002，China；2 Nanjing University of Chinese Medicine，Jiangsu，Nanjing 210046，China

Objective:To investigate the prevention and treatment effects of Jiejiuxiaozhi Decoction on rats with alcoholic fatty liver （AFL）.Methods:Male SD rats were randomly divided into the normal group，the model group，the Compound Yiganling Tablet group，the Jiejiuxiaozhi Decoction low dose group，the Jiejiuxiaozhi Decoction middle dose group and the Jiejiuxiaozhi Decoction high dose group.The normal group and the model group were administered saline.The other groups were given corresponding medicine by gavage for 6 weeks.After having given medicine for 6 weeks，the following indexes were observed and detected such as the weight，the liver index，the levels of aspartate aminotransferase （AST），alanine aminotransferase （ALT），glutamyltranspeptidase（GGT），triglyceride （TG），total cholesterol （TC），low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C），high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C） in serum.Results:Compared with the model group，，fatty degeneration and inflammation were significantly reduced in the Jiejiuxiaozhi Decoction middle dose group and high dose group.The following indices were significantly decreased such as liver index，the contents of AST，ALT，GGT，TG ，TC，LDLC in serum.However，the following indicators were significantly increased including body weights，the contents of HDL-C in serum.All the experimental data had statistical significances.Conclusion:Jiejiuxiaozhi Decoction can significantly reduce fatty degeneration and inflammation，improve liver function and decrease blood lipid capacity.

Jiejiuxiaozhi Decoction；Alcoholic fatty liver；Liver function；Blood lipid

R285.5

A

1004-745X（2013）06-0891-03

南京军区医学科技创新课题（08MA060）

△通信作者

2013-03-05）