拉米夫定治疗对慢性乙型肝炎患者干扰素-γ的变化分析

马孝政

怀化市第一人民医院，湖南怀化 418000

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）是一种在世界范围内流行的感染性疾病，被感染人群中有一部分为慢性HBV 感染患者。慢性HBV 感染的病理发病机制受多种因素的影响，许多研究认为宿主和病毒间的免疫应答反应对于该疾病的发生和发展起了关键性的作用。临床通常使用拉米夫定来对患者进行治疗，这是一种核苷类的抗病毒药物，主要通过抑制病毒DNA的复制而发挥作用，但是长期使用该药物可能导致患者产生耐药性[1-5]。有研究认为长期使用拉米夫定后慢性HBV 患者的免疫反应出现了改变，其中Th 细胞群在该应答反应中起主要作用。为探讨分析拉米夫定治疗对慢性乙型肝炎患者干扰素-γ的变化影响，该院2010年1月—2012年1月针对这一现象展开调查，调查对象为70例慢性HBV，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取在该院接受治疗的乙型肝炎患者70例为研究对象，患者中男45例，女25例，患者的年龄为23～78岁，平均年龄为45.3岁。所有患者经过检测均符合慢性乙肝的诊断标准，具体参考Locarnini的标准。并且发现70例患者中在治疗后病毒产生变异和未变异的各为35例，分别将这些患者标记为变异组和未变异组，同时选取同期在该院接受健康体检的30例体检者作为对照组。治疗前所有患者都为HbeAg 阳性，其中HBV DNA≥105 copy/mL，患者的丙氨酸氨基转移酶（ALT）大于正常值上限的2倍。同时排除具有以下描述的患者：患者合并有其他肝炎病毒的感染、患者感染HIV 病毒、使用过免疫调节剂、患者为肝炎失代偿、孕妇或哺乳期妇女。免疫组、未免疫组、对照组3组年龄、性别、治疗前的HBV DNA 和ALT 水平相比较，差异无统计学意义 （P>0.05），见表1。

表1 变异组、未变异组和对照组一般情况对比结果（±s）

表1 变异组、未变异组和对照组一般情况对比结果（±s）

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1.2 方法

所有患者均接受拉米夫定的治疗，剂量为100 mg/d，治疗时间为6个月，治疗后变异组发生病毒变异的平均时间为（13.45±5.4）个月。分别采集3组受试者的外肘静脉血液2 mL，将采集到的血液装入普通试管和EDTA的抗凝试管，然后分离血清和血浆，检测血清中的ALT 水平、细胞因子；检测血浆中的HBV DNA水平。

1.3 HBV 和ALT的检测方法

使用荧光定量方法检测HBV DNA的含量（仪器采用Life Technology公司的PCR仪器），试剂采用和仪器相配套的试剂。使用全自动生化分析仪器对ALT进行分析（仪器使用Life Technology 生产的全自动生化分析仪），试剂使用和仪器相配套的试剂。

1.4 IFN-γ的检测方法

使用双抗夹心的ELISA 方法对IFN-γ的水平进行测定。试剂均购自Life Technology公司，一抗为生物素化抗体，二抗为辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。样本的浓度使用标准品绘制的曲线进行计算。

1.5 统计方法

所有数据使用SPSS13.0 统计软件进行分析，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，进行t检验。

2 结果

未变异组 6 个月时 IFN-γ 为（52.77±7.32）pg/mL，变异后为（52.93±6.42）pg/mL；变异组 6 个月时 IFN-γ 为（52.91±5.34）pg/mL，变异后为（25.32±0.76）pg/mL。 对照组 IFN-γ 为（7.89±4.88）pg/mL。检测结果显示治疗后6个月时未变异组的血清IFN-γ和变异组相比差异无统计学意义（P>0.05），在病毒变异后变异组的IFN-γ水平要明显低于未变异组，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

慢性乙肝感染是一种常见的感染性疾病。临床通常使用拉米夫定对患者进行治疗，这种药物可以抑制HBV的复制并能够改善患者肝脏功能和组织病变的情况。研究报道长期使用拉米夫定可能发生HBV的变异并最终导致患者对拉米夫定产生耐药的现象，患者血清中的HBV DNA 会再次转阳而肝炎复发。这种现象可能是由于病毒对药物的敏感性降低所致。变异后肝炎是否会复发主要和宿主以及病毒的自身免疫应答水平相关。特定的免疫应答和其效应机制主要涉及了Th 亚细胞群所分泌的不同细胞因子， 比如由Th1 细胞分泌的IL-2、IL-12、IFN-γ，由Th2分泌的IL-4、IL-5 等，这些细胞因子都具有调节人体体液免疫反应的功能，对于预防细胞外病原微生物的感染有重要的作用。在治疗慢性乙肝的患者时，抗病毒是一个重要的过程，这个过程可以强化机体清除病毒的能力，细胞的免疫应答在抗病毒的过程中起着核心的作用。研究证明Th1/Th2 细胞比例的失衡和慢性乙肝感染有关[1-5]。

该院的研究发现使用拉米夫定对患者治疗，出现变异后患者的机体免疫应答功能也随之改变，变异组的IFN-γ水平要明显低于未变异组。可能和病毒种群、抗原、免疫细胞因子的变化有关。提示笔者利用监测Th1 和Th2相关细胞因子的改变可能有助于及时发现患者HBV的耐药性变化。

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