组培繁殖生姜微型根茎球技术体系的构建

刘全国

（河北省唐山职业技术学院 064002）

生姜是重要的辛辣类药菜多用经济作物，在长期利用根状茎无性繁殖过程中，一方面由于种姜用量大，常因贮藏不当造成种姜腐烂，生产上无姜种可用；另一方面由于感染病毒引起品种退化，造成减产与品质变劣现象。这两方面一直严重影响姜农种姜效益，已逐步成为人们关注的焦点。利用生姜的茎尖分生组织中不含病毒或病毒含量较低的特性，将其切取下来进行离体培养，从而获得试管苗植株，构建组培繁殖微型姜根茎球生产技术体系，为生姜生产提供数量充足、质量优良的繁殖材料。

生姜微型根茎是指利用生姜根状茎芽1～2cm做为繁殖材料，经杀菌、钝化病毒后剥取0.5～1mm大小的生长点，接种在诱导培养基上诱导出丛生芽，继代增殖后，经炼苗在网棚无土栽培条件下生产的微型姜球。微型根茎具有体积小、储藏容易、生理年龄小、细胞分裂快、脱菌少毒的优势，在生姜生产中应用可保持品种优良种性，产量高。

1 剥离茎尖、组培苗培养与增殖快繁

1.1 根状茎尖外植体初生丛生芽的诱导

健壮根状茎姜块用50%多菌灵500倍液浸泡30min杀菌后，放在25℃光照充足的地方，保湿催芽，当芽长1～2cm时取下，放入烧杯中用纱布封口，自来水冲洗30min后用70%酒精消毒30s，再用0.1%HgCI2浸泡灭菌15min，无菌水洗涤5～6次，无菌吸水纸吸干根状茎尖表面水分后放在50～60℃无菌下处理20min，钝化病毒。在无菌室解剖镜下剥取0.5～1mm大小、带1～2个叶原基根状茎芽尖的生长点接种到配方为MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.5mg/L+GA30.05mg/L+蔗糖3.0%+琼脂 0.5%、pH值为5.8～6.0的培养基上，初期黑暗培养5d，以后每天光照时数12h，光照强度为2500～3000Lx，在26℃环境条件下培养诱导，1周后开始膨大，3～4周后可形成绿色芽点，开始分化不定芽，经5～6周分化形成丛生芽。

1.2 继代增殖

生姜组培苗的继代培养是生姜试管苗扩繁的关键，当培养基中的芽丛长至2～3cm时，把丛生芽切成单芽转入配方为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖3.0%+琼脂0.5%、pH值为5.8～6.0的增殖培养基中，每瓶10株，条件同前，继代培养4周得到2～5cm的组培瓶苗。

1.3 组培瓶苗液体浅层静置快繁

液体培养基即MS培养基成分加蔗糖3.0%，以海绵、滤纸为支持物，培养瓶内加入液体培养基30～50mL，液面上平铺1张滤纸，封口，高温灭菌。根据生产需要确定快繁继代次数，继代增殖固体培养基上生长的瓶苗，切成单株接在液体培养基中，投放到滤纸表面上，接触液面，每瓶15株，每天光照时数12h，光照强度为 2500～3000Lx，在 26℃环境条件下培养至形成3～5个小根。

2 试管（瓶）苗炼苗

组培出的姜苗能否成活，炼苗是关键。试管苗在温室中完成炼苗过程，炼苗分为瓶内炼苗和瓶外基质炼苗2个环节。（1）瓶内炼苗：将组培瓶苗放在20～25℃、光照强度 1500～2500Lx、每天光照时间12h、空气湿度80%～90%的密闭空间内，揭去培养瓶的封口膜，加入10mL左右无菌蒸馏水，防止因揭开封口膜水分散失，组培苗缺水萎蔫3～5d。（2）瓶外基质炼苗：取出完成瓶内炼苗的组培苗，用50%多菌灵溶液800倍液浸泡3～5min，密植在基质炼苗床上，炼苗基质为草炭∶蛭石∶珍珠岩=1∶1∶1。 用40%甲醛40～50倍液按20～40L/m3水量喷洒基质，将基质均匀喷湿，喷洒完毕后覆盖塑料薄膜24h以上。使用前揭去薄膜让基质风干15d左右，以消除残留药物危害。在自瓶内移植到瓶外基质后的3d内，苗床上覆盖塑料薄膜，床内温度保持在25～28℃，空气相对湿度在90%以上。瓶外基质炼苗采用自然光照，覆盖薄膜3d后逐渐增加通风量，经1周的精细培养，去除薄膜，相对湿度控制在80%，移栽10d后试管苗开始长出枝，在茎基部长出小芽，4周完成瓶外基质炼苗，可移栽定植到网棚基质中。

3 组培瓶苗网棚生产微型种姜关键集成技术

用砖搭建宽140cm、高25cm的苗床，床内填充经过高温焙烧的蛭石基质（10～15cm），苗床栽苗前用甲基托布津800倍液进行网棚内地面、苗床杀菌处理。当网棚内地温稳定通过15～20℃时，移栽定植脱毒苗。移苗前苗床浇1次透水，将组培苗瓶外基质炼苗后定植在蛭石培养基上，定植深度5cm，株行距为5cm×7.5cm。栽后用喷壶浇水，小水细喷，定植后喷雾保湿加盖塑料薄膜小拱棚。网棚外覆盖遮阳网适度遮阴缓苗1周，防止阳光直射晒苗，1周后移栽苗长出新根后逐步去除遮阳网和小拱棚，基质湿度控制在70%～80%。

3.2 营养液及其管理

采用蛭石作为基质，蛭石只起到固定植株保持水分的作用，栽苗后10d内，植株处于缓苗期，吸收的养分很少，在此期间苗床管理的主要任务是保持苗床蛭石基质湿度。栽苗后7～10d后开始喷施营养液。

前期每隔5d喷施1次营养液肥，配方为硝酸钙100mg/kg、硝酸钾 1034mg/kg、硫酸镁 490mg/kg、磷酸二氢钾348mg/kg、硫酸铵170mg/kg、氯化钙150mg/kg、EDTA-Na 37.25mg/kg、硫酸亚铁 27.85mg/kg、硫酸铜100mg/kg。后期喷施诺普丰水溶性复合肥，配方为氮19%、五氧化二磷19%、氧化钾19%、铁-EDTA 0.12%、锰-EDTA 0.11%、锌-EDTA0.11%、铜-EDTA0.1%、钼0.01%、硼 0.1%，每隔 7d施 1次，浓度为 0.2%～0.5%。生长期叶面追施0.5%磷酸二氢钾溶液。

3.3 微型姜球采收

适时收获确保绝对年轻的根茎球生理年龄；网棚生产微型生姜根茎球达到10～15g生理成熟时即可采收。按微型根茎球粒级大小分别采收，种皮鲜嫩，防止破皮现象。采收时的微型根茎球含水量大，采收后放在通风阴凉处晾晒5～7d，然后装入种子袋，贴好标签，在4～6℃条件下低温储藏。