不同形态、用量培养基对黄皮洋葱试管苗生长的影响

2013-08-09闫芳张春梅

长江蔬菜 2013年16期

闫芳，张春梅

（1.河西学院生态与绿洲农业研究院，甘肃张掖，734000；2.河西学院农业与生物技术学院）

洋葱学名Allium cepaL.，别名葱头、圆葱、胡葱、玉葱，是百合科葱属草本植物，具有极高的营养价值和药用价值，它不仅能够改善食物风味，而且具有杀菌、抗肿瘤、降血压、抗血栓及动脉硬化等生理功能，耐寒，喜温，适应性强，产量高，易栽培，耐贮运且供应期长，对调节淡季蔬菜供应具有重要作用[1]。茎尖培养是进行洋葱脱毒、生产无毒种苗、恢复优良种性的有效手段[2，3]。姜璐琰等[4]研究了洋葱胚状体的诱导及再生系统的建立。徐启江等[5]对分蘖洋葱试管鳞茎微繁技术进行了研究。但对洋葱鳞茎快繁环节中培养基形态和用量的研究鲜有报道，特进行了此次试验，以期获得洋葱鳞茎的最佳培养体系。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料为黄皮洋葱鳞茎，购自甘肃省张掖市甘州区某蔬菜超市；50 mL三角瓶。

1.2 试验处理

设3组试验，每组试验设4个处理。第一组MS固体培养基不同用量试验，处理A1为50 mL三角瓶放入培养基10 mL，处理B1为15 mL，处理C1为20 mL，处理D1为25 mL。第二组MS液体培养基不同用量试验，处理A2为50 mL三角瓶放入培养液10 mL，处理 B2为 15 mL，处理 C2为 20 mL，处理 D2为25 mL。第三组White固体培养基不同用量试验，处理A3为50 mL三角瓶放入培养基10 mL，处理B3为 15 mL，处理 C3为 20 mL，处理 D3为 25 mL。

1.3 试验方法

调整培养基pH值至5.8，消毒灭菌后于无菌条件下用茎盘切割方式切取0.3～0.5 mm洋葱鳞茎为外植体，接种到MS+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基（固体或液体）和White+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基（固体）上，鳞茎每一处理接种10瓶，每瓶接种6个切段，然后放置在相同条件下培养。培养10、20、30 d时分别随机抽取每处理5瓶30株调查，观察植株生长发育动态，记载叶片数、茎节数、株高、发根数、小苗长势、叶片状态、小苗状态等。

①无菌材料的获得、接种剥去洋葱葱皮，用自来水冲洗10 min左右，采用茎盘切割的方式切取外层鳞茎上半部0.3～0.5 mm为外植体，将外植体放入75%酒精消毒灭菌30 s，再放入0.1%HgCl2消毒灭菌10 min，用无菌水认真冲洗4次。在超净工作台接种到培养基上，进行无菌培养。

②培养条件培养温度（25±2）℃，光照强度2 000～3 000 lx，光照培养 16 h，暗培养 8 h。

2 结果与分析

2.1 MS固体培养基不同用量对试管苗生长的影响

由图1可知，MS固体培养基不同用量对洋葱试管苗的生长影响比较明显，鳞茎在MS固体培养基上前期生长无差异，叶片数、茎节数、株高、发根数都基本一致；后期试管苗差异很大，从10～20 mL范围内试管苗叶片数、茎节数、株高、发根数都随培养基用量的增加而增加，20 mL时达到最大值，20 mL以后试管苗生长无明显变化。表明MS固体培养基用量过多会超过洋葱试管苗生长所需的营养而造成浪费。由此可见，50 mL三角瓶放入20 mL是MS固体培养基的最佳用量。

2.2 MS液体培养基不同用量对试管苗生长的影响

由图2可知，随着培养液用量的增加，洋葱试管苗叶片数、茎节数、发根数、株高先增大后逐渐减小，至15 mL时洋葱试管苗叶片数、茎节数、发根数、株高达到最大值；20 mL以上时洋葱试管苗的各项指标逐渐减小。表明液体培养基用量过多会使接种的切段浸没于其中，因缺氧而不易发芽，导致试管苗生长势弱。因此，50 mL三角瓶放入15 mL是MS液体培养基的最佳用量。

2.3 White固体培养基不同用量对试管苗生长的影响

由图3可知，鳞茎在White固体培养基上生长差异较小，随着培养基用量的增加，叶片数、茎节数、株高、发根数都随着培养基用量的增加而增加，25 mL时达到最大值。White固体培养基为低浓度盐培养基，其营养元素与前两组基本相同，pH值和培养条件也相同，至25 mL时洋葱试管苗的各项指标达最大值，这与营养元素的浓度有关，因此，50 mL三角瓶放入 25 mL是White固体培养基的最佳用量。

2.4 不同形态、用量培养基对洋葱试管苗生长的影响

由图4可知，B2处理（MS液体培养基）明显优于C1处理（MS固体培养基）和D3处理（White固体培养基），其表现在叶片数多、植株高、发根数多、茎粗壮、长势强、苗壮、发芽生长快。同时处理B2培养成苗（达到4～6片有效叶的植株称为成苗株）时间要比处理C1和处理D3提早5 d左右。因此50 mL三角瓶放入15 mL MS液体培养液是洋葱鳞茎快繁的最佳用量及方式。

3 小结与讨论

图1 MS固体培养基不同用量对试管苗生长的影响

图2 MS液体培养基不同用量对试管苗生长的影响

Phillips等[6]在 BDS+毒莠定 0.75 mg/L+BA 2 mg/L固体培养基上诱导出愈伤组织和体细胞胚。Fridborg[7]在 MS+NAA 1 mg/L+KT 1.5 mg/L固体培养基上把洋葱鳞片直接诱导成芽，此试验与本试验的MS固体培养基相同，均能获得小植株；不同之处是培养基激素种类及其配比和外植体不同，表现为对洋葱试管苗生长的影响效果不同。徐启江等[5]对分蘖洋葱试管鳞茎微繁技术进行研究，以洋葱鳞茎茎尖为外植体，以25 mL MS+BA 0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L固体培养基为起始培养基，培养40 d后获得试管苗，再诱导获得微鳞茎，此试验与本试验的不同之处在于培养基的形态和外植体的选取，本试验选用洋葱外层鳞茎上半部，可能由于不同形态培养基对洋葱试管苗的生长影响不同。本试验得出液体培养基有利于洋葱试管苗的生长。

综上所述，在洋葱鳞茎快繁阶段，MS液体培养基优于MS固体培养基，其用量以50 mL三角瓶中放15 mL培养液最佳。但洋葱鳞茎快繁过程中易产生遗传性变异，特别是染色体倍性的变化有待进一步研究。