泰山大枣解酒口服液的研制及功效探究

许兴超 刘春希 许 静 张晓薇 卢宪齐 杨志孝 张敬军

(1.泰山医学院，山东 泰安 271000;2.枣庄市中医医院，山东 枣庄 277100;3.莱芜市中医医院，山东莱芜 271100)

近年来，由于社交的需要和生活压力的增大，酗酒和酒精中毒已经成为我国的公共卫生问题，因饮酒引起的头痛、头晕、恶心、呕吐、记忆力减退、注意力不集中，导致意外事故发生率增加，严重的甚至导致急性死亡的发生。在我国应用中草药解酒具有悠久的历史，但是利用大枣为主料、以枳椇子［1］、茯苓［2］、马齿苋［3］、葛根［4］、蜂蜜［5］为辅料配制一种天然的解酒口服液，国内外未见研究报道。泰山大枣是泰山三大特产之一，其医疗价值和保健功效居群果之冠，医学界称之为天然维生素丸。泰山大枣在1982年被列为国家保健枣。大枣含有黄酮类、多糖类、皂苷类、多种维生素和矿物质等活性物质，具有解酒毒、护肝、抗脂质过氧化等多方面功效［6］。而且枳椇子、茯苓、马齿苋、葛根、蜂蜜均具有较好的解酒护肝作用。本项研究各成分用材均为泰山当地选材，且经药学专家鉴定，无毒副作用，是一种纯天然绿色保健品，具有巨大的开发前景。

1 材料与方法

1.1 实验动物 昆明小鼠，体重量(302)g，雌雄各半，购于济南动物研究所。

1.2 材料与试剂 泰山大枣，采自泰山山麓。枳椇子、茯苓、马齿苋、葛根购于泰安永春堂药店。蜂蜜，购于泰安天外村养蜂基地。主要试剂:试剂Ⅰ(由一份NAD溶液和5份pH=9的甘氨酸-NaOH缓冲液组成);乙醇、丁酮(均为色谱纯，上海试剂一厂)。两瓶白酒(泰山特曲38度，泰山酒业集团股份有限公司)。

1.3 仪器与设备 赛多利斯BSA822电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司;FW100高速万能粉碎机，天津泰斯特仪器有限公司;超声波提取设备，济宁市奥波超声电气有限公司;DHG-9240型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科技有限公司;电脑程控压力蒸汽灭菌锅，长春市百奥生物仪器有限公司;紫外分光光度仪，TU-1901 HP-5890 SeriesⅡ气相色谱仪，安捷伦公司(Agilent);FID检测器，福州众科自动化科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 泰山大枣解酒口服液制备 根据原料药性的不同，大枣采用浸提的方法;枳椇子、茯苓、马齿苋、葛根(查阅大量文献，以上各种辅料较其他解酒原料均具有较好的解酒效果)采用超声提取法;蜂蜜可直接采用。大枣提取液的制备［7］:称取大枣250 g，大枣果实(85℃烘干、粉碎)，2倍重量蒸馏水冷浸提12 h，过滤，1次提取滤液，滤渣用再蒸馏水95℃热提取1 h，过滤，2次提取滤液，合并两次提取滤液，各浓缩配制成 0.1 g/ml、0.2 g/ml、0.3 g/ml大枣提取液。枳椇子、茯苓、马齿苋、葛根混合液的制备［8］:取枳椇子、茯苓、马齿苋、葛根药材各250 g，于40℃干燥粉碎，2倍重量蒸馏水采用超声提取法，控制温度65℃提取二次，合并滤液，浓缩配制成0.1 g/ml、0.2 g/ml、0.3 g/ml四药材混合液。蜂蜜可分3 ml、6 ml、9 ml三个水平。见表 1。

表1 泰山大枣解酒口服液配方及浓度

1.4.2 小鼠醉酒试验验证泰山大枣解酒口服液成分最佳配比 将大枣提取液、四药材混合液和蜂蜜利用正交法［9］L9(34)，三因素、三水平梯度得9种复方药液。取昆明小鼠90只雌雄各半，随机分为9组，实验序号为1～9，进行小鼠醉酒试验。将配好的9种复方药物按小鼠体重0.1 ml/10g［10］按组别给小鼠灌胃，30 min后再按0.1 ml/10g给小鼠灌胃白酒。通过小鼠醉酒试验计数每组醉酒数量、出现醉酒状态的平均醉酒时间、平均醒酒时间等指标来验证各组分最佳配比以达到最佳解酒效果。

1.4.3 复方药液在酒前服用和酒后服用实验 确定好配方最佳用口服液量后，进行给口服液及酒先后实验。取60只小鼠雌雄各半，随机分为6组，分别为空白清水组、先水后酒组、先口服液后酒组、口服液酒合用组、先酒后水组、先酒后口服液组，两次饮用时间间隔为30min。ADH在波长340 nm处有一强吸收峰［11］，通过测定340nm波长处ADH的吸光度，可得知解酒效果。

第二次灌胃30 min后处死小鼠，摘眼球取血0.5 ml［12］，置于 1 ml离心管中 4000 r/s 离心 8 min。取50 μl血清入比色皿，同时加入1 ml试剂Ⅰ以及20 μl乙醇，对照比色皿中加入 50 μl蒸馏水，1 ml试剂Ⅰ以及20 μl乙醇。340 nm波长下，每只样品5分钟内每一分钟读取吸光度，求平均吸光度，得6组吸光度的数据，绘制折线图，比较得最佳用法［13］。

1.4.4 研究给酒前梯度时间给解酒口服液对解酒效果的影响 确定酒前服用解酒口服液为最佳解酒用法后，给酒前梯度时间给复方药液，利用顶空气相色谱法［14］测定血液中乙醇含量的指标来确定最佳用药时间。

实验取30只小鼠，随机分为3组。小鼠灌胃解酒口服液0.1 ml/10 g后分别15 min、30 min、45 min后灌胃白酒0.1 ml/10 g，然后30 min小鼠摘眼球取血，加入适量肝素为待测血液。各取乙醇、丁酮100 μl，置于100 ml容量瓶中，新沸蒸馏水稀释至刻度，得供试品溶液及内标溶液。取0.1 ml空白小鼠全血，分别加入0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 ml乙醇标准溶液，均加入内标溶液1.0 ml，分别滴加重蒸馏水至顶空瓶刻度，以乙醇与内标峰面积之比Y与浓度X进行线性回归计算，得回归方程:Y=0.1232X+3.1268×10-3，r=0.9994，线性范围为1.58～15.79 mg/ml。取0.1 ml经肝素处理的待测小鼠全血至顶部具塞的顶空管中，精密加入内标溶液1.0 ml，滴加重蒸馏水至顶空瓶刻度，于80℃水浴中加热20 min。用微量注射器抽取100 ul顶端空气进样测定［15］。代入回归方程求得每组10只小鼠血液中乙醇含量，对照3组实验小鼠血液中乙醇含量，确定酒前饮用解酒口服液最佳时间。

2 结果

2.1 分别将0.1、0.2、0.3 g/ml的大枣提取液、四药材混合液及蜂蜜按正交试验L9(34)配得9种复方药液。然后进行小鼠醉酒试验，计数每组醉酒数量、出现醉酒状态平均醉酒时间、平均醒酒时间，通过正交试验得出均值和极差［16］。从极差分析可以看出，试验所设三个因素对醉酒小鼠解酒的影响顺序是:1＞3＞2，即大枣提取液占主要解酒作用。从均值看，以大枣提取液:四药材混合液:蜂蜜为100 ml(0.2 g/ml)、100 ml(0.2 g/ml)、9 ml组合最佳，见表1。

表2 三种组分的正交试验L9(34)及9种复方药液

2.2 进行小鼠醉酒翻正试验，计数每组醉酒动物数、出现醉酒状态平均时间、平均醒酒时间等指标也可进一步证明以大枣提取液:四药材混合液:蜂蜜为100ml(0.2g/ml)、100ml(0.2g/ml)、9ml配成的解酒口服液使小鼠醉酒时间延长，醒酒时间缩短。试验证明可达最佳解酒效果的组合为大枣提取液:四药材混合液:蜂蜜为100ml(0.2g/ml):100ml(0.2g/ml):9ml，见表 2。

表3 小鼠醉酒试验指标

2.3 乙醇代谢过程:乙醇+NDA+NADH+H++乙醛，测得ADH(乙醇脱氢酶)吸光度，即可反映ADH活性，ADH活性越高，乙醇代谢越快，解酒效果越好。将分好的6组小鼠分别设空白清水组、先水后酒组、先口服液后酒组、口服液酒合用组、先酒后水组、先酒后口服液组。可观察出先口服液后酒组，测得小鼠血液中ADH吸光度最高，在0.824左右，即ADH活性最高，乙醇代谢最快，解酒效果最佳，见图1。

图1 给口服液、酒先后对血液中ADH活性的影响

2.4 酒前15 min、30 min、45 min按小鼠体重0.1 ml/10g灌胃大枣解酒口服液，然后灌胃白酒0.1 ml/10g，30 min后取血。通过顶空气相色谱法测血液中乙醇的含量，三组试验小鼠血液中乙醇分别在0.354 mg/ml、0.548 mg/ml、0.723 mg/ml左右。所以可知酒前30 min灌胃大枣解酒口服液的血液中乙醇含量最低，解酒效果最佳，见图2。

图2 酒前梯度时间灌胃大枣解酒口服液血液中乙醇指标的变化

3 讨论

酒文化是一种特殊的文化形式，在传统的中国文化中有其独特的地位。但若过量饮酒，酒精及其代谢产物对人体造成一定的伤害，引起多种疾病及不良的社会行为。随着生活水平的提高，人们也越来越关注自身的健康，所以解酒产品备受关注。我国中草药解酒药物利用已有很长的历史，积累了丰富的经验，为此项试验研究提供了丰富依据。本项试验先通过正交试验和小鼠醉酒试验确定各组分最佳配比;然后进行酒前、酒后灌口服液，测定ADH活性，确定最佳用法;最后进行梯度时间试验，确定最佳用口服液时间。

本课题通过小鼠醉酒试验，得每组醉酒数量、出现醉酒状态平均醉酒时间、平均醒酒时间，通过正交试验得出均值和极差。研究显示大枣提取液、四药材混合液、蜂蜜为100 ml(0.2g/ml)、100 ml(0.2g/ml)、9 ml组合配方，可延长小鼠出现醉酒状态时间，缩短醒酒时间，为最佳配方。因为酒精在人体中代谢过程为乙醇经乙醇脱氢酶脱氢为乙醛，然后乙醛脱氢经乙醛脱氢酶脱氢为乙酸。所以将酒前服用、酒后服用口服液以及空白组、对照组小鼠，用紫外分光法测得血液中ADH(乙醇脱氢酶)的活性，即可反映得知乙醇在血液中的代谢情况。研究表明，先口服液后酒组，ADH吸光度最高，可知乙醇代谢最快，此用法可增强肝组织中ADH的活性，提示乙醇可在体内快速代谢而发挥一定的高效解酒作用。实验用顶空气相色谱法测酒前梯度时间灌胃大枣解酒口服液小鼠血液中乙醇含量。得知酒前30min饮用泰山大枣解酒口服液后饮酒，可加速血液中乙醇的分解，降低血液中乙醇的含量，可快速有效的解酒，研究中未见明显不良反应。

研究结果表明酒前30 min服用该解酒口服液可达到最佳解酒效果。而且产品以泰山大枣为主料，泰山大枣享有“王母枣”、“昆仑枣”、“仙人枣”等美名，更容易让使用者接受和宣传。因此以泰山大枣为主料，以枳椇子、茯苓、马齿苋、葛根、蜂蜜等药食同源物质为辅料配制一种天然的解酒口服液，具有较好的解酒效果，无毒副作用，有较好的市场和发展前景。

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