高血压患者血清肌球蛋白重链14、干扰素调节因子－4、热休克蛋白70 及热休克蛋白22 mRNA 的表达及阿托伐他汀干预研究

沙 莎，陈月云，钟 民，李 劲，王安才，王 星

原发性高血压(essential hypertension，EH)是引起各种心脏血管疾病的主要危险因素之一。炎症因子是一类由免疫细胞及非免疫细胞分泌，参与细胞的生长、分化、修复和免疫过程。希腊ATTICA 研究显示，与正常血压组相比较，高血压前期组患者血液中C 反应蛋白 (CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF－α)、同型半胱氨酸等与动脉粥样硬化相关的一些氧化应激标志物和炎症标志物水平显著增高［1］。他汀类药物能够降低血脂水平，具有快速增强内皮细胞功能，稳定动脉粥样斑块的作用，然而对高血压患者心脏重构的影响及作用机制尚不明确。本研究通过观察高血压患者血清球蛋白重链14(MHC14)、干扰素调节因子－4 (IRF －4)、热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白22 (HSP22)mRNA 表达及左室结构与功能的变化，旨在探讨EH 的发病机制及阿托伐他汀的调脂外作用。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选择我院门诊2011 年首次就诊的高血压患者60 例，均符合《中国高血压防治指南2010》［2］诊断标准，并排除继发性高血压，肝、肾、内分泌疾病及感染性疾病。选择同期来我院体检的健康志愿者22 例。本试验通过皖南医学院附属弋矶山医院伦理委员会批准。所有受试者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 分组 将符合条件的高血压患者作为高血压组(n =60);再将高血压组随机分为:常规降压组(n =30):给予常规降压(根据患者血压水平及检查指标选择适合降压药);常规降压+他汀组(n =30):除根据同样原则选择降压药外，每晚睡前口服阿托伐他汀(商品名:立普妥，辉瑞制药有限公司生产)20mg，疗程均为24 周;将健康体检者作为对照组(n=22)。

1.2.2 反转录聚合酶链反应(RT－PCR) 取由临床采集患者肝素抗凝血样2ml，采用Trizol 一步法提取总RNA，反转录成cDNA。取2μg 总RNA 作为模板，oligo (dT)作引物，反转录酶为AMV，反应体系为50 μl。PCR 反应条件(见表1)。各反应条件均经过优化，使5 个指标的循环次数均处于线性期内。配制1%琼脂糖凝胶，加入终浓度为0.5 μg/ml 的溴化乙锭(EB);取5μl PCR 终产物及DNA marker，以1 ×TAE 为缓冲液，电压80V，电泳20min，采用Tanon 凝胶成像与分析系统ImageSystem Ver 4.0 测定扩增产物条带平均光密度值。结果以目的基因mRNA 与3 磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA的比值表示，进行半定量比较。引物均由上海生工合成，RT－PCR试剂购自上海申能博彩生物科技有限公司。

表1 PCR 反应条件Table 1 PCR reaction conditions

1.3 监测指标 监测用药前及用药后8 周、16 周、24 周两组肝功能、肾功能及肌酸激酶的变化(以明确用药后有无明显的肝肾损害及肌病等不良反应)。使用iE33 彩色多普勒超声诊断仪分别测定两组治疗前后左室内径(LV)、左室后壁厚度(LVPW)、左室射血分数(LVEF)、左房室瓣舒张期血流频谱(E/A)。

1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0 统计软件进行统计分析，计量资料以(±s)表示，组间比较采用t 检验，计数资料采用χ2检验，相关性研究采用直线相关分析，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基本资料比较 常规降压组和常规降压+他汀组性别、年龄、体质指数(BMI)、高血压病程、吸烟、饮酒、血压、血脂及治疗期间使用降压药种类比较，差异均无统计学意义(P ＜0.05，见表2)。

2.2 两组治疗前后血压、血脂及心脏结构功能指标比较 治疗前两组患者血压、血脂及心脏结构功能指标比较，差异均无统计学意义 (P ＞0.05)。治疗24 周后，两组三酰甘油、LVPW、LVEF 比较，差异均有统计学意义(P ＜0.05);而血压、LV、E/A 比较。差异均无统计学意义(P ＞0.05，见表3)。

表2 两组基本资料比较Table 2 Comparison of basic information between two groups

表3 两组治疗前后血压、血脂及心脏结构功能指标比较(±s)Table 3 Comparison of blood pressure，blood lipid and cardiac structure and function index between two groups before and after treatment

表3 两组治疗前后血压、血脂及心脏结构功能指标比较(±s)Table 3 Comparison of blood pressure，blood lipid and cardiac structure and function index between two groups before and after treatment

注:LV:左室内径;LVPW:左室后壁厚度;LVEF:左室射血分数;E/A:左房室瓣舒张期血流频谱

组别 例数 收缩压(mmHg)治疗前治疗后常规降压组 30 155±13 132±7 96±12 75±7 2.5±0.5 2.4±0.8 48.3±4.1 47.6±4.1 8.9±1.3 8.8±1.4 57.0±4.3 58.0治疗后舒张压(mmHg)治疗前治疗后三酰甘油(mmol/L)治疗前治疗后LV(mm)治疗前治疗后LVPW(mm)治疗前治疗后LVEF(%)治疗前治疗后E/A治疗前±4.3 0.52±0.15 0.58±0.11常规降压+他汀组 30 156±13 129±6 96±12 72±7 2.4±0.6 2.0±0.7 47.2±4.1 46.3±4.1 8.7±1.3 8.0±1.3 55.0±4.4 61.0±4.3 0.56±0.16 0.63±0.14

2.3 各组患者血清MHC14、IRF －4、HSP70、HSP22 mRNA表达 高血压组血清MHC14、IRF －4、HSP70、HSP22 mRNA表达与对照组比较，差异有统计学意义(P ＜0.01)。24 周后，常规降压+他汀组血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表达与常规降压组比较，差异有统计学意义(P ＜0.05，见图1、2)。

2.4 血清MHC14、IRF －4、HSP70、HSP22 mRNA 表达与心脏结构和功能相关性分析 24 周后，常规降压+他汀组血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表达与LVPW 呈正相关(r 分别为0.386、0.429、0.571、0.607，P ＜0.05)，与LVEF 呈 负 相 关 (r 分 别 为－ 0.415、 － 0.393、 － 0.528、－0.497，P ＜0.05，见图3)。

图1 mRNA 表达电泳图谱Figure 1 The electrophoresis of mRNA expression

图2 各组(MHC14，IRF－4，HSP70，HSP22)/GAPDHFigure 2 (MHC14，IRF－4，HSP70，HSP22)/GAPDH in each group

图3 (MHC14，IRF－4，HSP70，HSP22)/GAPDH 与LVPW、LVEF的相关性分析Figure 3 The correlation analysis of (MHC14，IRF － 4，HSP70，HSP22)/GAPDH and LVPW，LVEF

3 讨论

相关研究表明，EH 是一种低度全身性炎性反应状态(low－grand systemic imflammation condition)，表现为炎性细胞因子产生异常和炎性信号通路的激活［3］。已证实超敏C 反应蛋白(hs－CRP)、白介素1 (IL －1)、TNF －α 等炎性因子可通过细胞毒作用，破坏血管内皮细胞结构和功能的完整性，导致血管重构阻力增加，引起血压增高。Trytko 等［4］发现CRP 水平增高与左心室质量指数(left ventricular mass index，LVMI)增高密切相关，检测患者CRP 水平有助于评估左心室肥厚(left ventricular hypertrophy，LVH)。EH 患 者hs － CRP、IL－1、TNF－α 水平与动脉血管僵硬度、冠状动脉舒张功能障碍、LVH 及尿微量清蛋白呈正相关［5－8］。

MHC 是将储存在ATP 中的化学能转化为机械能的分子马达，与信号传导、肌肉收缩、趋化性迁移和细胞形状的改变等有关［9］。老年人单核细胞肌球蛋白减少，可能影响到免疫细胞的许多功能［10］。

IRF 是一类多功能的转录因子，在干扰素转录调控，病原体免疫反应，细胞因子信号转导，细胞增殖调控以及造血干细胞的发育、淋巴细胞的分化，先天性免疫和适应性免疫调控等方面都起着重要的作用。IRF －4 结合蛋白(IRF －4 binding protein，IBP)是一个新发现的与Th 活化及Th2 极性分化相关的分子，为自身免疫调控性疾病的研究提供了新的线索。

HSP 分为很多亚组，在心血管组织中高度表达，通过稳定细胞内变性的蛋白质、减轻细胞内的离子紊乱、保护血管内皮细胞的功能、干扰应激所启动的细胞凋亡程序等方面来发挥作用，作为一重要的抗原被免疫系统识别，触发自身免疫反应，参与EH 的发生和发展。

本研究发现高血压组与对照组相比，血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表达均有不同程度升高，推测这可能与免疫炎性损伤参与高血压的发生发展相关，因此积极控制血压亦是对自身免疫反应的保护性调控。

他汀类作为调脂药物，其调脂以外的心血管保护作用近年来日益受到重视。人们从大量的临床和动物实验中发现，使用他汀类药物治疗有利于血压的控制［11］，使收缩压及舒张压均明显下降［12］。李凌等［13］研究发现阿托伐他汀可部分预防EH左心室重构，其机制可能与诱导心肌细胞凋亡、抑制心肌结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达有关。张雪娟等［14］研究表明阿托伐他汀可以防止压力负荷增大导致的心肌肥厚，这种保护作用可能与抑制白介素18 (IL－18)，心肌营养素1 (CT－1)等炎性因子的表达有关，其抗心肌肥厚作用可能是通过抑制炎症反应实现的，因此使用他汀类药物对高血压早期干预，可望减轻高血压LVH 和对心功能改善起一定作用。

本研究结果发现，治疗24 周后与常规治疗组相比，他汀治疗组血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 表达均有不同程度降低，且与LVPW 呈正相关，与LVEF 呈负相关。这与上述阿托伐他汀通过抑制免疫炎症损伤，改善高血压患者心室重构及功能结论一致。

目前炎症过程导致EH 的病因仍不清楚，更多炎症因子与EH 之间的关系也需要进一步的探讨。更好地认识EH 的炎症机制，有助于研究与制定更好的治疗策略，以减少EH 的发病率、病死率，并且预防以及延缓EH 患者的靶器官损害。监测血清MHC14、IRF－4、HSP70、HSP22 mRNA 等相关炎性指标对高血压进行积极干预，可能为血压控制、靶器官保护以及心脏结构及功能的改善提供理论依据。

申明:本研究与药品提供公司无利害关系。

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4 Trytko BE，Bennett M． Hyperbaric oxygen therapy． Complication rates are much lower than author suggest ［J］． BMJ，1999，318 (7190):1077 －1078．

5 Mahmud A，Feely J． Arterial stiffness is relate to systemtical inflammation in essential hypertension ［J］． Hypertension，2005，46 (5):1118 －1122．

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