木瓜黄精膏对衰老模型小鼠体内抗氧化的作用

郭芙莲 王秀霞 周媛媛 于会丰

（漯河医学高等专科学校，河南 漯河 462002）

木瓜黄精膏对衰老模型小鼠体内抗氧化的作用

郭芙莲 王秀霞 周媛媛 于会丰

（漯河医学高等专科学校，河南 漯河 462002）

目的 探讨木瓜黄精膏（PRO）对衰老模型小鼠组织匀浆中MDA的含量及SOD活性的影响。方法 采用D-半乳糖注射造成衰老模型，同时给予不同剂量的PRO。40日后检测小鼠组织匀浆中SOD活性、MDA含量。结果 PRO可显著提高小鼠组织匀浆中SOD的活性，显著降低MDA含量，与衰老模型组相比较有显著性差异（P＜0.01）。结论 PRO具有较好的体内抗氧化作用。

木瓜黄精膏；抗氧化；SOD；MDA

衰老的主要原因之一是机体在进行氧化代谢的同时，不断地产生自由基，过剩的自由基可作用于血液、细胞、组织等脂类物质，使其变成脂质过氧化物，这些过氧化物沉积在细胞膜上，使细胞膜丧失功能，造成细胞活力下降，组织器官功能衰退，机体进入衰老状态。衰老实际就是细胞凋亡的过程[1]，凋亡细胞内的ROS生成增加，与此同时消除能力下降，而自由基能和DNA、脂质体等发生反应，从而引起DNA链断裂和脂质过氧化等[2]，线粒体的功能发生紊乱进一步使ROS的生成增多，进一步升高细胞内的脂类过氧化水平而导致机体衰老，所以维持体内自由基清除剂水平的或适当水平抗氧化剂能够推迟衰老、延长寿命。研究表明[3]，木瓜黄精膏（PRO）可以降低衰老模型小鼠血清MDA含量、提高SOD活性，本实验进一步观察PRO对衰老模型小鼠组织匀浆MDA含量及SOD活性的影响，进一步探讨其抗氧化作用，为解决一些老年性疾病及衰老问题提供参考。现报道如下。

表1 PRO对衰老模型小鼠组织匀浆中的MDA含量的影响（nmol/mg，n=10，）

表1 PRO对衰老模型小鼠组织匀浆中的MDA含量的影响（nmol/mg，n=10，）

*P＜0.05；**P＜0.01，与模型对照组比较

组别脑匀浆心匀浆肝匀浆肾匀浆空白对照13.244±0.67215.655±1.2045.144±0.3702.439±0.215模型对照15.292±0.34815.663±0.3346.889±0.4012.754±0.135 PRO小剂量12.945±1.08215.104±0.5454.896±0.401**2.308±0.137 PRO中剂量11.466±0.675**15.724±0.2954.581±0.137**2.195±0.093* PRO大剂量9.812±0. 184**14.291±0.099*3.365±0.217**1.716±0.109**

表2 PRO对衰老模型小鼠组织匀浆中的SOD活性的影响（nmol/mg，n=10，）

表2 PRO对衰老模型小鼠组织匀浆中的SOD活性的影响（nmol/mg，n=10，）

*P＜0.05，**P＜0.01，与模型对照组比较

组别脑匀浆心匀浆肝匀浆肾匀浆空白对照47.699±2.57439.667±2.00941.841±1.28151. 645±0.829模型对照42. 039±0.86336.528±1.38438.404±0.80949.319±0.568 PRO小剂量52. 071±0.987*43.224±1.41549.326±3.086 51.383±1.175* PRO中剂量64. 900±1.131**48 999±2.877**61.079±1.859**60.359±1.157* PRO大剂量72. 562±1.116**59. 788±1.493**67.303±2.270**67.631±0.357**

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级昆明种小白鼠50只，体质量（23±2）g，雌雄各半，购自郑州大学实验动物中心。

1.2 中药及制备

所有的中药均从郑州药材公司获得，由漯河医学高等专科学校生药教研室鉴定。将木瓜、黄精、大枣、荷叶等中药按照比例委托漯河市中医院制剂室制备，将制备好的药膏放于生理盐水中制成混悬液，分装成3份，将生药浓度分别浓缩为5g/mL、3g/mL、2.5g/mL。把配置好的药液经过高压灭菌后放置于4℃冰箱保存备用。

1.3 主要试剂

D-半乳糖（上海试剂二厂），MDA试剂盒、SOD试剂盒（南京建成生物工程研究所），其余试剂都为国产分析纯。

1.4 仪器

721-分光光度计（上海第三分析仪器厂），TGL240B离心机（上海安亭科学仪器厂产品，常温冰箱（BCD-312KA 新乡），BL3100型（精确度0.1 g）和BP221S型（精确度0.1 mg）电子天平，移液器（GILSON 法国），超纯水仪（Milli-Qacademic 美国）。

1.5 实验方法

1.5.1 分组及给药

昆明种小鼠，置于室温（22±2）℃的动物房中自由进食水，适应性喂养1周后将小鼠随机分成5组，即空白组、模型组、PRO大、中、小剂量组，每组10只，雌雄各半。空白组颈后皮下注射0.5mL生理盐水。其他各组每只皮下注射5%D-半乳糖0.5mL，每日1次，连用30d，造出衰老模型[4]。造模成功之后，空白对照组和模型对照组每只灌服等容积生理盐水0.5mL；PRO大、中、小剂量组分别按30g/（kg· d）、15g/（kg·d）、7.5g/（kg·d）剂量灌服中药；连续给药40日。

1.5.2 标本制备及检测

40日后处死小白鼠，取脑、心、肝、肾，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，以上器官的组织各取0.2 g与生理盐水按照1∶9制成10 g/100 mL匀浆，4000 r/min取上清待测，SOD、MDA含量的测定严格按照试剂盒标注方法进行各种试剂的配制，其步骤严格按照操作规程进行，应用分光光度仪0.5cm光径，550nm，运用分光光度仪比色的方法对各管吸光度值进行检测。

1.6 数据处理及统计分析

采用Excel 2003录入和管理数据。 数据资料用均值±标准差（）表示，用SPSS 10.0软件统计分析，实验结果用χ2检验。

2 结 果

2.1 PRO对衰老模型小鼠组织匀浆MDA的影响。模型对照组与空白对照组比较，小鼠组织匀浆中MDA含量均显著升高，造模成功；而PRO大、中剂量组小鼠组织匀浆中MDA含量显著降低，与衰老模型组相比有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01），表明PRO可以有效地减少小鼠体内MDA的含量，并且有一定的量效关系，结果见表1。

2.2 PRO对衰老模型小鼠组织匀浆SOD的影响。模型对照组与空白对照组比较，小鼠组织匀浆中SOD含量均减少，造模成功；各剂量组小鼠组织匀浆中SOD活性均显著升高（P＜0.05或P＜0.01），提示PRO可以提高小鼠组织匀浆中SOD活性，大剂量组尤为明显（结果见表2）。

3 讨 论

氧自由基是一类可与生物膜脂质、蛋白质、酶、DNA等重要生物大分子相互作用，并引起机体损伤的物质。过量的自由基会引发机体产生一系列疾病，如：动脉硬化、糖尿病、风湿病、心血管及大脑的局部缺血性损伤等。人体的绝大部分生理作用都需要氧气的参与，生物学上称“氧化还原反应”，除了正常的氧化还原反应产生活性氧外，其他如环境污染、紫外线等外界刺激，也可导致体内氧自由基过剩。自由基的氧化作用能破坏细胞中的遗传基因，损害免疫功能。自由基的不断氧化是机体衰老和发生众多疾病的重大原因。因此，对抗自由基的氧化作用，就成为延缓衰老、改善亚健康的重要方法。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一种生命体内的活性物质，它能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质，是生物体内清除自由基的首要物质[5]。氧自由基清除剂SOD能够使有毒的O2-和H2O2经过歧化和还原后得到清除，从而阻止它们引起自由基的一系列链锁反应而降低代谢产物MDA的生成，所以，SOD活性的大小能够作为机体抵抗衰老的一项非常重要的指标，也可将MDA作为抗氧化、抗衰老的另一项指标。还有研究表明，木瓜能够清除超氧阴离子自由基、1，1-二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH·）、羟自由基，并且木瓜的提取物对于小鼠血清中的MDA有抑制作用，同时增强SOD活性[6]。光皮木瓜提取物中的多酚类物质含量较高并有较强的抗氧化活性[7]。黄精的抗衰老作用机理[8]主要是促进蛋白质的合成、减少细胞内代谢废物的含量、对抗自由基的损伤及相关酶的影响以及促进能量生成等。马凤巧等[9]研究了黄精对衰老大鼠海马组织SOD活性及MDA含量影响，结果显示，明显提高大鼠海马组织中SOD活性，降低MDA含量。王玉勤[10]等研究表明PSP能明显降低大鼠血清、骨骼肌MDA含量，提高大鼠血清内源性SOD和GSH- Px的活性及骨骼肌内源性SOD活性。另有研究表明，荷叶生物碱盐高剂量组可有效降低肝脏组织匀浆及血清的MDA含量，同时降低肝脏的TG、TC指标[11]。冯峰等研究表明荷叶提取物对DPPH有较强的清除作用，具有较强的抗氧化作用。由此得出结论，荷叶的提取物是一种很好的抗氧化剂，即使在较低的浓度和不需要特别精制的情况下也能够显示出比较强的抗氧化能力。上述研究都是单纯地采用木瓜、荷叶或黄精等其中一种中药对MDA或SOD以及抗氧化等作用的实验研究。

本研究采用木瓜、黄精、荷叶、大枣四味中药组方，木瓜养颜美容、健脾和胃；黄精益气补脾、润肺滋肾；荷叶抗衰老、解毒；大枣不仅营养丰富，而且药用价值也很高，民间有“一日吃三枣，终生不显老”的说法。四药合用对衰老模型小鼠组织匀浆SOD、MDA的进行测定，结果显示，模型对照组与空白对照组比较，小鼠组织匀浆中SOD活性降低，MDA含量升高，说明造模成功。PRO大、中剂量组小鼠组织匀浆中SOD活性显著升高，MDA含量明显降低，尤其是肝匀浆与衰老模型组相比有显著性差异（P＜0.01），PRO小剂量组小鼠肝匀浆中MDA含量显著降低，与衰老模型组相比有显著性差异（P＜0.01），实验结果表明PRO可以降低小鼠组织中MDA的含量及增强SOD活性，这可能是PRO抗衰老的原因之一。

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[2] 郭芙莲,赵健雄,白德成,等.扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌细胞(H22) DNA、RNA及自由基含量的影响[J].四川中医,2006,24(5):20-22.

[3] 郭芙莲,周媛媛,李占生.木瓜黄精膏对衰老模型小鼠血清SOD活性及MDA含量的影响[J].辽宁中医杂志,2013,40(1):168-169.

[4] 谢文杰,李林,魏海峰,等.二苯乙烯苷对D-半乳糖拟痴呆小鼠海马基因表达的影响[J].中国药理学与毒理学杂志,2005,19(1):24-28.

[5] 王军,侯秀峰.脑梗塞患者血清中SOD,MDA,HCY测定与临床意义[J].医学信息,2011,24(2):709.

[6] 胡华平,韩雅莉,张峰.木瓜提取物抗氧化性质的初步研究[J].食品科学,2008,29(6):645-648.

[7] 张婷,糜漫天,唐勇,等.光皮木瓜多酚类的提取和清除 DPPH 的抗氧化活性[J].营养学报,2007,29(5):485-489.

[8] 郑虎占,董泽宏,佘靖,等.中药现代研究与应用(第五卷)[M].北京:学苑出版社,1998:4071-4074.

[9] 马凤巧,王爱梅,欧阳静萍.黄精对衰老大鼠海马组织SOD活性及MDA含量影响的研究[J].中国现代药物应用,2010,4(2):149-150.

[10] 王玉勤,吴晓岚,张广新,等.黄精多糖对大鼠抗氧化作用的实验研究[J].中国现代医生,2011,49(5):6-11.

[11] 阎娜.荷叶生物碱盐的提取、纯化及功效的研究[D].南昌:南昌大学,2012:41-44.

R285.5

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1671-8194（2013）22-0081-03

河南省教育厅自然科学项目（No：2009C310008）