子宫腺肌病组织中PRL-3、VEGF的表达变化及意义

郑芹林，王明明，李宗恒

(泸州医学院附属医院，四川泸州646000)

子宫腺肌病(AM)是一种常见妇科病，其虽为良性病变，却有类似恶性肿瘤的侵袭转移行为。目前AM的确切病因和发病机制尚不清楚，手术及药物治疗效果差。近年来“在位内膜决定论”［1］逐渐成为AM发病机制研究的新方向，即异位内膜能否在完成黏附—侵袭—血管形成这三步，在位内膜是关键，后者的黏附性、侵袭性增强和血管生成才是AM的主要原因，同时该过程的发生需要多种细胞因子、转移因子、生长因子的协同作用。促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)作为临床诊断恶性肿瘤浸润转移的标志物［2］;血管内皮生成因子(VEGF)有促内皮增殖、促血管生成作用，是目前发现的最重要的血管生成因子［3］。本研究采用免疫组化法检测了PRL-3、VEGF在AM患者异位内膜、在位内膜和正常子宫内膜中的表达，观察二者在AM发生发展中的作用及相互关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 异位内膜(异位组)、在位内膜组织(在位组)和正常子宫内膜组织(对照组)均随机取自我院妇产科2012年2月～2013年2月行开腹或腹腔镜手术的患者。其中AM患者30例，年龄35～50(43.52±6.35)岁，取其异位内膜及在位内膜，包括增生期16例，分泌期14例;正常子宫内膜组织30例取自同一时期因子宫肌瘤行子宫切除术的患者，年龄30～53(42.05±5.74)岁，所取组织为非瘤区内膜组织且不合并子宫内膜异位症，增生期12例，分泌期18例。所有患者术前半年均无抗AM药物治疗史及激素治疗史。

1.2 主要试剂 鼠抗人PRL-3单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，兔抗人VEGF单克隆抗体(北京中杉金桥生物工程有限公司)，兔二步法免疫组化检测试剂盒(PV-6001，北京中杉金桥生物工程有限公司)，通用型二步法免疫组化检测试剂盒(PV-6000，北京中杉金桥生物工程有限公司)。

1.3 PRL-3、VEGF表达检测 采用二步法免疫组化检测试剂盒测定各组子宫内膜组织中的PRL-3、VEGF。采用Image Pro6.0专业图像分析系统，每张切片随机选取5个视野测量阳性细胞平均光密度(MOD)值，每个视野测定3次后取均值，以OD值作为相对表达量。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件行统计分析，计数资料以¯x±s表示，两样本均数比较用t检验，多样本均数比较用方差分析，相关性分析用Pearson相关分析法。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组 PRL-3、VEGF的表达比较 PRL-3及VEGF表达异位组 ＞在位组 ＞对照组(P均 ＜0.05)。见表1。

表1 三组PRL-3、VEGF的相对表达量比较(¯x±s)

2.2 PRL-3、VEGF在各组月经周期不同时相子宫内膜组织的表达比较 异位组、在位组增生期与分泌期内膜中PRL-3的表达均高于同时相对照组(P均＜0.05)。对照组中VEGF在分泌期内膜中的表达高于增生期(P＜0.05)。见表2。

表2 各组月经周期不同时相子宫内膜中的PRL-3、VEGF相对表达量比较(¯x±s)

2.3 VEGF与PRL-3表达的相关性 在位组VEGF与 PRL-3表达呈正相关关系(r=0.439，P ＜0.05)，二者在异位组及对照组中的表达未发现相关性(P均 ＞0.05)。见图 1、2。

图1 在位组PRL-3与VEGF相关性分析散点图

图2 对照组PRL-3与VEGF相关性分析散点图

3 讨论

PRL是一个新发现的基因，可通过激活细胞内的Rho、MAPK信号通路使细胞增殖和分化，提高浸润转移能力，PRL-3过表达于细胞则表现出细胞运动能力增加和体外侵袭能力增强，可调节肿瘤细胞与细胞外基质的黏附［4］。目前研究发现，PRL-3过表达与多种肿瘤的转移有关，其可促进细胞迁移和侵袭。有研究发现转染PRL-3基因的中国仓鼠卵巢癌细胞的浸润、侵袭、转移能力显著提高，如果PRL-3失活则不引起明显的转移［5］。目前已发现PRL-3在胃癌、卵巢癌、结直肠癌、肝癌的发生、侵袭、转移中起重要作用。PRL-3作为临床诊断肿瘤浸润的标志物，其具体作用机制尚不明确［6］。已有研究显示PRL-3与子宫内膜异位症异位内膜的浸润有关［7］。

本研究结果显示，异位组中PRL-3的表达高于在位组和对照组，提示PRL-3的高表达可能与AM异位内膜的浸润转移有关。PRL-3可能通过激活一系列信号通路增强内膜细胞的增殖分化能力和浸润转移能力，导致子宫内膜在肌层种植、生长、浸润、转移。在位组PRL-3的表达高于对照组则说明AM在位内膜组织已与正常子宫内膜有不同的生物学特征，即更容易发生浸润、转移的特征，易于在卵巢、腹膜等处浸润、种植生长。

VEGF是目前己知最强的直接而特异作用于血管内皮细胞的生长因子，被认为是介导内膜血管生成的重要因子［8］，在血管形成过程中起着重要调控作用。它能特异地与其受体结合，刺激第二信使的形成，促使细胞变形、迁移、增殖及分裂，并增加微血管通透性［9］。现已证实VEGF及其家族成员在生理与病理的血管生成过程中都是必不可少的诱导因子［10］，它可通过旁分泌机制刺激血管内皮细胞增生、异位和结构形成，具有强大的促内皮增殖、促血管生成作用。已有研究表明VEGF可以促进异位内膜及其周围血管生成并维持其活性，加速异位内膜的种植和增殖［11］。本研究中对照组、在位组、异位组VEGF的表达逐渐增强。这说明AM患者在位及异位内膜可能具有更强的促血管生成活性，此种内膜碎片随经血逆流至异地后更容易促进新生血管的形成，以获得充分的血液供应而存活。与Hur等的研究结果一致［12］。VEGF在正常月经周期中受雌孕激素调节，而在异位内膜中其表达失调，因此异位组和在位组VEGF在增生期及分泌期内膜的表达无规律。

本研究结果表明，PRL-3、VEGF在AM的形成中可能存在某些相互关系。各种细胞外信号传递至细胞内主要依靠MAPK通路介导［13］。研究发现，MAPK表达异常在细胞恶变和浸润转移过程中起重要作用。MAPK通路包括 ERK1/2 MAPK、JNK/SAPK MAPK、p38MAPK、BMK1/ERK5四条通路。有研究显示［14］PRL-3可通过提高下游 ERK1/2、p130CaS、STAT3等的磷酸化水平从而开启多条下游信号通路。在AM形成中，PRL-3可能通过与特定蛋白结合增强MAPK通路表达从而上调VEGF表达，诱导新血管生成，而VEGF也可通过一些途径上调PRL-3表达，其具体机制还需进一步研究。

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