视明颗粒中的药材鉴别

张 昀，胡海廷，李 钦

（河南大学 药学院，河南 开封 475004）

视明颗粒剂由柴胡、木贼、羌活、防风、甘草等13味中药组成，有活血理气、疏肝明目的功效。该制剂成分干扰大，质量控制非常不易，处方中的药材鉴别未见报道。为适应我国中药现代化的要求，我们对该颗粒剂中的全部药材进行了鉴别研究，填补了该处方质量控制中定性鉴别的空白。

1 仪器及试药

1.1 仪器

KQ－300VDE超声提取器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

丹参酮ⅡA 对照品（中国药品生物制品检定所，批号110766－200714）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110736－200722）；其余试剂均为分析纯；样品自制。

2 方法与结果

选择主要有效成分对制剂中苍术、丹参、赤芍、柴胡、木贼、羌活、防风、橘红、生地、白术、怀牛膝、菟丝子、甘草进行检识［1－5］，照薄层色谱法（2010版药典一部附录ⅥB）进行实验。

2.1 羌活

取样品10g，研细，置250mL 圆底烧瓶中，加水100mL，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，在提取柱下端预先放置5mL石油醚，加热回流6h，将石油醚部分取出，浓缩至1mL，作为供试品溶液。取羌活对照药材粉末1g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得羌活空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯（7∶3）为展开剂，质量分数为5%香草醛硫酸试液为显色剂，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm 下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图1。

2.2 柴胡

取样品10g，加水30mL，超声10min，用乙醚萃取2次，每次20mL，弃去乙醚液，用饱和浓度的正丁醇萃取2次，每次20mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，加1mL甲醇溶解，即为供试品溶液。取柴胡对照药材粉末0.5g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得柴胡空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯－甲醇－水（8∶2∶1）为展开剂，质量分数为2%对二甲氨基苯甲醛与体积分数为40%硫酸溶液的混合液为显色剂，60℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm 下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图2。

2.3 苍术

取样品10g，研细，置250mL圆底烧瓶中，加水100mL，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，在提取柱下端预先放置5 mL 乙醚，加热回流6h，将乙醚部分取出，挥干乙醚，残渣加乙酸乙酯1mL 溶解，作为供试品溶液。取苍术对照药材粉末1g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得苍术空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（20∶1）为展开剂，质量分数为5%对二甲氨基苯甲醛与体积分数为10%硫酸溶液的混合液为显色剂，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一相同的污绿色主斑点（苍术素）；阴性对照色谱上无干扰。结果见图3。

2.4 橘红

取样品10g，研细，加甲醇20mL，超声30min，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液。取橘红对照药材粉末1g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得橘红空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一用5g／L 氢氧化钠溶液制备的硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯－甲醇－水（100∶17∶10）为展开剂，展开约3cm，取出，晾干，再以甲苯－乙酸乙酯－甲酸－水（20∶10∶1∶1）的上层溶液为展开剂，三氯化铝试液为显色剂，置紫外光灯365nm 下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图4。

图1 羌活定性鉴别图

图2 柴胡定性鉴别图

图3 苍术定性鉴别图

图4 橘红

2.5 防风

取样品15g，研细，加丙酮30mL，超声30min，滤过，滤液浓缩至干，残渣加无水乙醇1mL溶解，作为供试品溶液。取防风对照药材粉末1.5g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得防风空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷－甲醇（4∶1）为展开剂，置紫外光灯254nm 下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图5。

2.6 丹参

取样品15g，研细，加乙醚30 mL，振摇，放置1h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1mL 溶解，作为供试品溶液。取丹参对照药材粉末1g，加乙醚5mL，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得丹参空白颗粒，同法制成阴性对照液。取丹参酮ⅡA 对照品，加乙酸乙酯制成2g／L 丹参酮ⅡA 对照品溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以苯－乙酸乙酯（19∶1）为展开剂。供试品色谱中，对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；与对照品色谱相应位置上，显相同暗红色的斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图6。

2.7 赤芍

取样品20g，研细，加乙醚30mL，超声10min，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇超声30min，提取2次，每次30mL，滤过，滤液蒸干，残渣加水30mL 溶解，用饱和浓度的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，加氨试液5mL洗涤。用饱和浓度的正丁醇洗涤2次，每次15mL，取正丁醇液，蒸干，残渣加无水乙醇1mL溶解，拌入中性氧化铝2g，水浴蒸干。上中性氧化铝柱（100～200 目，4 g，内径10～15mm），以乙酸乙酯30 mL 预洗，继以甲醇40 mL洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 mL 溶解，作为供试品溶液。取赤芍对照药材粉末1g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得赤芍空白颗粒，同法制成阴性对照液。取芍药苷对照品，加甲醇制成0.5g／L芍药苷对照品溶液，即得对照品溶液。吸取上述溶液各20μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，质量分数为5%香草醛硫酸试液为显色剂，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；与对照品色谱相应的位置上，显相同蓝紫色的斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图7。

2.8 木贼

取样品20g，加体积分数为75%甲醇50mL、盐酸2mL，加热1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL 溶解，作为供试品溶液。取木贼对照药材粉末1g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得木贼空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯－甲酸（8∶4∶0.4）为展开剂，50g／L三氯化铝乙醇溶液为显色剂，立即置紫外光灯365nm 下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图8。

图5 防风

图6 丹参

图7 赤芍

图8 木贼

2.9 菟丝子

取样品15g，加石油醚30mL，超声30min，弃去石油醚液，残渣加甲醇30mL，超声30min，滤过，滤液浓缩至干，加甲醇1 mL 溶解，作为供试品溶液。取菟丝子对照药材粉末2g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得菟丝子空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水（11∶1∶1∶1）为展开剂，三氯化铝试液为显色剂，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯254nm 下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图9。

2.10 生地

取样品10g，加乙醚30mL，超声提取10min，滤过，蒸干滤液，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。取生地对照药材粉末2g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得生地空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－氨水（8∶2∶0.2）为展开剂，质量分数为5%香草醛硫酸试液和茴香醛试液的混合液为显色剂，105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图10。

2.11 白术

取样品10g，加水50mL，超声30min，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，水浴蒸干，加1mL甲醇溶解，作为供试品溶液。取白术对照药材粉末1g，加乙醚30mL，超声10min，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得白术空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯（7∶3）为展开剂，质量分数为5%对二甲氨基苯甲醛与体积分数为10%硫酸乙醇溶液的混合液为显色剂，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图11。

图9 菟丝子

图10 生地

图11 白术

2.12 甘草

取样品20g，加乙醚40mL，超声15min，提取2次，弃去乙醚液，加甲醇50mL，超声30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水40mL 溶解，正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用饱和浓度的正丁醇洗涤3次，每次20mL，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。取甘草对照药材粉末1g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得甘草空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一用10g／L 氢氧化钠溶液制备的硅胶 G 薄层板上，以乙酸乙酯－甲酸－水（15∶3∶2）为展开剂，体积分数为10%硫酸乙醇溶液为显色剂，105℃加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯365nm 下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图12、图13。

2.13 牛膝

取样品20g，加乙醇50mL，加热回流40min，取上清液30mL，加盐酸3mL，加热回流1h，浓缩至约5mL，加水10mL，用石油醚（60～90℃）20mL提取，提取液蒸干，残渣加乙醇2 mL 溶解，作为供试品溶液。取牛膝对照药材粉末4g，同法制成对照药材溶液。按成品方法制得牛膝空白颗粒，同法制成阴性对照液。吸取上述溶液各20μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲烷－甲醇（30∶1）为展开剂，磷钼酸试液为显色剂，110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；阴性对照色谱上无干扰。结果见图14。

图12 甘草

图13 甘草

图14 牛膝

3 讨论

视明颗粒方剂药物经几十年的临床验证，疗效确切，为治疗血瘀气滞型视网膜病变的经验方。对制剂中所有成分苍术、丹参、赤芍、柴胡、木贼、羌活、防风、橘红、生地、白术、怀牛膝、菟丝子、甘草进行检识，检测方法快速、简便、重视性好。其中，赤芍的薄层鉴别采用中性氧化铝柱，除去样品中黄酮类成分的背景干扰，色谱图更清晰准确。对柴胡、菟丝子、生地干扰成分多的鉴别，摸索出了合适的色谱系统，分离效果好。

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