犬的部分器官切片的制备

黄金波

（江苏省新沂市动物卫生监督所 221400）

犬的部分器官切片的制备

黄金波

（江苏省新沂市动物卫生监督所 221400）

犬做为实验动物，目前已被广泛应用于药物试验、毒理学、分子生物学和免疫学，功能与疾病、动物模型等领域的研究。因此研究正常犬的肝脏与肾脏的组织结构能够为临床诊治患病犬、为临床给药的药效学研究提供基本组织学依据。

1 材料与方法

1.1 样品的采集与固定 新沂地区健康成年杂种犬1只，以20g/L戊巴比妥钠麻醉加颈动脉放血处死。采取肝、肾组织样品，经10 %中性福尔马林溶液固定。

1.2 仪器与试剂 光学显微镜(O1ympus)，显微成像系统(O1ympus)和组织切片机(LEICA RM2015)。试剂有福尔马林、无水乙醇、二甲苯、苏木精和伊红等。

1.3 组织切片的制备 （1）脱水与透明：将固定好的犬的肝脏与肾脏投入酒精脱水，经过70%、85%、95%I、95%II酒精各1h，100%I、100%II酒精各45min脱水，保证组织中水分脱除干净。然后入二甲苯I、二甲苯II各7min。（2）透蜡：在透蜡以前，先将蜡放入温箱内融化，温箱温度保持约55～60℃，将己经透明的组织放入二甲苯和石蜡混合液内30min，然后入纯蜡1，2杯各透蜡1h。（3）包埋：将溶好的石蜡注入包埋筐内，用镊子夹取组织放入筐的适当位置，将要切的面朝向筐的底部。轻轻移入冷水中，待石蜡全部变硬即取出，在石蜡表面贴上有标本号码的标签纸。（4）修切蜡块：剥出蜡块，将蜡块修切成正方形，将组织块以外的多余石蜡修去，在组织四周留有少许石蜡，蜡块两边必须切成平行的直线，避免切下的蜡条弯曲。（5）切片：用切片机LEICA RM2015进行切片，刀的倾斜角为30度左右；将蜡块固定在切片机上，调整刻度指针到5μm，用右手握转轮把柄，摇转切片机，左手持一毛笔托住蜡带，随着切片机的转动，轻轻把蜡带拉开，用毛笔托住蜡带，挑断后顺序放在纸上。（6）贴片、烤片：用一大烧杯盛温水，放入42℃恒温水浴锅内，将蜡片摊于水面上，蜡片受热自然张开浮游在水面上。将载玻片伸入水中把蜡片移至玻片上，拨正位置，倾去多余水滴后放入37℃温箱中烤干，经过10h后取出。（7）染色：将组织切片经过二甲苯I、二甲苯II各10min进行脱蜡，经过100%I、100%II酒精各1min，95%I、95%II酒精各2min，85%酒精1min，入蒸馏水1min。苏木素液染色液7min，流水冲洗1min，1%盐酸-乙醇1～3s，流水冲洗1～2min，蒸馏水洗1min，0.5%伊红液染色2min，蒸馏水稍洗1～2s，80%酒精1～2s，95%酒精I、95%酒精II各2min，100%I、100%II酒精各5min，二甲苯I5min，二甲苯II10min，中性树胶封片。（8）拍照：中性树胶封片后，组织切片用O1ympus显微镜观察并拍照。

2 结果

2.1 肝脏的组织结构

图1 肝组织结构×40

图2 肝组织结构×400

肝脏表面被膜极薄，被膜下毛细血管非常丰富。肝小叶间无结缔组织，小叶间分界不清。肝细胞呈多边形，核圆形，肝细胞排列较紧密，呈不规则条索状形成肝细胞索，向四周延伸，在肝细胞索(肝板)之间是血窦，肝细胞索呈弯曲、分支和吻合状态(图1)。肝内结缔组织极少，主要分布在门管区周围，门管区内含门静脉、肝动脉和胆管分支(图2)。

2.2 肾脏的组织结构

图3 肾组织结构×100

图4 肾组织结构×400

肾单位是组成肾脏的结构和功能的基本单位，肾单位包括肾小囊、肾小球和肾小管。肾小球是由毛细血管网组成的，肾小球外有肾小囊的包囊，囊腔与肾小管相通(图3，图4)。

3 讨论

3.1 组织的固定 在组织固定的过程中，应将标本于离体后，尽快浸泡于装有足够量固定液的容器中固定。固定液量应为被固定标本体积的5～10倍。切取的标本置放于容器中固定后，应尽快修整继续固定。对未能及时、充分固定的标本用于制做切片。

3.2 组织的透明与浸蜡 组织块在二甲苯中透明的时间不宜过长，组织呈现透明即可，以防组织硬、脆，尤其是肝脏的组织块在透明的过程中更应注意到这点。若组织经二甲苯透明不充分，则在之后的浸蜡过程中，蜡不容易侵入组织块内。浸蜡时间适宜，过短时浸蜡不充分，组织会过软，过长时组织硬脆。

3.3 切片的染色 在组织切片染色过程中，要不断改变时间，摸索出苏木精与伊红的停留时间，用显微镜控制细胞核的苏木素染色质量，使细胞核和细胞质颜色鲜明，对比清晰。

S852.16+2

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1007-1733(2013)02-0071-01

2012–12–07）