非小细胞肺癌组织中VEGF表达的Meta分析

钟丽娟，洪 伟，徐 萌

(1暨南大学附属第一医院，广州510632;2惠州市第六人民医院)

血管内皮生长因子(VEGF)是一种血管内皮分裂原，具有高度特异性，是目前已知作用最强的一种促血管生长因子［1］。由于VEGF对血管内皮细胞增殖、迁移和血管构建有较强的调控作用，其在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达，能否成为NSCLC早期诊断、预后判断及疗效监测的新方法，近年来已成为国内外学者研究的一大热点。但由于受研究方法、条件、统计方法及研究对象等因素的影响，同类研究质量参差不齐，研究结果不尽相同。本研究运用Meta分析方法，对国内外多个运用免疫组织化学法检测NSCLC组织中VEGF表达的文献进行分析。

1 资料与方法

1.1 文献检索 以“VEGF、NSCLC、non-small cell lung cancer”等为英文检索词，检索Cochrane Library、PubMed、SCI等数据库中2005年至今的相关文献;同时以“血管内皮生长因子、非小细胞肺癌”等中文关键词检索CNKI、万方数据、中国生物医学文献数据库等数据库;辅以手工检索。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准 ①国内外公开发表的，并提供原始数据的VEGF与NSCLC及其临床病理关系的病例对照研究。②研究对象:NSCLC组为经病理检查确诊的NSCLC患者，取材前均未经放疗或化疗;对照组为癌旁或肺部良性疾病组织。③VEGF检测方法为免疫组化法。④统计方法应用恰当，数据质量可靠，结果表达明确，可计算出比值比(OR)及95%可信区间(CI);对源于同一人群、数据使用一致的重复发表文献，选择样本量最大的一篇文献作为研究文献。

1.2.2 排除标准 ①VEGF检测方法为免疫组化非SP法及阳性判断标准不一致者。②重复报告或资料雷同、质量较差等无法利用的文献。③综述、评论、会议摘要及病例报道类文章。④原始文献研究对象不是人类。⑤重复报道、数据描述不清的研究。⑥没有设置对照组。⑦小细胞肺癌研究。

1.3 质量评价 参照Lichtenstein等［2］的病例对照研究评价指南，对各独立研究从以下几个方面进行质量评估，以考察各个研究是否存在偏倚及其影响程度:①研究对象纳入标准及其基本构成特征是否明确。②实验设计是否科学。③处理因素及其方法是否准确。④统计方法是否恰当。⑤是否就本研究存在的偏倚进行了讨论。以上5项，每满足1项为1分，总分≥3分者，质量可靠。

1.4 统计学方法 应用Cochrane协作网提供的Rev-Man5.1统计软件进行Meta分析。计算OR及95%CI作为效应量表示结果。对各研究进行异质性检验(以α=0.01为检验水平)。若各研究间不存在异质性，采用固定效应模型进行分析，反之则采用随机效应模型。剔除研究中小样本进行敏感性分析，重新估计合并效应量，并与排除前的合并效应量进行比较。绘制漏斗图，检验其对称性，从而识别文献是否存在发表性偏倚。

2 结果

2.1 检索结果及质量评价 共检索到116篇相关文献，根据文献的纳入和剔除标准，有9篇［3～11］纳入Meta分析，累积NSCLC病例807例(NSCLC组)，对照组305例。质量评价结果显示该9个研究的诊断标准明确、NSCLC组样本量充足、结果数据明确，均≥4分，质量可靠。

2.2 VEGF表达分析结果

2.2.1 VEGF在NSCLC组和对照组的表达 纳入的9篇文献中，NSCLC组807例，对照组305例。由于各研究间差异无统计学意义(P=0.76)，故采用固定效应模型进行Meta分析。结果显示，VEGF在NSCLC组中的表达高于对照组，差异有统计学意义(OR=11.34，95%CI为8.15 ～15.76，P ＜0.01)，见图1。

图1 VEGF在NSCLC组和对照组表达的Meta分析

2.2.2 VEGF表达与NSCLC临床病理关系 对纳入研究中VEGF在NSCLC中的表达进一步分析，Meta分析结果显示，VEGF表达与NSCLC的分化程度(OR=0.29，95%CI为 0.16 ～0.53，P ＜0.01)、淋巴结转移(OR=0.16，95%CI为 0.08 ～0.33，P ＜0.01)、TNM 分期(OR=0.36，95%CI为 0.22 ～0.58，P ＜0.01)有关，而与病理分型(P=0.97)及患者的年龄(P=0.97)性别(P=0.28)无关。

2.3 敏感性分析 在9篇NSCLC组与对照组文献中剔除2篇［3，11］小样本文献的研究后发现，得到合并 OR 及 95%CI分别为 11.57、8.05 ～16.63(P ＜0.01)，与剔出前结果基本一致。由于本分析中各研究间差异无统计学意义(P=0.87)，采用固定效应模型进行Meta分析，现改用随机效应模型进行Meta分析，得到合并 OR及95%CI分别为11.60、8.05 ～16.71(P ＜0.01)，与剔出前结果基本一致。

2.4 发表偏倚分析 在9篇文献NSCLC组与对照组中，绘制漏斗图发现，纳入的文献完整地出现在各自图上，并且以合并效应量OR值为中心散开分布，基本对称，呈倒置漏斗形，提示无明显发表性偏倚，见图2。

图2 VEGF表达与NSCLC关系的漏斗图分析

3 讨论

VEGF能够显著增加微血管的通透性，是目前已知作用最强的血管通透因子，是由Ferrar等［12］从牛垂体滤泡星状细胞培养液中分离纯化而来的一类糖蛋白。VEGF是血小板衍生生长因子家族的一员，广泛分布于人和动物体内的大脑、肾脏、肝脏、脾脏、胰腺和骨骼等组织中，但一般水平较低。目前已知VEGF与肿瘤血管生成、生长、浸润密切相关，为明确VGEF表达与NSCLC之间的关系，本研究对此进行Meta分析。

本研究Meta分析纳入的文献，其设计方案一致，NSCLC组与对照组基线具有可比性，因此纳入的文献资料较可信、代表性较好。对源于同一人群、数据使用一致的重复发表文献，选择样本量最大的一篇作为研究文献。在纳入的9篇VEGF病例对照研究文献中，Meta分析结果显示，VEGF在NSCLC组织中的表达水平显著高于癌旁、良性肺部疾病组织，且VEGF表达与NSCLC的分化程度、淋巴结转移、TNM分期明显相关，但与其病理分型、年龄及性别无明显相关。在NSCLC组与对照组中剔出小样本研究后发现，剔出后的结果与剔出前结果基本一致，增加了结果的可靠性。偏倚因素的存在可能会影响Meta分析结果的真实性，通过漏斗图分析可知，纳入的研究分布基本对称并且完整，各研究点围绕合并效应量分布，呈倒漏斗形，说明纳入的文献发表性偏倚较小，从而进一步增加结果的可靠性。然而，本研究纳入文献均为公开发表的文献，且文种限制在英文、中文，可能影响Meta分析的结果。

由于肺癌的发生是一个多因素、多阶段的过程，仅从VEGF蛋白的表达水平加以研究，可能存在一定局限性。因此，我们建议对NSCLC进行联合检测(如bFGF、Survivin等);从基因水平检测 VEGF相关基因与NSCLC的关系，并探讨相应的基因治疗;联合血清VEGF水平检测，提高准确性，为临床选择治疗方法及判断预后提供依据。同时，从不同机制了解NSCLC的侵袭和转移，并进一步探索防止其侵袭和转移的方法，是NSCLC治疗取得突破性进展的希望。体外细胞培养实验及动物肿瘤植入模型表明，抗VEGF药物可促使肿瘤细胞凋亡［13］。目前，由VEGF介导新生血管信号通路的抑制剂已开始临床应用，为晚期NSCLC患者改善预后提供了更多的选择。贝伐单抗(Bevacizumab)就是抗血管生成靶向治疗药物中的典型代表，是一种针对VEGF的人类重组单克隆抗体。目前，一项大型Ⅲ期临床试验评估了Bevacizumab联合标准化疗方案(卡铂/紫杉醇)的有效性和耐受性［14］。随着研究的深入，VEGF靶向治疗必将为肿瘤治疗开创一个全新的领域。

总之，VEGF在 NSCLC组织中高表达，且与NSCLC的分化、淋巴结转移、临床分期密切相关，提示VEGF可能促进了癌灶局部微血管的生成，参与NSCLC的转移和浸润。检测VEGF在NSCLC组织中的表达，可作为评估NSCLC生物学行为的重要指标，对患者的早期诊断、分期、判断预后、筛选转移高危病例具有重要价值，是抗血管生成靶向治疗过程中指导治疗、判断疗效及监测病情的重要生物标记物。

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