溴氰菊酯在急性中毒大鼠体内的分布

（山西医科大学法医学院，山西 太原 030001）

溴氰菊酯（deltamethrin）是一种常见拟除虫菊酯类低毒性农药，农业上多与其他种类的杀虫剂混配使用。由含溴氰菊酯的杀虫剂引起中毒或服用溴氰菊酯自杀的事件时有报道[1-2]。目前，溴氰菊酯的检测大多局限于水样、水产品及果蔬等农药残留量的测定，部分学者[3]还对溴氰菊酯代谢物的检测进行了研究，而动物体内溴氰菊酯的研究少有报道。本研究建立溴氰菊酯灌胃急性中毒大鼠模型，气相色谱-电子捕获检测器法（gas chromatography-electron capture detector，GCECD）定量检测，探讨溴氰菊酯在急性中毒大鼠体内的分布情况。

1 材料与方法

1.1 动物与试剂

实验动物：雄性大鼠24只，体质量约200g，由山西医科大学实验动物中心提供。

溴氰菊酯标准品（2mg/mL）购自公安部物证鉴定中心；溴氰菊酯乳油（25 g/L）购自拜耳生物科学（中国）有限公司；石油醚、丙酮、乙醚、甲醇、无水硫酸钠、中性氧化铝等均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 气相色谱条件

Agilent 7890A气相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司），色谱柱为Agilent HP-5毛细管柱（30 m×320μm×0.25μm），柱温 100℃，保持 1min，以 35℃/min程序升温至260℃，保持1min；再以5℃/min升温至280℃，保持 5min；进样口温度 250℃；载气（N2）流速6 mL/min；分流模式进样，分流比 20∶1；检测器（μ-ECD）温度300℃。

1.2.2 动物模型及样品提取

雄性大鼠24只，随机分成4组，实验前隔夜禁食，其中2组分别以512mg/kg和1024mg/kg剂量溴氰菊酯灌胃染毒，另2组为空白对照，分别以等量生理盐水灌胃，实验前隔夜禁食。灌胃1.5h后，乙醚麻醉致死，迅速解剖，取血液、心、肝、肺、肾、脑等，4℃保存待检。

1.2.3 样品处理

取血液1mL或组织1g于研钵内，少量多次加入无水硫酸钠研磨至干砂状，移至150mL碘量瓶中，加入混合溶剂［V（石油醚）∶V（丙酮）=4∶1］ 25 mL，振荡浸提10 min，提取液过净化柱（无水硫酸钠、中性氧化铝）过滤，滤液于30℃水浴中挥发至干，残留物用20μL甲醇定容，1μL进样，GC-ECD分析。

1.2.4 工作曲线

分别取空白血液1 mL、空白肝1 g若干份，添加溴氰菊酯标准品适量，配制成溴氰菊酯质量浓度（或质量分数）分别为 0.1、0.5、1、2、5、10、20、40μg/mL（或μg/g）的系列质控样品，按1.2.3项处理并检测。以溴氰菊酯峰面积（y）对血液（或肝）中溴氰菊酯质量浓度（或质量分数）（x）进行线性回归（溴氰菊酯以两个峰面积之和计）。

1.2.5 回收率和精密度

取空白血液1mL共15份，分别添加溴氰菊酯标准品适量，配制成溴氰菊酯质量浓度分别为0.5、5、40μg/mL的质控样品，每个质量浓度点5份，按1.2.3项方法处理并检测，计算方法回收率。计算每个质量浓度点5份质控样品中溴氰菊酯质量浓度的相对标准差，作为日内精密度；再重复测定3日，计算溴氰菊酯质量浓度的相对标准差，作为日间精密度。

1.2.6 统计方法

采用SPSS 16.0统计软件处理数据，结果以±s进行统计描述。检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 气相色谱图

空白对照组肝、溴氰菊酯添加肝和溴氰菊酯染毒肝的气相色谱图分别见图1～3。通过空白对照样品、添加样品以及染毒样品的气相色谱图比较，表明大鼠肝中内源性物质不干扰目标物的测定。

图1 空白对照组肝气相色谱图

图2 添加溴氰菊酯（20μg/g）肝气相色谱图

图3 染毒大鼠肝气相色谱图

2.2 工作曲线

溴氰菊酯在血液和肝中的线性方程、线性范围及定量限（LOQ）见表1。

表1 血液和肝中溴氰菊酯的线性方程、线性范围和定量限

2.3 回收率和精密度

溴氰菊酯在血液中的回收率和精密度见表2。从表2中可以看出，血液中溴氰菊酯的回收率为91.55%～134.37%，日内精密度和日间精密度均小于5.67%。

表2 血液中溴氰菊酯的回收率和精密度 （ ±s，%）

表2 血液中溴氰菊酯的回收率和精密度 （ ±s，%）

溴氰菊酯添加量/（μg/mL） 溴氰菊酯实测值/（n=6，μg/mL） 回收率 日内精密度（n=5） 日间精密度（n=3）0.5 0.67±0.03 134.37±6.84 2.53 3.58 5 4.58±0.50 91.55±10.04 4.12 5.67 40 41.76±6.22 104.41±15.55 3.64 4.45

2.4 中毒症状

以512 mg/kg剂量溴氰菊酯灌胃染毒大鼠时，在给药约30min后，大鼠兴奋状态消失，出现流涎或呕吐、呼吸频率减慢、行动缓慢、站立不稳等症状。以1 024 mg/kg剂量溴氰菊酯灌胃染毒大鼠时，在给药约10 min后，大鼠即出现流涎、行动缓慢、全身震颤等中毒症状。

2.5 溴氰菊酯在急性中毒大鼠体内分布

将提取的染毒大鼠样品按1.2.3项处理并检测，测得各生物检材中溴氰菊酯含量，结果见表3。

表3 溴氰菊酯在不同剂量染毒大鼠体内含量（n=6， ±s，μg/g）

表3 溴氰菊酯在不同剂量染毒大鼠体内含量（n=6， ±s，μg/g）

器官 512mg/kg 1024mg/kg心1.4950±0.3239 1.1582±0.3399肝1.6678±0.9126 0.3204±0.0455肺2.2709±1.3223 2.7916±1.3343肾0.7786±0.2208 1.1555±0.7773脑0.3195±0.0683 0.4004±0.0964血液/（μg/mL） 0.6340±0.0012 1.5465±0.6427

3 讨 论

3.1 方法学建立

溴氰菊酯是含苯醚和环丙烷结构及卤素的有机物，气相色谱分析时，电子捕获检测器（ECD）只对含有电负性强的元素（如卤素）的物质有选择性地产生信号，可摒除生物样品中内源性杂质的干扰。本研究建立的溴氰菊酯GC-ECD检测方法灵敏度较高，可满足农药中毒案件生物检材中溴氰菊酯的检测。此外，拟除虫菊酯类农药在合成过程中因药物中间体的存在或顺反异构体的影响，溴氰菊酯在本研究色谱条件下出现两个色谱峰，经气质联用法确证，两个色谱峰均为溴氰菊酯。

3.2 染毒剂量选择

溴氰菊酯大鼠急性经口LD50为128mg/kg[4]，但用市售溴氰菊酯乳油灌胃大鼠LD50剂量和2倍LD50剂量时，大鼠未出现明显中毒症状。农药中毒致死案例以口服自杀居多，自杀者一般服用药物剂量较大。本研究以4倍LD50剂量（512 mg/kg）和8倍LD50剂量（1 024 mg/kg）溴氰菊酯灌胃染毒大鼠，中毒症状明显。

3.3 溴氰菊酯在大鼠体内分布特征与法医学意义

从表3可见，不同剂量溴氰菊酯在大鼠体内分布不尽相同。4倍LD50或8倍LD50剂量溴氰菊酯灌胃染毒1.5 h后，溴氰菊酯在大鼠体内含量由高至低顺序分别为：肺＞肝＞心＞肾＞血液＞脑；肺＞血液＞心＞肾＞脑＞肝（P＜0.05）。两个剂量组中均在肺组织中检出较高浓度的溴氰菊酯，可能是因给药后大鼠出现呕吐、胃内容物反流进入气管所致。有文献[5]报道口服溴氰菊酯中毒者消化道症状较明显，多出现呕吐、腹泻，并伴有流涎、肌肉震颤。本研究大鼠模型也符合报道所述。马晓梅等[6]研究发现溴氰菊酯慢性染毒大鼠后，大鼠肝有较明显的毒性损伤。而肝和肾分别作为药（毒）物的转化和排泄器官，不同剂量灌胃后可能导致其代谢转化速度不同，8倍LD50剂量染毒组大鼠排泄更快，提示溴氰菊酯在体内分布存在剂量依赖。张增利等[7]研究了氰戊菊酯与辛硫磷等毒配比后在小鼠体内的代谢和分布，发现氰戊菊酯在小鼠肺中分布最高，其次为肝、心和脑。这也与本研究8倍LD50剂量灌胃大鼠后在体内分布情况一致。因此建议法医在提取检材时应尽早，且应注意剂量不同所致体内浓度分布不一致的现象。

谭滇湘等[8]对溴氰菊酯在山羊体内药动学进行了研究，表明溴氰菊酯在山羊组织中分布广泛、组织浓度低、体内残留时间长，组织中溴氰菊酯含量由高至低顺序为肾＞脂肪＞肌肉＞血浆＞肝。本研究用大鼠作动物模型，尽管给药量较大、检测方法回收率高，但样品中检出量依然较低，这可能与溴氰菊酯在体内代谢、排泄快，不易从器官内检出溴氰菊酯原体有关[1，9]。

[1]廖林川.法医毒物分析[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2009：197-202.

[2]Gunay N，Kekec Z，Cete Y，et al.Oral deltamethrin ingestion due in a suicide attempt[J].Bratisl Lek Listy，2010，111（5）：303-305.

[3]Lin CH，Yan CT，Kumar PV，et al.Determination of pyrethroid metabolites in human urine using liquid phase microextraction coupled in-syringe derivatization followed by gas chromatography/electron capture detection[J].Anal Bioanal Chem，2011，401（3）：927-937.

[4]化工部农药信息站、化工部化肥司、化工部合成材料研究院.化工产品手册：农用化学品[M].第3版.北京：化学工业出版社，2000：114.验外，对骨骼肌的病理学检验也很重要，因为感染后

[5]崔众英，边洪明，王明君，等.急性溴氰菊酯中毒184例分析[J].滨州医学院学报，2001，24（1）：89-90.

[6]马晓梅，吴梅，李杰，等.溴氰菊酯致大鼠慢性中毒的肝组织形态学观察[J].青岛大学医学院学报，2010，46（3）：241-243，246.

[7]张增利，童建，杨淑琴，等.混配农药中氰戊菊酯在小鼠体内的代谢和分布[J].苏州医学院学报，2000，20（6）：517-518，531.

[8]谭滇湘，曾振灵，陈杖榴，等.气相色谱法检测山羊组织中溴氰菊酯的残留[J].华南农业大学学报，2005，26（2）：103-107.

[9]刘良.法医毒理学[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2009：169-171.