一例仔猪水肿病的实验室诊断

亢文华，訾占超，汪葆玥，马英

（中国动物疫病预防控制中心，北京朝阳 100125）

（一）发病情况 河北省某猪场饲养母猪150头，2013年4月初，断奶仔猪陆续出现急性死亡，多在断奶后40～60日龄发病，发病率为10%，病死率达到90%以上。

（二）临床症状 主要症状有精神沉郁，食欲下降，口流白沫，轻度腹泻，后期便秘，体温无明显变化。发病仔猪均有神经症状，表现肌肉震颤，不时抽搐，四肢泳动，共济失调，盲目前进或做转圈运动。面部、眼睑及颈部有水肿，死前后躯麻痹。结膜高度充血，90%的仔猪在表现症状后不久死亡，病程为半天至1 d。剖检3头病死猪可见眼睑及结膜水肿，颌下淋巴结与肠系膜淋巴结高度水肿。胃大弯高度水肿，胃壁肿胀，贲门部、胃底部黏膜明显肿胀，呈半透明状，在黏膜下层和肌层之间聚积胶冻样黄色液体。小肠黏膜弥漫性出血，肠腔内充满茶色带气泡的液体。心包积液，肾肿大，肾盂水肿、充血。无菌条件下采集典型发病仔猪的肝脏进行细菌分离培养及实验室鉴定，现将结果报告如下。

（三）实验室检查

1.实验室镜检。无菌取肝、脾、肠系膜淋巴结触片，均见有革兰氏阴性、两端钝圆、分散或成对排列的短小杆菌。

2.细菌培养。无菌取濒死猪的肝脏接种于普通肉汤试管、普通琼脂平板培养基中，37℃培养24 h，普通肉汤均匀浑浊，试管底部出现黏腻的沉淀，轻摇后呈辫状升起。普通琼脂平板生成圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、灰白色半透明的中等大小的菌落。分别挑取肉汤培养物和单菌落做涂片，革兰氏染色镜检，均可见到大量革兰氏阴性小杆菌。将镜检过的单个菌落分别接种到麦康凯和鲜血琼脂平皿培养基上分别出现粉红色菌落和β溶血。

3.生化试验。该菌株能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、鼠李糖、阿拉伯糖、山梨糖、甘露醇、木糖、纤维二糖产酸产气，不发酵蕈糖，靛基质试验阳性，M-R阳性、V-P阴性，不能利用柠檬酸盐，不产生硫化氢，接触酶试验阳性。

4.药敏试验。药敏试验高度敏感的药物：头孢噻肟、头孢氨苄。耐药的药物：阿莫西林、阿米卡星、环丙沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星、氨苄西林、多西环素、新霉素、卡那霉素、羧苄青霉素。

5.致病性试验。将纯化后的细菌接种于普通肉汤，37℃培养24 h，腹腔注射小白鼠4只，每只0.2 ml；对照组2只小白鼠腹腔注射灭菌普通肉汤0.2 ml/只。接种后12 h，试验组小白鼠有呆滞、呼吸困难、尾部发绀、活动减少、被毛侧立、采食减少等症状，而对照组小白鼠表现正常。24 h 后，试验组小白鼠先有2只死亡，余下2只在36 h内均死亡，而对照组小白鼠生长状况良好。剖检病死小白鼠，见其肝脏、肺脏肿大，腹腔积液。取其肝脏涂片镜检，可见形态典型的革兰氏阴性、两端钝圆、分散或成对排列的短小杆菌。再进一步将该病料进行病原菌的分离培养、生化试验，其结果同上述分离菌的结果一样。说明此次分离所得菌具有致病性。

6.PCR。根据GenBank中发表的stx2e基因序列在分析比较的基础上根据保守区域设计一对引物用于PCR对产志贺毒素大肠杆菌的鉴定。

采用常规PCR反应系统，扩增出与预期相同的620 bp片段，表明该分离株为产志贺毒素的大肠杆菌（图 1）。

(四)防治

1.加强饲养管理，搞好环境卫生。加强消毒,用0.5%百毒杀和0.2%过氧乙酸上下午交替喷雾消毒。

2.由于仔猪出现水肿病时，大部分已吸收了内毒素，所以用抗生素治疗收效甚微。患猪出现水肿和神经症状时，用5%的葡萄糖水250～500 ml、安钠咖0.5～2 g、20%甘露醇50 ～100 ml，混合后静脉注射，1 次/d，连续注射3 d，以缓解脑部水肿和颅内压升高。

图1 PCR鉴定结果

3.减少或消除应激因素，改善断奶仔猪的饲养管理。一是断奶前的仔猪要提早补料，训练采食，少喂多餐，饲料喂量逐渐增加。断奶后不宜突然更换饲料，要限制高蛋白、高碳水化合物饲料的喂量，增加日粮中纤维素的含量；二是在气候多变的春秋季节，要保持猪舍内的温度恒定，尤其要注意寒流、暴风雨的侵袭，做到防寒保暖；三是断奶后每天口服 MgSO4，同时在饲料或饮水中加入敏感的抗菌药，可大大减少水肿病的发生。

采取以上综合措施后，该病得到了有效控制。半月后回访时，该猪场再未发现仔猪水肿病临床病例。

（五）讨论

1.本病的诊断需要与伪狂犬病、脑膜脑炎型链球菌病等疾病相区别。猪伪狂犬病临诊表现因日龄不同而有很大差异，初生仔猪即可发病，表现与水肿病相似的神经症状，但体温升高41℃～41.5℃，20日龄以上到断奶前后的仔猪症状轻微，表现体温41℃以上，呼吸短促，食欲减退或废绝，耳尖发紫，发病率、死亡率都低于15日龄以内猪。脑膜脑炎型链球菌病在出现神经症状的同时，个别猪会出现多发型关节炎、关节肿大。

2.产志贺毒素大肠杆菌的毒力因子主要有2种，即菌毛和毒素。致仔猪水肿病产志贺毒素大肠杆菌的菌毛主要是黏附性菌毛（F18），但也有大肠杆菌K88以及没有菌毛的菌株，而引起血管变性从而出现水肿的毒素却只有致水肿病2型类志贺毒素（Stx2e）一种；因此，菌毛的有无及其类型不能作为鉴定产志贺毒素大肠杆菌的指标，而必须依赖于Stx2e的检测。传统鉴定Stx2e方法是用细胞毒性试验及免疫学试验，但其鉴定程序相对繁琐，且难以与志贺样毒素1型（Stx1）、志贺样毒素2型（Stx2）区分；因此，本试验采用鉴定产Stx2e型产志贺毒素大肠杆菌的PCR方法该方法具有特异和快速特点，能够很好地检测出仔猪水肿病。

（略）