母猪葡萄球菌子宫内膜炎的诊治

2013-05-15岳建伟王五臣高学龙朱青

兽医导刊 2013年1期

岳建伟，王五臣，高学龙，朱青

（西平县动物卫生监督所，河南西平 463900）

在规模化养殖场中，母猪的生产力对养猪场的经济效益起着重要的作用，甚至直接影响整个养猪场的经济效益。母猪子宫内膜炎是养猪业以及猪繁殖障碍病中的主要疾病之一，病因复杂，发病率有逐步上升的趋势，已成为困扰现代规模化养殖户的一个重要问题。目前许多集约化养猪场均存在本病，繁殖母猪发病率达20%以上，多发于配种(或发情)后14～20 d、妊娠末期2～3周的母猪和生产5 d后的哺乳母猪。该病除引起子宫内膜的炎症和损伤外，还可以影响胎儿的受精及胚胎的生长发育和着床，甚至引起胎儿发生流产和死亡。临床症状主要表现为母猪子宫复旧时间延长，产后发情时间推迟，屡配不孕或妊娠后流产等，给养猪业造成了严重的经济损失。细菌感染被认为是本病的重要因素之一。据报道，发生母猪子宫内膜炎的怀孕母猪与正常怀孕母猪相比，产后初配的天数和产后受孕天数都有不同程度的增加，分别增加 14.81 d 和 31.67 d，而情期受胎率却下降了21.36%,平均配种受胎次数增加0.51次。在防治本病的过程中，虽然许多养猪场投入了大量的人力物力，但是效果却不甚明显，发病率仍然不见减少，这可能是因为在本病的发病原因未调查清楚的情况下，采取的治疗措施缺乏针对性，以及盲目使用抗菌药物不能很好地防治本病的发生。

母猪子宫内膜炎是母猪子宫黏膜的粘液性或化脓性炎症，多发于母猪产后几天，甚至会导致流产。本实验选择河南某猪场的40头患有子宫内膜炎的母猪中随机抽取3头，进行病原鉴定、药敏实验以及选择敏感药物和对照药物进行治疗，观察其治疗效果，并对其治愈母猪进行配种，观察其受胎率和产仔数，为本病的治疗积累临床资料。

一、材料与方法

（一）材料

1.病料来源。河南某猪场患有子宫内膜炎的分泌物。母猪子宫内膜炎在临床上主要表现为急性子宫内膜炎、慢性卡他性子宫内膜炎、慢性卡他性化脓性子宫内膜炎和慢性化脓性子宫内膜炎。下面就主要概括下其不同的临床症状及其诊断要点。急性子宫内膜炎：母猪精神不振食欲下降或不食，鼻镜干燥，体温升高，拱背，频频排尿、努责，从阴门中不断地排出白色或灰白色的含有絮状物的腥臭脓性分泌物，当其卧倒时排出较多；慢性卡他性子宫内膜炎：较常见，母猪一般无明显或轻度的全身症状发生，体温略有升高，食欲下降或不食，产奶量下降，尿少赤黄，有时发情正常但是母猪屡配不孕，在冲洗子宫的过程中，会从子宫内流出液体并且其液体略微浑浊；慢性卡他性化脓性子宫内膜炎：母猪的全身反应较轻，逐渐消瘦，发情周期失常，从阴门中不断地排出灰白色稀薄脓液，其中尾根、阴门等处上常粘有阴道排出物附着，并形成干痂；慢性化脓性子宫内膜炎：从阴门中常排出灰色黄褐色、灰白色分泌物，卧下时较多，粘着于阴门周围皮肤及尾根。

2.试剂及其药物。药敏片根据药物使用浓度自行制配，主要成分分别为特效米酰、环丙沙星、氟哌酸、土霉素、青霉素、制霉菌素、氟苯尼考、多粘菌素、氨苄青霉素和链霉素。葡萄球菌平板凝集抗原、葡萄球菌标准阳性血清和阴性血清。

3.培养基。普通琼脂平板、血液琼脂平板、肉汤培养基、五糖发酵管、葡萄糖蛋白胨水、V-P、M.R.试剂。

4.器械。生化培养箱，冰箱，冰柜，生化反应管，显微镜，油标卡尺，恒温培养箱，接种环，平皿，试管，玻璃板、微量加样器。

（二）方法

1.病料采集。采集3头母猪子宫分泌物，对母猪外阴部用消毒液清洗，用灭菌输精管插入子宫腔，注入生理盐水20 ml，并立即回抽1.0～1.5 ml，然后将所得混合液移入灭菌试管内做好标记，保存在冰箱（4℃）内备用。

2.细菌分离。将采集的各样品10 000RPM 离心 1 min，弃大部分上清，留取0.5 ml上清悬起沉淀，混匀后分别接种血琼脂平板、巧克力平板，37℃培养24～48 h，再挑选出不同形态的单菌落进行纯培养；纯培养得到的菌落分别接种于S.S培养基、伊红美蓝培养基、麦康凯培养基上进行初步鉴定。

3.细菌鉴定。挑选纯培养后的单菌落后，用革兰氏染液对其染色，观察其菌落的染色特征及形态。然后初步鉴定其类属。将分离到的菌株接种到生化反应管对病原菌鉴别。

4.小鼠致病性试验。将分离的纯菌株培养液分别通腹腔途径接种于小鼠，每只接种菌液0.5～1.0 ml，观察其结果。

5.凝集试验。用铅笔在洁净的玻板上方划上方格并注明待检血清号码；取0.2 ml吸管按下列量加待检血清方格内：第一格加0.08 ml，第二格加 0.04 ml，第三格加0.02 ml，第四格加 0.01 ml，血清用前需放室温，使其温度达到20℃左右；每格内加葡萄球菌平板凝集抗原0.03 ml，滴在血清附近同时又不要与血清接触，用牙签自血清量最小的一格起，将血清与抗原混匀，每份血清用一根牙签同时轻轻摇动玻板使呈旋转运动；混合完毕后静置3～4 min然后拿起玻板轻轻转动后将玻板置凝集反应箱上均匀加温，使温度达到30℃左右，3～5 min后记录结果。为保持试验的准确性，应平行测试3次。

6.分离致病菌的药敏试验。

（1）受试药物制备：特效米酰、环丙沙星、氟哌酸、土霉素、青霉素、制霉菌素、氟苯尼考、多粘菌素、氨苄青霉素和链霉素配成治疗用浓度。

表1 病原菌发酵试验结果

表2 3株细菌的药敏实验结果（mm）

表3 治疗效果比较

表4 治愈后母猪的生产性能比较

（2）药敏纸片的制作方法：选用质量较好的定性滤纸，用打孔器打成直径为6 mm的圆片，每100片放入一个瓶中，高压灭菌30 min，在60℃烘箱中烘干备用；将药敏纸片放人配制好的抗菌药物中，均匀吸取药液，一般浸泡30 min即可，记录药物名称，于37℃温箱过夜，于冰箱中保存备用(可保持6个月的有效期 )。

（3）受试菌株：为子宫内膜炎的病猪分离菌株。

（4）抑菌试验：按抑菌实验室操作规程进行操作，将金黄色葡萄球菌接种于肉汤琼脂培养基中，贴上药敏试纸，37℃培养24 h，用游标卡尺测量抑菌圈直径大小。做四次药敏试验然后求其平均抑菌值。抑菌圈20 mm以上为极敏感药物；l5～20mm为高敏；10～14mm为中敏；10mm以下低敏。

7.治疗试验。

（1）试验母猪的选择与分组。将河南省某猪场40头子宫内膜炎病猪进行分组治疗试验。将40头母猪随机分成2组，治疗组A为30头病猪，对照组B为10头病猪。

（2）子宫内膜炎治疗方案。

a.治疗组A:对受试母猪先用l0～20 g/L的盐水溶液冲洗子宫，然后分别按剂量3 mg/kg头孢噻呋钠注入子宫，每隔24 h用药1次，连用3次为1个疗程。

b.对照组B：对受试母猪先用10～20 g/L的盐水溶液冲洗子宫，不注射任何药物，按平常饲养方式正常饲养。

（3）子宫内膜炎疗效判定。

治愈：全身症状消失，精神食欲恢复正常，分泌物透明清亮，阴道检查阴道壁颜色呈粉红色，子宫炎症消失，外阴部肿胀消失，正常发情妊娠。

有效：用药后全身症状基本消失，精神食欲好转，外阴部肿胀不明显，子宫炎症缓解，子宫分泌物基本接近正常，阴道内有少量异物流出。

无效：用药后全身症状未消失或加重，精神食欲无明显改观，子宫炎症无变化或加重，子宫分泌物未见减少，甚至恶化，与用药前没有变化。

（4）对治愈后的母猪进行后期观察。对治愈的母猪和对照组母猪在正常发情后采用人工授精的方法进行配种，精液密度为0.45亿／ml，活力为0.9级，每头每次输入45 ml。母猪在第一次输精后，间隔6～8 h再重复输输精。配种后分别统计各组母猪的受胎率及产仔数情况。

二、结果

（一）分离菌的形态特征显微镜下，菌落为革兰氏阳性的呈单个，成对或排列成葡萄串状、无芽胞、无鞭毛细菌。

（二）细菌在各培养基上形态待定在普通琼脂平板培养基上表现为菌落呈圆形、湿润、不透明、边缘整齐、表面隆起的金黄色光滑菌落；在血液琼脂平板菌落形成明显的溶血；在肉汤培养基中菌落显著浑浊并且形成沉淀，在管壁上形成菌环。

（三）生化试验结果几种菌落分别在葡萄糖、麦芽糖、甘露糖、山梨醇、棉子糖、木胶糖、蔗糖、乳糖中均为产酸不产气。其基本符合葡萄球菌的生化试验结果（见表1）。

（四）动物试验结果小鼠于接种后24～72 h内死亡，剖检、涂片染色、镜检，从小鼠体内分离到与接种菌株相同的细菌。

（五）凝集试验结果被检血清与标准阳性血清发生凝集反应，因此可以确定为该病原菌为葡萄球菌。

（六）药敏试验结果从表2中可以看出头孢噻呋、林可霉素和特效米酰对3种细菌为高度敏感；氟哌酸各对其为高度敏感，庆大霉素、土霉素和青霉素为低敏感，青霉素对革兰氏阳性菌及其某些革兰氏阴性菌有很好的抗菌效果，例如葡萄球菌，肺炎球菌的球菌高度敏感，但本次试验中青霉素对其为低敏感度。分析其原因可能为该猪场长年超量应用青霉素用于治疗和预防，导致猪体对青霉素产生耐药性。因此,希望有条件的猪场应根据药敏试验结果选择敏感药物,且应注意交替用药,按疗程投药,这样才能收到较好的治疗效果。

（七）治疗试验结果从表3可以看出，A组使用头孢噻呋治疗，其有效头数、有效率、治愈头数和治愈率分别为29头、96.7%、27头和90%；B组为对照组未使用任何药物治疗，有效头数、有效率、治愈头数和治愈率分别为8头、80%、2头和20%；A组的有效率与治愈率和B组的相比差异显著(P<0.05)。表明用头孢噻呋的治疗效果明显好于对照组。

（八）治愈后母猪的后续生产力观察由表4可以看出，经药物治疗后，2个试验组共有28头母猪治愈，正常发情配种后，A组的受胎头数、受胎率和产仔率分别为26头、93%和96.2%；健康对照组( B组)的受胎头数、受胎率和产仔率分别为28头、93.3%和96.4%。经两个样本百分数差异显著性检验，A组和对照组（B组）两组之间，母猪受胎率差异不显著；经单因素方差分析进行差异显著性检验，A组和对照组两组之间，产仔率差异均亦不显著。

三、讨论

从3头典型的母猪子宫内膜炎分泌物中分离出的致病菌株，经过一系列的病原分离，生化试验，血清学试验可以确诊为葡萄球菌。

（一）母猪子宫内膜炎发生原因母猪子宫内膜炎病原微生物比较复杂，不同地区不同情况下分离到的细菌种类和比例也有差异。根据分离到的菌株数和病原菌的感染情况，可知葡萄球菌菌株数量多、感染率最高。葡萄球菌是常见的感染细菌，可引起急性和化脓性炎性感染，这两种细菌通常在母猪抵抗力降低、配种、产后最易感染。细菌可经子宫颈进入子宫，引起子宫内膜炎，尤其是产后易并发子宫内膜炎。本研究中分离的主要细菌葡萄球菌表现为单独致病，同时在许多情况下也可继发感染与其他细菌共同导致该病的发生，这种结果也进一步验证了母猪子宫内膜炎病原感染的复杂性。

引起该病的原因的种类很多，除上述提到的微生物感染外，还有其他几种原因，主要为卫生环境不好，猪卧下时身体上沾有污染的粪尿，产房内长期不进行清扫，圈舍卫生条件差潮湿，产前没有进行消毒；操作时的不规范也可导致该病发生，主要是在人工授精过程不规范的输精，使输精器械对子宫造成损伤，输精次数频繁等。分娩时的各种刺激因素如产后子宫迟缓、难产、阴道脱出、胎衣不下等均可诱发该病的发生。

（二）母猪子宫内膜炎治疗原则在进行治疗子宫内膜时，药物选择非常关键，本次试验中，筛选的高敏药物进行治疗该病时，效果明显比不敏感的药物青链霉素效果好；母猪的使用年限一般为4～5年，由于青霉素使用非常频繁，反复多次超量使用导致细菌的耐药性产生，从而影响青霉素的治疗疗效。这点启示我们在以后的疾病治疗过程中，应该强调科学用药，有条件的猪场可以自己进行敏感药物的筛选，选择高敏药物治疗；没有条件的猪场应尽量与当地的兽医卫生服务站合作，做好药物筛选工作。在选择合适的药物后还要注意换药，减少同一或同类药物使用的频率，减少或降低细菌耐药性发生机率。随着现代化养殖业的发展，各类疾病的病原在不断变化，而且猪子宫内膜炎的发病原因十分复杂，因此，在治疗前有必要做细菌学检查，明确其病原菌，然后筛选敏感药物来提高疗效。

母猪子宫内膜炎要及时彻底治疗，不要延误有效治疗时间，避免转为慢性炎症。对提高母猪的繁殖能力及养殖效益都非常重要。该病的发生又分急性子宫内膜炎和慢性子宫内膜炎，一般急性子宫内膜炎易治疗，且治愈时间短，效果好。如果治疗不及时或者治疗不彻底，可转为慢性子宫内膜炎。慢性子宫内膜炎治愈时间长且易反复发作，部分母猪治疗效果不好，易造成屡配不孕，给猪场带来较严重的经济损失。因此在母猪子宫内膜炎的治疗过程中，有效治疗时间很关键。

（三）母猪子宫内膜炎的预防措施预防子宫内膜炎，必须加强怀孕母猪的饲养管理，猪栏应保持清洁卫生，特别是母猪上产床前，母猪及产床一定要清洗干净，彻底消毒。夏季做到防暑降温，冬季保暖，栏舍清洁、干燥、通风；防止一切不良因素的刺激，增强机体的抵抗力；注意营养，防止维生素缺乏，提供全价饲粮，并饲喂一些青饲料，对防止母猪子宫内膜炎的发生极为重要。配种前，阴户、臀部用消毒液清洗，尽量做到无菌操作；接产时，严格消毒，避免接产时造成子宫内膜的损伤和细菌的感染；产房要进行严格消毒。