藏药宽筋藤中总黄酮和芦丁含量的测定

钟文　翟瑶　卢永昌

摘要：对藏药宽筋藤（Fallopia aubertii）中总黄酮和芦丁的含量进行了测定。确定了总黄酮的比色测定法和芦丁的高效液相色谱法，总黄酮的回归方程Y=0.080 5 X+0.000 9， R2=0.999 8。芦丁的色谱分离条件流动相为甲醇∶0.1%磷酸溶液（40∶60，V/V），回归曲线为Y=131 0.8 X+1.553 9，R2=0.999 8，总黄酮和芦丁分别在0.004～0.032 mg/mL、0.4～3.0 μg范围内呈良好的线性关系，该方法简单、快捷、准确，可作为宽筋藤的质量控制标准。

关键词：宽筋藤（Fallopia aubertii）；总黄酮；芦丁；HPLC

中图分类号：O657.7+2；O657.32 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）09-2151-02

寬筋藤（Fallopia aubertii）为蓼科植物木藤蓼的茎，在藏药中又名“勒哲”，是藏药中的常用药材。在藏药药典《晶珠本草》中记载，其功效为清除隆热症[1]。黄酮类化合物在植物界分布广泛，对植物生长具有重要作用，同时也具有一定的抗菌防病功效[2]。芦丁是黄酮化合物中的一种，有降低毛细血管通透性和脆性的作用[3]。对宽筋藤中的总黄酮和芦丁含量的测定尚未见报道，为控制该药材的质量，结合相关文献[4-11]，采用比色法测定宽筋藤中的总黄酮，HPLC法测定芦丁的含量，该方法的建立为控制宽筋藤的质量提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器、试剂与材料

Agilent 1200高效液相色谱仪（含自动进样器、四元梯度泵、DAD检测器）；T6新锐-紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器）；KQ-300B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；索式提取器。

甲醇、乙醇、磷酸为色谱级试剂；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为化学纯。

宽筋藤于2011年10月采于青海省互助北山，由青海民族大学化学与生命科学学院毛继祖教授鉴定，芦丁对照品由中国药品生物检定所提供。

1.2 方法

1.2.1 比色法测定总黄酮含量

1）对照品溶液的制备。称取芦丁对照品20 mg，用70%乙醇溶解并定容于100 mL的容量瓶中，摇匀，得0.2 mg/mL的标准溶液。

2）标准曲线的制备。精确吸取标准溶液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分别置于25 mL容量瓶中，加入1 mL 5% NaNO2溶液， 摇匀，放置6 min；加入1 mL 10% Al（NO3）3溶液，摇匀，放置6 min；加入10 mL 5% NaOH溶液，再加水至刻度，摇匀，放置15 min。以试剂空白作为参比溶液。用1 cm比色皿，在510 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，得到回归方程Y=0.080 5C+0.000 9，R2=0.999 8。结果表明，芦丁对照品在0.004～0.032 mg/mL范围内呈良好的线性关系。

3）样品测定方法。称取宽筋藤干粉1.0 g置于100 mL圆底烧瓶中，加入30 mL 70%乙醇，加热回流 1 h，反复提取3次，趁热过滤，滤液用70%乙醇定容于100 mL容量瓶中，得到黄酮提取液，待用。

1.2.2 HPLC法测定芦丁含量

3）样品溶液的制备。称取宽筋藤干粉10 g，加入300 mL 70%乙醇反复回流提取1 h，重复3次，浓缩蒸干，再用甲醇定容于50 mL容量瓶中，所有需测定的溶液均先过0.45 μm的滤膜[6]。

2 结果与分析

2.1 总黄酮的测定结果

2.1.1 重现性试验 称取宽筋藤干粉1 g，共5份，分别按上述方法测定吸光度。结果RSD值为1.42%，重现性试验符合要求。

2.2 芦丁的HPLC法测定结果

2.2.4 样品中芦丁含量的测定 根据上述方法，测得宽筋藤中芦丁含量为0.081%。

3 小结与讨论

研究结果表明，宽筋藤中总黄酮含量为0.620%，芦丁含量为0.081%。由于本试验材料为植物的茎部，相对于植物全草来说，黄酮类物质的含量不多。

3.1 流动相选择

在流动相的选择过程中，选择甲醇与水适量比例，反复试验，使杂质峰与所测物质峰充分分离，加入适量酸可达到最佳分离效果，定量更准确。

3.2 检测波长选择

用芦丁的甲醇溶液在紫外可见光分光光度仪上扫描，发现在254 nm和360 nm处都有吸收，由于在液相上254 nm处杂质峰比较多，所以选用360 nm作为检测波长。

参考文献：

[1] 帝玛尔·丹增彭措.晶珠本草[M]. 毛继祖，译.上海：上海科学技术出版社，2012.329.

[2] EMILIA J M，WENZEL U，RUIZ-GUTIERREZ V，et al. O-live fruit extracts inhibit proliferation and induce apoptosis in HT-29 human colon cancer cells[J]. Journal of Nutrition，2006， 136（10）：2553-2557.

[3] 卢永昌，闫 红.HPLC测雪莲中芦丁和槲皮素的含量[J].华西药学杂志，2007，22（1）：79-80.

[4] 涂 波，汪志勇.当归补血汤颗粒中黄芪甲苷和黄芪多糖的含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（18）：115.

[5] 黄艳菲，彭镰心，丁 玲，等.荞麦和商品苦荞麦中芦丁含量的测定[J].现代食品科技，2012，28（9）：1219-1222.

[6] 孙 芸，刘 艺，燕雪花，等.新疆沙枣总黄酮含量测定及提取工艺优化[J].湖北农业科学，2012，51（16）：3570-3572.

[7] 王 薇，于加平，李 勇，等.黄花忍冬果中总黄酮的提取工艺研究[J].安徽农业科学，2012，40（28）：13790-13792.

[8] 陈英红，董 芳，姜翔之，等.HPLC法测定贯叶金丝桃中芦丁和金丝桃苷的含量[J].中国药师，2012，15（10）：1429-1430.

[9] 田振坤，顾媛媛，宋成贵，等.HPLC测定凤仙透骨草中芦丁、槲皮素和山奈酚的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（18）：106-108.

[10] 光 琴，周亚球. HPLC测定罗布麻叶中总黄酮的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（3）：103.

[11] 李利华.HPLC测定鱼腥草不同部位绿原酸和芦丁的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（19）：94-97.