UV法和HPLC法测定藏药多腺悬钩子中总黄酮及芦丁的含量

2013-04-29翟瑶钟文林鹏程

湖北农业科学 2013年9期

翟瑶　钟文　林鹏程

摘要：对藏药多腺悬钩子（Rubus phoenicolasius）中总黄酮和芦丁含量分别进行了测定。采用UV法测定总黄酮的含量，总黄酮在0.20～1.00 mg（R2=0.999 6）时线性关系良好，平均回收率为99.2%。采用HPLC法测定芦丁的含量，使用的色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱温30 ℃，流动相为甲醇∶0.4%磷酸溶液（45∶55，V/V），结果表明，芦丁在0.02～0.10 μg（R2=0.999 8）时线性关系良好，平均回收率为102.6%。该方法简单、可靠、快速。

关键词：多腺悬钩子（Rubus phoenicolasius）；UV；HPLC；总黄酮；芦丁

中图分类号：O657.7+2；O657.32 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）09-2144-02

多腺悬钩子（Rubus phoenicolasius）为蔷薇科悬钩子属植物，藏药中称为才旦玛杰巴、达才尔、克玛、苦夏玛等。《晶珠本草》中记载：“味甘、苦、微辛。果味甘、酸，化味相同。治隆热病、培根病、浮肿，治肺病特效。果实熬膏治热病初起、恶寒发热，单药煎汤也有各种功效”[1]。黄酮类化合物具有抗病毒、抑菌、消炎等作用[2]，芦丁是多腺悬钩子中黄酮类化合物的一种，有很好的消炎作用[3]。目前对悬钩子属植物的已有研究多集中在化学成分、种植等方面，但未见对其总黄酮和芦丁成分含量进行测定的报道。本研究采用UV法和HPLC法对多腺悬钩子总黄酮及芦丁的含量进行测定，对评价多腺悬钩子的质量具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器与试剂

1.1.1 材料多腺悬钩子，2011年10月采于青海互助北山，由林鹏程教授鉴定为藏药多腺悬钩子。将多腺悬钩子样品去除杂质，阴干粉碎备用。

1.1.2 仪器与试剂 Agilent 1200高效液相色谱仪（配备自动进样器、在线脱气机、四元梯度泵、柱温箱、DAD检测器、Agilent 1200色谱工作站）；Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱（美国Agilent公司）；T6新锐-可见分光光度计（北京普析通用仪器厂）；KQ-300B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；芦丁对照品自制，经归一化法测定，含量大于98%；甲醇（色谱级，美国天地公司）。

1.2 UV法测定总黄酮的含量

1.2.1 样品溶液的处理取1.00 g多腺悬钩子粉末于100 mL圆底烧瓶中，加入30 mL 70%的乙醇，超声30 min，热回流1.5 h，将滤液过滤后，放入100 mL容量瓶中，加水至刻度处。

1.3 HPLC法测定芦丁的含量

1.3.2 样品溶液的配置[6] 取10.0 g多腺悬钩子的粉末置于500 mL的烧杯中，加入300 mL 70%乙醇，超声30 min，热回流1.5 h后过滤，将滤液蒸干后，溶于色谱甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中。

2 结果与分析

2.1 UV法测定总黄酮的含量

2.1.2 精密度试验吸取1.00 mL样品溶液，重复测定6次，计算吸光度的相对标准偏差（RSD）为1.57%，表明精密度良好。

2.1.3 重现性试验取同一份样品，平行制备5份供試液，按上述条件测吸光度，计算RSD为0.84%，表明重现性良好。

2.1.5 样品中总黄酮含量的测定根据上述方法，测得多腺悬钩子中总黄酮含量为2.34%。

2.2 HPLC法测芦丁的含量

2.2.2 精密度试验吸取样品溶液1.00 mL，加甲醇定容至10 mL，过0.45 μm的微孔滤膜，取5.00 μL溶液进样，重复测定 6 次，计算峰面积的RSD为1.01%，表明精密度良好。

2.2.3 重现性试验取同一份样品，平行制备6份供试液，按上述条件进行测定，计算其峰面积的RSD为0.67%，表明重现性良好。