理囊散中不同提取物的促孕活性研究

李炳　曾云军　陈韩英　谷新利

摘要：试验比较了中药复方理囊散挥发油提取物、乙醇提取物、水提取物对21日龄雌性昆明种小鼠子宫系数和卵巢卵泡发育的影响。结果显示，理囊散乙醇提取物组、挥发油提取物组小鼠的子宫系数及大型卵泡的百分比与空白组小鼠相比差异显著（P<0.05），理囊散水提取物组与空白组相比差异不显著（P>0.05）。表明乙醇提取物是中药复方理囊散中起主要作用的成分，挥发油提取物次之。

关键词：理囊散；提取物；小鼠；子宫系数；卵泡发育

中图分类号：S859.79+3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）09-2104-03

中药复方理囊散由香附子、女贞子、益智仁等10余味中药组成，主要用于治疗卵巢囊肿和排卵延迟等原因造成的奶牛不孕症。临床应用证明该复方促孕效果显著[1]，副作用小[2]。但作为纯中药散剂，理囊散用药量大，灌服困难，药材利用率低，有效成分不明确，不利于质量控制和推广应用。

本试验中，通过观察小鼠子宫系数和卵巢的变化，比较中药复方理囊散挥发油提取物、乙醇提取物、水提取物的作用效果，旨在为筛选出理囊散的主要活性成分及研制新剂型提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 试验动物

昆明种21日龄雌性小鼠220只（由石河子大学实验动物中心提供，分笼饲养，自由饮水和进食）。

1.2 药物与试剂

理囊散挥发油提取物（自制，每毫升含生药1.00 g）；理囊散乙醇提取物（自制，每毫升含生药1.00 g）；理囊散水提取物（自制，每毫升含生药1.00 g）；苯甲酸雌二醇注射液（上海通用药业股份有限公司，每支1 mL，含雌二醇2 mg，批号：110514）；蒸馏水（自制）。

1.3 仪器

1.4 方法

1.4.1 理囊散不同提取物对小鼠子宫系数的影响试验 取21日龄健康雌性昆明种小鼠，体重9～12 g，随机分为挥发油提取物组、乙醇提取物组、水提取物组，每组各设高、中、低剂量组（剂量分别为6、4、2 g/kg），同时设空白对照组及雌二醇阳性对照组。空白对照组灌服等体积蒸馏水；阳性对照组前3 d灌服等体积蒸馏水，从第四天开始每天腹腔注射雌二醇0.5 mg/kg，连续给药7 d。其他各组按不同剂量灌服给药，每天1次，连续给药7 d。各组小鼠于末次给药后24 h颈椎脱臼处死，剖开腹腔，摘取子宫，除去脂肪组织迅速称子宫湿重，并计算子宫系数（子宫系数=子宫湿重/体重×100%）[3，4]。

2 結果与分析

2.1 理囊散不同提取物对小鼠子宫系数的影响

2.2 理囊散不同提取物对小鼠卵巢的影响

理囊散不同提取物对小鼠卵巢的影响结果见表2。由表2可见，理囊散乙醇提取物在促进小鼠卵泡增长发育方面效果最好，其次是挥发油提取物，最后是水提取物。乙醇提取物组、挥发油提取物组与空白对照组相比，其大型卵泡的百分比差异显著（P<0.05），且乙醇提取物组优于挥发油提取物组；水提取物组与空白对照组相比其大型卵泡的百分比没有显著差异（P>0.05）。进一步表明理囊散中起主要作用的是乙醇提取物，其次是挥发油提取物。

3 小结与讨论

采用小鼠子宫增重法检测药物的雌激素活性作为一种最常用的评价雌激素作用的方法，它具有经济、方便、省时、灵敏度高等优点，某些需要在体内代谢、活化才有雌激素活性的物质和中间代谢产物也可用该方法检测[7-9]。其主要原理是子宫含有大量的雌激素受体，雌激素或具有雌激素活性的化合物通过与该受体结合，可诱发细胞内反应，表现为子宫组织增生[10]。为了减少内源性雌激素对试验结果的影响，本试验选用了刚刚断乳、未性成熟的21日龄雌性小鼠。试验结果表明，雌性小鼠灌服理囊散乙醇提取物后，其子宫系数明显增加，理囊散挥发油提取物作用效果次之，提示理囊散乙醇提取物和理囊散挥发油提取物有明显促进小鼠子宫生长的作用。卵泡成熟的程度是衡量卵巢发育的重要依据之一[11]，本试验中小鼠卵巢的变化结果显示，理囊散乙醇提取物组小鼠成熟卵泡所占的比例最高、卵泡直径大，与空白对照组相比差异显著（P<0.05），其次是挥发油提取物组，水提取物组成熟卵泡的比例与空白对照组相比没有显著差异（P>0.05）。说明理囊散乙醇提取物、挥发油提取物能促进小鼠卵巢发育并出现排卵，促使性成熟形态学特征提前出现，启动新的发情周期。

本试验通过测定理囊散不同提取物对小鼠子宫系数和卵泡发育的影响，确定了中药复方理囊散中起主要作用的是乙醇提取物，挥发油提取物次之。该结果对改革传统中药制备工艺，实现中兽药安全、稳定、高效、可控的质量要求提供了理论支持。但理囊散乙醇提取物、挥发油提取物都是一种粗提物，其具体有效成分和起主要作用的有效成分尚不明确，还需对其分离纯化后进行更进一步的研究。

参考文献：

[1] 罗瑞卿，谷新利.理囊散治疗奶牛卵巢疾病性不孕症的试验研究[J].乳业科学与技术，2009（5）：243-245.

[2] 谷新利，罗瑞卿，李玉梅，等.中药促孕散和理囊散的急性毒性与蓄积性毒性实验研究[J].石河子大学学报（自然科学版），2009（5）：602-604.

[3] 邵会娟，李炳奇，唐利容，等.中药复方“促孕散”不同溶剂提取物对小鼠生殖器官发育影响研究[J].中兽医学杂志，2010（2）：12-14.

[4] 赵丕文，王大伟，王玲巧，等.用小鼠子宫增重法筛选淫羊藿等10种中药雌激素样作用的实验研究[J].北京中医药大学学报，2006，29（10）：686-689.

[5] 刘勤兴，李炳奇，邵会娟，等.促孕灌注液中黄酮对小白鼠卵巢、子宫及激素的影响[J].西北农业学报，2010，19（5）：32-34.

[6] 胡元亮，王小龙.中药促孕液对小白鼠生殖器官发育和结构的影响[J].畜牧兽医学报，2001，32（5）：426-433.

[7] 郝庆秀，王继峰，牛建昭，等.以小鼠子宫增重实验考察四物汤植物雌激素样作用的配伍规律[J].北京中医药，2009（5）：383-386.

[8] SHELBY M D， NEWBOLD R R， TULLY D B， et al. Assessing environmental chemicals for estrogenicity using a combination of in vitro and in vivo assay[J]. Environ Health Perspect，1996，104（12）：1296-1300.

[9] 郑 光，周志俊，戴旭峰，等.小鼠子宫增重试验检测六种常用有机磷农药拟雌激素样活性[J].癌变·畸变·突变，2004，16（4）：211-213.

[10] 郝庆秀，王继峰，牛建昭，等.熟地等4味中药的植物雌激素作用的实验研究[J].中国中药杂志，2009，34（5）：620-624.

[11] 邵会娟，李炳奇，唐利容，等.中药复方“促孕散”中生物碱的提取方法及其促孕活性研究[J].石河子大学学报（自然科学版），2010（2）：184-188.