芪胶膏的薄层色谱鉴别

张 燕 ，莫晓燕 ，曹 阳 ，胡晓燕 ，陈瑾歆 ，别 俊

(1．四川省南充市中心医院，四川 南充 637000;2．四川省泸州市纳溪区中医院，四川 泸州 646300;3．四川省南充市食品药品检验所，四川 南充 637000;4．川北医学院生化教研室，四川 南充 637000)

芪胶膏是根据南充市中心医院何进主任中医师的经验方，由医院制剂室研制而成的纯中药制剂，由黄芪、阿胶、三七、制何首乌等12味中药组方，用于治疗气血两虚、肝肾不足所致的少气乏力、面色苍白、腰膝酸软、头晕耳鸣等症，临床疗效显著[1]。为了控制该制剂的质量，本试验中以黄芪、三七、制何首乌薄层色谱的定性鉴别作为评价的客观指标。

1 仪器与试药

CP225D型电子分析天平(麦多利斯);超声波清洗器(功率150 W，频率50 kHz);硅胶 G板、硅胶 GF254板(青岛海洋化工厂)。芪胶膏(南充市中心医院，批号为120001);黄芪甲苷对照品(批号为0781-9908)、三七对照药材(批号为120941-200506)、何首乌对照药材(批号为120934-200507)均由中国食品药品检定研究院提供;水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 黄芪

取芪胶膏16 g，置具塞锥形瓶中，加入乙醚20 mL超声脱脂2次，每次10 min，弃去乙醚液。置分液漏斗中，加水饱和的正丁醇萃取4次，第1次40 mL，以后每次30 mL;合并正丁醇萃取液，用氨试液洗涤2次，每次30 mL;弃去洗涤液，回收正丁醇液蒸干，残渣加水5 mL溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1．5 cm，柱高12 cm)，以50 mL水洗脱，弃去水液;再用40%乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，继续用70%乙醇80 mL洗脱;收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取缺黄芪的阴性样品同法制成阴性对照品溶液。取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上，在日光下检视显相同颜色的斑点，置紫外光灯(365 nm)下检视显相同颜色的荧光斑点;阴性对照品溶液无此斑点。见图1。

图1 黄芪薄层色谱图

2．2 三七

按2．1项下方法制备三七供试品溶液和三七阴性对照品溶液。另取三七对照药材1 g加水20 mL，加热回流提取2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水50 mL溶解，自水饱和的正丁醇萃取4次起，按2．1项下方法制成对照药材溶液。分别吸取三七供试品溶液10 μL、三七对照药材溶液5 μL和阴性对照品溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无此斑点。见图2。

图2 三七日光下薄层色谱图

2．3 何首乌

取芪胶膏40 g，置具塞锥形瓶中，加入乙醚30 mL超声脱脂2次，每次10 min，弃去乙醚液，加乙醇50 mL，超声1 h，滤过，滤液蒸干，加乙醇2 mL，取上清液即得供试品溶液。另取缺何首乌的阴性样品同法制成阴性对照品溶液。取何首乌对照药材0．25 g，加乙醇50 mL，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至2 mL作为对照药材溶液。分别吸取供试品溶液20 μL、对照药材溶液和阴性对照品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯 -冰醋酸(15 ∶1．5 ∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同的黄色斑点，阴性对照品溶液无此斑点。见图3。

3 讨论

由于中药复方成分复杂，提取液中溶出物质较多，既有待测成分也有其他杂质，常常由于相互干扰或背景污染而难以获得满意的分离效果。因此，供试品溶液前处理时，应根据制剂中所含的不同成分及所需鉴别成分理化性质的不同，选择合适的前处理工艺。如在制备黄芪的供试品溶液时，根据制剂特点先选用乙醚去脂，再以水饱和的正丁醇提取，取蒸干后的样品点样，得到的薄层色谱图中样品的斑点较深，考虑可能为杂质影响所致，遂增加过D101型大孔吸附树脂柱以去掉部分水溶性杂质。结果显示，过柱后的黄芪供试品溶液的薄层色谱图斑点清晰，分离效果较好。

图3 何首乌日光下薄层色谱图

三七与黄芪的主要成分均为三萜皂苷类[2]，本试验曾采用2010年版《中国药典(一部)》三七药材项下的展开剂三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)的下层溶液进行展开，但相邻物质的分离效果较差。后采用正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂，展开效果较好[3]。制何首乌选用对照药材何首乌，采用2010年版《中国药典(一部)》何首乌药材项下的展开剂[3]，展开效果较差，后改用参考抗脑衰胶囊何首乌鉴别项下的展开剂，分离效果较好。

本试验通过系统研究，对芪胶膏样品中黄芪、三七、何首乌建立了薄层色谱定性鉴别方法。所建立的方法专属性强，操作简便，结果准确可靠，重现性好，可用于芪胶膏的质量控制。

[1]何 进，罗志敏，张 燕，等．芪胶生血汤治疗慢性疲劳综合征的临床观察[J]．西部医学，2010，22(7):1 201-1 205．

[2]郑虎占，董泽宏，佘 靖．中药现代研究与应用[M]．北京:学苑出版社，1998:201-202．

[3]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:11，909，164．